肺部侵袭性曲霉菌感染的诊断思路

侵袭性真菌感染(invasive fungal infection,IFI)是免疫低下患者常见的并发症之一,尤其在血液肿瘤患者和造血干细胞移植后患者中,IFI更是影响患者生存和生活质量的重要因素。随着氟康唑在高危人群中的广泛预防性应用,白念珠菌的感染较前已有所减少,而曲霉菌的感染比例则有所增[1]     

半乳甘露聚糖对侵袭性曲霉菌感染的诊断价值

近年来侵袭性曲霉菌感染（invasive aspergillosis,IA）发病率逐渐增多,已经成为免疫功能低下患者致死率高的主要原因。有报道称在造血干细胞移植（HSCT）患者中IA的发病率为2％～26％,     

侵袭性曲霉病的临床诊断评价

近20年来随着肿瘤大剂量化疗、造血干细胞和实体器官移植的发展,机会性真菌感染发病率逐年增加,其中侵袭性曲霉病是肿瘤和移植患者死亡的重要原因。尽管不断有新的抗真菌药物问世,侵袭性曲霉病总体治愈率仅为50％左右^[1]。主要原因是早期诊断困难,导致抗真菌治疗的延误。2002年欧洲癌症-侵袭性真菌感染治疗研究协作组和美国国立变态反应和感染病研究院真菌病研究组（EORTC／MSG）提出根据宿主因素、临床特征、真菌学证据及组织病理,将侵袭性真菌病的诊断分为3级,即确诊、拟诊和疑诊,为临床研究和流行病学研究制定出规范的诊断标准^[2]。     

FISH检测快速诊断曲霉菌感染的临床价值

目的探讨荧光原位杂交技术(FISH)检测曲霉菌感染的可行性和特异性,以期早期病原学诊断临床真菌感染。方法采用地高辛末端标记的18S-1寡核苷酸探针与27例经HE及PAS染色诊断为可疑真菌感染的石蜡包埋组织切片进行FISH检测。结果 HE及PAS染色可疑真菌感染分别为23例和27例。27例可疑真菌感染标本14例检出FISH阳性信号。结果 FISH可以特异性地检测出组织石蜡切片中的曲霉菌,设计不同菌属探针进行靶DNA杂交可以快速检测各种临床标本中的真菌感染,从而作为IFI早期病原学诊断的一种新策略。     

内参标化的肺泡灌洗液GM试验对侵袭性肺曲霉菌病诊断效能的探讨

目的探讨肺泡灌洗液(BALF)半乳甘露聚糖检测(GM试验)内标物质的选择及内标化的方法,以及内标化后的BALF GM试验是否能够提高对侵袭性肺曲霉病(IPA)的临床诊断效能。方法收集2018年5月至2019年1月重庆医科大学附属第一医院临床拟诊为IPA住院患者的BALF标本156例,同时对曲霉菌抗原、钾离子(K~+)、尿素(UREA)、白蛋白(ALB)进行检测,依据组织病理、微生物结果、临床症状及特征、宿主因素等资料将研究对象分为IPA组39例和非IPA组117例,统计分析标化校正和未标化校正的BALF GM试验结果对IPA临床诊断效能的影响。结果标化校正和未标化校正的BALF GM试验I值在两组间均存在显著性差异(P0.001),经ROC曲线分析显示非标化BALF GM试验I值的cut-off值为0.69时,曲线下面积为0.731(P0.001),灵敏度71.8%,特异度70.1%;用K~+、UREA、ALB标化BALF GM试验I值后的ROC曲线分析,各cut-off值分别为0.605、1.905、0.69,曲线下面积分别为0.71、0.653、0.701 (P值分别为0.001、0.004、0.002),灵敏度分别为74.4%、66.7%、69.2%,特异度分别为70.9%、63.2%、69.8%。结论非标化BALF GM试验I值cut-off值为0.69时对IPA的诊断效能最高;用K~+标化后的BALF GM试验I值诊断IPA的效能优于非标化的BALF GM试验结果(P0.001)。     

鲤鱼生长激素基因的PCR扩增、克隆及其序列比较

从鲤鱼(Cyprinus carpio)脑垂体中分离其总RNA,经反转录成为第一条链cDNA。以第一条链cDNA为模板,以合成的两段29个寡聚核苷酸为引物,再经过PCR扩增,合成了鲤鱼的生长激素基因,并把其克隆到大肠杆菌表达载体(P^{blue-ocripx Ks+/-})上。序列分析和限制酶切图谱表明所克隆的鲤鱼生长激素基因的开放读框含有630bp,编码210个氨基酸,其中含有22个氨基酸的信号肽和188个氨基酸的成熟GH序列。我们所克隆的鲤鱼GH基因与Koren发表的鲤鱼GHcDNA的序列在编码区完全一致,但是与chao发表的鲤鱼GHcDNA比较,在编码区核酸序列和氨基酸序列的同源性分别为95．6％和96．7％。     

