非洲菊花瓣RNA提取方法的改进

利用异硫氰酸胍一步法和植物总RNA提取试剂盒（RNeasy Plant Mini Kit）提取非洲菊（Gerbera hybrida）花瓣中总RNA时存在多糖的干扰。实验中利用异硫氰酸胍一步叶提取总RNA,在RNA沉淀后,再次加入适量变性液,冻融2次,再加热至45℃使RNA完全溶解;试剂盒提取时,适当延长各提取步骤的离心时间,并增加DEPC H2O溶解RNA的时间。通过以上操作方法的改进可排除多糖的干扰,得到高质量的总RNA。为进一步利用Northern杂交技术研究非洲菊中花色素苷基因的表达,进行花色改良提供了方便、有效的实验手段。     

三七总RNA提取方法的对比研究

比较利用改进的异硫氰酸胍一步法、异硫氰酸胍高盐法、CTAB法和Thomas’RNA提取法等4种方法提取三七根茎2个部位总RNA的可行性。结果表明,改进的异硫氰酸胍一步法和异硫氰酸胍高盐法能有效地抑制酚类物质、多糖及皂苷等次级代谢产物对总RNA的影响,可从三七根茎中获得质量高、完整性好的总RNA。RT—PCR分析显示提取的总RNA具有反转录活性。这2种方法具有快速、简单、有效的特点。     

家蝇总RNA的提了方法及其改进

本文采取异硫氰酸胍：氯仿一步法,成功地从富含RNase的家蝇腹部提取出完整的总RNA,并针对家蝇腹部富含蛋白酶的特点,对一步法的某些细节做了适当的改进,检测结果表明,用这种方法提取的RNA质量高,可以用于地进一步的分子生物学实验。     

几种提取白木香茎干总RNA方法的比较

目的:通过比较多种RNA提取方法,确定白木香茎干RNA提取的有效手段,为白木香伤害形成沉香药材的分子研究奠定基础。方法:取2年生白木香茎,分别用CTAB法、TRIzol法、异硫氰酸胍-SDS法、Qiagen试剂盒和Nor gen试剂盒法提取总RNA,通过琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度法测定其产量与质量,并通过cDNA合成及小样本克隆测序检查RNA的可用性。结果:异硫氰酸胍-SDS法及Norgen试剂盒法提出的RNA条带清晰,完整性好;D260nm/D280nm值可达2.0左右,纯度较高,其产量足够应用于cDNA合成;其他方法不能提出RNA。结论:异硫氰酸胍-SDS法及Norgen试剂盒法可用于白木香茎干RNA提取。     

从棉铃虫体中提取总RNA的一种有效方法

昆虫组织细胞中含有大量的RNA酶 ,在提取其RNA时 ,防止RNA酶的降解 ,是保证所得RNA片段完整的关键。目前提取动物组织细胞总RNA的方法主要采用“异硫氰酸胍 酚 氯仿抽提”一步法操作 ,但从昆虫组织细胞中提取RNA尚无明确的方法。本实验根据昆虫组织细胞中RNA的分子结合其它蛋白等次生物质的特性不同 ,适当的调整该方法 ,从棉铃虫中提取到了完整、无降解、纯度高的RNA ,适用于Northern杂交和cDNA合成等分子生物学操作     

藤茶叶片总 RNA 的提取及苯丙氨酸解氨酶基因（pal）片段的克隆

藤茶叶片富含多酚、多糖以及黄酮类化合物,严重干扰了其总RNA的提取。实验在裂解前先用70%丙酮对藤茶叶片冷冻研磨材料进行多次抽提,然后采用试剂盒提取法、Trizol法和异硫氰酸胍法提取总RNA。结果表明,经丙酮预处理后,上述3种方法均能从藤茶叶片中成功提取到高质量的RNA,其完整性好,纯度高,D260 nm/D280 nm值介于1.8~2.0之间,产率为22.74~33.66μg/g。以提取的总RNA逆转录的c DNA为模板进行RT-PCR,克隆到一条长度为817 bp的pal片段。经Blast比对分析,该基因片段与葡萄、茶树等物种的pal之间具有较高的同源性。     

新生隐球菌总RNA抽提方法的实验研究

目的探讨快速获取高质量的新生隐球菌总RNA的实验方法。方法选取新生隐球菌的荚膜株、荚膜缺陷株,分别设计采用4种方法提取总RNA:酸洗玻璃珠法、液氮研磨法、异硫氰酸胍一步法、冷酸洗玻璃珠联合Yeast RNA kit法。用紫外线分光光度计测量其OD260、OD280的值,并且进行琼脂糖凝胶电泳,同时应用定量PCR法鉴定RNA质量。结果酸洗玻璃珠法、液氮研磨法、异硫氰酸胍一步法、冷酸洗玻璃珠联合Yeast RNA kit法的RNA产量分别为0.2μg/105细胞、0.4μg/105细胞、0.1μg/105细胞、0.6μg/105细胞。结论冷酸洗玻璃珠联合Yeast RNA kit法提取的RNA均一性和完整性最好,是简便、快捷地提取具有荚膜和细胞壁双重屏障的新生隐球菌RNA的理想方法。     

几种提取RNA的方法

以肝脏组织和NDV感染的鸡胚尿囊液为例,简单介绍了几种提取细胞或组织液中总RNA及mRNA的方法－SOD－蛋白酶K法、异硫氰酸胍法、loigo(dT）纤维素亲和层析法。SDS－蛋白酶K法提取RNA经济可靠,但纯度稍低;异硫氰酸胍法适于提取细胞中的总RNA,纯度较高;利用ligo(dT)能与mRNA poly（A^ )尾结合的特性提取组织细胞中的mRNA.     