G试验联合GM试验对恶性血液病患者伴侵袭性真菌病的诊断价值研究

目的探讨血浆(1,3)-β-D-葡聚糖检测(G试验)联合血浆半乳甘露聚糖检测(GM试验)对诊断恶性血液病患者伴侵袭性真菌病(IFD)的临床应用价值。方法收集安徽医科大学第一附属医院血液内科高危侵袭性真菌感染(IFI)病例193例,根据患者血浆G试验和GM试验的临床结果,分析其单项和联合检测时在IFD诊断中的敏感性、特异性、阳性预测值(PPV)、阴性预测值(NPV)。并同时分析GM试验结果在IFD患者治疗过程中的变化趋势。结果在血液肿瘤伴IFD的患者中,单独血浆G试验的检测敏感性、特异性、PPV和NPV分别是71.7%、89.3%、71.7%、89.3%。单独GM试验检测的敏感性、特异性、PPV和NPV分别是54.7%、94.3%、78.4%、84.6%。串联检测(两项同时阳性)的敏感性、特异性、PPV和NPV分别是39.6%、99.3%、95.5%、81.3%。并联检测(两项中任意一项阳性)的敏感性、特异性、PPV和NPV分别是86.6%、84.3%、67.7%、94.4%。17例GM试验阳性患者接受抗真菌治疗后,14例有效,3例无效。治疗有效组血浆GM值均从第2周开始下降,第3周降至正常水平,治疗无效组GM值持续升高,有效组和无效组差异有统计学意义(P0.05)。结论血浆G试验和血浆GM试验对恶性血液病患者伴IFD有较高的临床诊断价值,两者联合检测的临床诊断价值进一步提高,可作为IFI诊断的指标之一;动态监测GM值有利于评估临床抗真菌治疗的疗效。     

87株鲍曼不动杆菌ESBLs、OXA基因的PCR扩增及序列分析

为探讨临床鲍曼不动杆菌耐药性与耐药基因的关系,研究其耐药机制,本研究从临床标本中分离得到鲍曼不动杆菌共87株,同时进行药物敏感性试验;PCR方法检测鲍曼不动杆菌MSBLs及OXA等碳青霉烯类耐药基因并进行序列分析,结果显示其主要携带blaTEM(93.1%)和blaOXA23(74.7%),说明本地区鲍曼不动杆菌对碳青霉烯类抗生素产生耐药性的主要机制与blaTEM和blaOXA23密切相关。     

地衣芽孢杆菌2709碱性蛋白酶编码序列的PCR扩增、克隆及序列测定

在地衣芽孢杆菌NCIB 6816菌株碱性蛋白酶基因已知序列的基础上,通过设计合适的引物,利用PCR(Polymerase Chain Reaction)技术从地衣芽孢杆菌2709菌株的柒色体DNA中扩增了2709碱性蛋白酶的编码序列。对两个克隆的PCR片段的全序列分析结果显示,2709碱性蛋白酶的编码序列同相应的NCIB 6816序列相比有3％左右的碱基组成差异。由此推定的2709碱性蛋白酶的氨基酸序列肯定了2709碱性蛋白酶属典型的subtilisin Carlsberg类,同时还表明来源于不同地衣芽孢杆菌菌株的subtilisin Carlsberg存在着若干氨基酸组成上的差异。     

GM抗原检测对血液病患者侵袭性曲霉病的诊断价值

目的:探讨血清半乳甘露聚糖(GM)抗原检测对于血液病患者侵袭性曲霉病(invasive aspergillosis,IA)的早期诊断和疗效评价的临床意义。方法:选取137例具有侵袭性真菌病IFD高危因素患者的468份血清标本,进行GM试验,检测抗真菌治疗前后GM抗原水平的变化,同时收集患者的临床资料,进行统计学分析,并评价GM检测对于血液病患者IA的诊断价值。结果:以GM检测单次I≥1.0作为阳性界值时,本试验的敏感性、特异性、阳性预测值和阴性预测值分别为90.91%,95.65%95.24%和91.67%,与试剂盒提供的血清GM试验结果的单次I≥1.5的阳性界值相比敏感性明显提高,而特异性无明显降低,因此能够有效区分临床诊断和拟诊两个IA级别。在其他实验室检测和影像学检查的基础上加入GM试验后,IA临床诊断组的人数明显增加。诊断级别与I值总体均数的分布具有相关性,回顾性确诊IA组、回顾性可疑IA组、回顾性排除IA组的I值呈现明显的由高到低的群落分布,且三个诊断级别的I值分布范围的差异有统计学意义。根据阳性界值标准I≥1.0,GM试验阳性早于痰培养阳性平均7.73±8.71 d,也早于CT影像学证据平均6.89±8.02 d。基于GM值阳性时的抢先抗曲霉治疗组的有效率明显提高(P=0.039)。结论:血清GM抗原检测是早期诊断IA的一种有效方法,将单次I≥1.0作为阳性界值具有较好的敏感性和特异性,在阳性检出率和阳性检出时间方面较主要影像学表现和微生物学证据具有一定优势。在高危血液病伴粒细胞缺乏患者中根据GM试验阳性进行抢先抗曲霉治疗,可提高治疗有效率,监测血清GM浓度的动态变化具有评价疗效的重要价值。该研究成果对临床侵袭性曲霉病的诊断和治疗具有一定指导意义。     