檀香心材总RNA提取方法的比较研究

为筛选檀香心材总RNA提取方法,对5种提取方法进行比较研究,包括Trizol法、改良CTAB法、SDS酸酚法、异硫氰酸胍-CTAB法、异硫氰酸胍-SDS法。结果表明,Trizol法和异硫氰酸胍-CTAB法不能提取出檀香心材总RNA,而SDS酸酚法、改良CTAB法和异硫氰酸胍-SDS法均能提取檀香心材总RNA。SDS酸酚法的A260 nm/A230 nm小于2.0,且RNA产率低,仅为(27.94±1.06)μg g–1,不能满足后续实验要求。而改良CTAB法和异硫氰酸胍-SDS法提取的总RNA带型清晰,完整性好,A260 nm/A280 nm为1.8~2.0,A260 nm/A230 nm大于2.0,RNA产率分别为(79.06±4.22)和(107.00±1.36)μg g–1。分别以改良CTAB法和异硫氰酸胍-SDS法提取的总RNA为模板,通过RT-PCR反应,扩增檀香Actin基因片段,结果二者扩增产物大小相同且条带单一,说明改良CTAB法与异硫氰酸胍-SDS法为檀香心材总RNA提取的较好方法。     

从富含多糖和多酚的柿果中提取具转录活性RNA的方法

通过吸光比值分析 ,反转录实验比较TRIzoL法、Tris 硼酸法、异硫氰酸胍法、市售经典总RNA抽提试剂盒、FlashUNIQ 10柱离心总RNA抽提试剂盒 ,以及改进的CTAB法提取成熟期柿果中的总RNA的可行性 ,结果表明 :改进的CTAB法效果较好 ,柿果中RNA的吸光比值A2 60 A2 3 0 在 1.5～ 2 .0之间 ,A2 60 A2 80 在 1.7～ 1.9之间。采用设定的锚定引物Oligo(dT) 1 2 A分别对提取物进行反转录 ,并结合随机引物进行PCR扩增 ,琼脂糖凝胶电泳 ,结果仅有改进的CTAB法提取的成熟期柿果中的总RNA具有转录活性     

台东苏铁中RNA不同提取方法的比较

苏铁作为古老的裸子植物,对种子植物的起源与演化、遗传多样性与亲缘关系等研究具有重要意义。由于苏铁中含有大量多糖、多酚等次级代谢产物,会以不同形式干扰RNA的提取,而高质量的RNA对分子生物学等研究至关重要。因此,通过异硫氰酸胍法、CTBA法和试剂盒法分别提取台东苏铁的RNA,最终采用改良的异硫氰酸胍法提取台东苏铁总RNA方法效果较好,获得的RNA条带边缘清晰,而且28S RNA条带是18S RNA条带亮度的2倍,A260/A280比值在2.0左右。     

改良异硫氰酸胍法提取玛咖(Maca)叶片中总RNA研究

为了获得质量较高的玛咖总RNA,对其总RNA的提取进行了研究。以玛咖无菌苗叶片为材料,通过改良的异硫氰酸胍法提取其总RNA。结果:所提取的总RNA纯度高、完整性好,电泳条带清晰,OD260/OD280值达到1.90±0.03,总RNA的得率达到252.57±1.12μg/g。表明改良的异硫氰酸胍法适合于玛咖叶片中RNA的提取,所提取的总RNA纯度高、完整性好,为进一步的玛咖分子生物学研究打下良好基础。     

RT-PCR克隆人纤溶酶cDNA大片段

目的:以人胎儿肝脏总RNA为模板,克隆人纤溶酶(plasmin)cDNA大片段。方法:采用异硫氰酸胍一步法提取总RNA,RT-PCR技术获取目的基因。结果:成功地扩增出1.74kb的人纤溶酶基因,并研究了扩增人纤溶酶cDNA大片段的特定实验条件。结论:为克隆cDNA大片段研究提供了简便、快速的方法。     

山药组织总RNA提取方法的比较与分析

采用异硫氰酸胍-巯基乙醇联合变性法、Trizol法和CTAB-LiCl法等3种方法,分别对山药叶片和块茎进行总RNA提取效果进行了比较.结果表明,Trizoi法难以提取RNA,异硫氰酸胍-巯基乙醇联合变性法提取RNA效果不理想,存在DNA污染,这2种方法不适合于富含多糖类物质的山药组织总RNA的提取;CTAB-LiCl法提取叶片和块茎组织总RNA质量高、完整性好、成功率高,可作为山药类植物总RNA提取的首选方法.     