NASBA(依赖核酸序列的扩增)及其在病毒检测中的应用

NASBA(nucleic acid sequence based amplification)即依赖核酸序列的扩增技术,是一种扩增RNA的新技术,是由一对引物介导的、连续均一的、体外特异核苷酸序列等温扩增的酶促反应过程。反应在42℃进行,可以在2h左右将模板RNA扩增约109~12倍,不需特殊的仪器。NASBA已经广泛应用于细菌、病毒等多种病原微生物的检测,就NASBA的技术原理及其在病毒检测中的应用作一综述。     

大鼠肝脏脂酶基因的PCR扩增、序列分析和克隆

报导了应用聚合酶链式反应（PCR）技术,扩增大鼠肝脏脂酶基因及其克隆和序列分析的结果．经31个循环的扩增,得到大鼠肝脏脂酶及其N端结构域的cDNA,前者为1508bp的片段,后者为1076bp的片段．克隆后,对此二片段进行了限制性内切酶物理图谱分析,测定了DNA序列,并已将它们克隆到表达载体pGT－d中．     

人胰岛素样生长因子－ⅡcDNA的PCR扩增及序列分析

人胰岛素样生长因子(Human insulin-like growth factor,简称 h IGF)是一类既有细胞分化和增殖活性,又有胰岛素样作用的多肽,包括IGF-Ⅰ和IGF-Ⅱ两种。其中IGF-Ⅰ的功能比较清楚,而IGF-Ⅱ的作用正在研究中,可能在胎儿的生长发育及脑组织和神经系统中起重要作用。IGF-Ⅱ能刺激一些细胞系的生长,对不同的肿瘤起自分泌和旁分泌生长因子的作用。最近又发现IGF-Ⅱ能刺激神经及肌肉的再生。由于天然IGF-Ⅱ的分离困难,我们利用基因工程方法克隆表达IGF-Ⅱc DNA,以获得大量重组蛋白,为研究和应用打下基础。     

人胰岛素样生长因子－ⅡcDNA的PCR扩增及序列分析

人胰岛素样生长因子(Hurman insulin-1ike growth factor,简称h IGF)是一类既有细胞分化和增殖活性,又有胰岛索样作用的多肽,包括IGF—Ⅰ和IGF—Ⅱ两种。其中IGF—Ⅰ的功能比较清楚。而IGF—Ⅱ的作用正在研究中,可能在胎儿的生长发育及脑组织和神经系统中起重要作用。IGF－Ⅱ能刺激一些细胞系的生长,对不同的肿瘤起自分泌和旁分泌生长因子的作用〔1－6〕,最近又发现IGF—Ⅱ能刺激神经及肌肉的再生。由于天然IGF—Ⅱ的分离困难,我们利用基因工程方法克隆表达IGF—Ⅱ c DNA,以获得大量重组蛋白,为研究和应用打下基础。     

人胰岛素样生长因子-2 cDNA的PCR扩增及序列分析

人胰岛素样生长因子(Human Insulin-like growth factor,简称hIGF)是一类既有细胞分化和增殖活性,又有胰岛素样作用的多肽,包括IGF-1和IGF-2两种。其中IGF-1的功能比较清楚,而IGF-2的作用正在研究中,可能在胎儿的生长发育及脑组织和神经系统中起重要作用。IGF-2能刺激一些细胞系的生长,对不同的肿瘤起自分泌和旁分泌生长因子的作用。最近又发现IGF-2能刺激神经及肌肉的再生。由于天然IGF-2的分离困难,我们利     

G试验诊断侵袭性真菌病的干扰因素

(1,3)-β-D-葡聚糖广泛分布在自然界中,是真菌、酵母、藻类、细菌和高等植物细胞壁成分,G试验的主要检测物质即为真菌细胞壁的(1,3)-β-D-葡聚糖。本文总结了引起G试验的假阳性和假阴性因素如药物因素、医疗因素、宿主基础疾病等,旨在帮助临床医生正确评估G试验的检测结果,指导临床实践。     

肺部CT联合血清半乳甘露聚糖实验在白血病并发侵袭性肺曲霉菌病诊断及疗效评价中的应用

目的探讨肺部CT联合血清半乳甘露聚糖实验在白血病并发侵袭性肺曲霉菌病诊断及疗效评价中的应用价值。方法对我院2010年1月~2012年12月期间,收集临床诊断为IPA的白血病患者25例,回顾性分析其CT影像和GM实验。结果 CT表现出现结节及晕征17例,出现楔形实变影3例,弥漫分布粟粒或小结节模糊影4例;1例表现为两肺散在斑片影伴周围"卫星灶"。15例抗真菌治疗有效,治疗过程中GM值降低至正常;8例进展、GM值升高,之后调整抗真菌治疗方案有效、GM值降低;2例患者感染无法控制,GM值上升或虽有下降但一直处于阳性水平。结论肺部CT检查联合血清半乳甘露聚糖(GM)实验可监测临床诊断侵袭性肺曲霉病(IPA)的疗效。