一种广泛适用的RNA提取方法

分离提取高质量的RNA是基因表达、调控与基因工程等研究的基础,而RNase、多糖及多酚类物质严重干扰RNA的分离提取过程.现利用硅藻土对RNase的吸附性,结合PVP、高盐及乙二醇丁醚沉淀等处理,建立了一种广泛适用的RNA提取方法.在富含多糖的玉米胚乳,富含RNase的动物肝脏,多酚多油脂的银杏、麻疯树以及木霉、酵母等10多种RNA提取困难的动、植物与微生物材料中都提取出完整性好,得率高的RNA.RT-PCR实验表明,提取的RNA能够用于后续的分子生物学研究.硅藻土-苯酚法提取RNA的得率是异硫氰酸胍法的3倍多.此外,将分离提取的总RNA经过LiCl与PEG8000加NaCl沉淀步骤有效地去除了大片段RNA,以水稻Osa-mir-156的成熟序列设计特异引物做茎环RT-PCR,结果证明,富集得到的小RNA可以用于miRNA克隆等后续实验.     

草坪草总RNA几种提取方法的比较

分别采用DEPC水法、TRIzol法、CTAB-LiCl沉淀法、SDS-酚法、SDS提取液抽提法以及异硫氰酸胍法等6种方法提取草坪草总RNA,通过检测对各种方法的提取效果进行比较分析。结果表明,DEPC水法是最经济、操作最简单的一种方法,并且提取的RNA质量较好、可靠性高、易于大量制备,是提取草坪草RNA比较理想的方法之一,建议使用该方法。利用TRIzol法提取到的28S rRNA亮度约为18S rRNA的两倍,效果较好,操作简单,符合分子生物学实验要求。CTAB-LiCl沉淀法、SDS-酚法、SDS提取液抽提法也获得较高质量的RNA,但存在不同程度的DNA污染。异硫氰酸胍法提取RNA有明显的蛋白质污染,且RNA部分降解,此种方法不予采用。     

提取高质量人参RNA的方法研究

针对人参组织多酚、多糖类物质含量较高的特点,比较了改良的异硫氰酸胍法、改良的CTAB法和改良的Trizol法等3种不同的RNA提取方法.3种改良的方法均能从人参组织中提取到总RNA.其中改良的Trizol法能有效地抑制酚类物质和多糖对总RNA提取的影响,能从成熟的叶片中获得高质量、完整性好的总RNA,每克新鲜组织RNA产量在90～120!g之间,电泳分析,28SrRNA亮度约为18SrRNA的2倍,A260/A280介于1.8～2.0之间.用改良的Trizol法分离的RNA,已成功进行了RT-PCR及人参叶cDNA文库构建等研究.     

百合花瓣总RNA提取方法的研究

以亚洲百合品种Pollyanna和东方百合品种Sorbonne为试材,在比较异硫氰酸胍法、SDS/酚法与CTAB-L i Cl法提取总RNA效果的基础上,针对百合组织中富含多糖的特点,在Sorbonne提取RNA中加入特殊除多糖步骤,改进了CTAB- L i Cl法.结果表明,改进CTAB- L i Cl法能有效去除多糖,提取到的RNA2 8S r RNA亮度约为18S r RNA的2倍,A2 6 0 / 2 80介于1.8～2 .0之间,A2 6 0 / 2 30为2 .0 ,Pollyanna RNA产率为36 .3μL·g- 1 ,Sor-bonne RNA产率为10 .2 μL·g- 1 ,经RT- PCR获得了特异性条带,说明用改进CTAB- L i Cl法从百合花瓣中提取到的RNA质量好、产率高、完整性强,完全适合于进一步的分子生物学研究.     

富含多糖和次生代谢产物的白桦成熟叶中总RNA的提取

分别采用CTAB法、SDS法、异硫氰酸胍法和缓冲液冰浴-CTAB法从转基因白桦成熟叶中提取总RNA,并对琼脂糖凝胶电泳和紫外光谱分析进行比较。结果表明,缓冲液冰浴-CTAB法提取的总RNA纯度高、完整性好且得率高.应用此法提取的总RNA能够满足RT-PCR和Northern杂交分析要求。     

条斑紫菜丝状体总RNA提取方法比较

目的:为了获得质量较高的条斑紫菜丝状体总RNA,对几种常用提取方法进行研究。方法:以条斑紫菜自由丝状体为材料,比较了用异硫氰酸胍法、CTAB法、SDS/酚法、TRIzol法、RNAplant法提取的RNA的质量和纯度。结果:异硫氰酸胍法提取RNA的成本低,但纯度不高;CTAB法产率较小,且不能完全去除多糖或蛋白质;SDS/酚法未能获得完整的RNA;TRIzol法未能见到5SrRNA条带,且带有杂带;而RNAplant法提取RNA的质量好、纯度高、提取效率高,其D260nm/D280nm值为1.836,经逆转录得到的双链cDNA扩增产物长度在200bp以上。结论:实验结果表明RNAplant法更适于条斑紫菜丝状体总RNA的提取。