MiR-186-5p通过靶向调控PTTG1抑制肺腺癌细胞的上皮-间质转化

先前研究表明,miR-186-5p在人类许多恶性肿瘤中扮演抑癌基因的作用,但其在肺腺癌上皮-间质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）中的作用并不明确。本研究旨在证明,miR-186-5p可通过靶向调控PTTG1抑制肺腺癌细胞的上皮-间质转化。我们首先分析了miR-186-5p在人肺癌细胞中的表达。荧光定量PCR（QRT-PCR）结果显示,与人正常肺上皮细胞BEAS-2B相比,肺腺癌细胞SPC-A1、A549中的miR-186-5p表达量明显降低。为研究miR-186-5p在肺腺癌细胞中的功能,利用GV369-miR-186-5p表达载体,实现了在A549细胞中的过表达。基因转染结合Transwell侵袭结果显示,与对照质粒转染的A549细胞相比,过表达miR-186-5p的A549细胞的体外侵袭能力明显下降。Western印迹检测细胞中EMT相关标志物揭示,GV369-miR-186-5p转染的A549细胞中的上皮-钙黏着蛋白（E-cadherin）表达明显上调,而神经-钙黏着蛋白（N-cadherin）和波形蛋白（vimentin）表达明显下调。同时,GV369-miR-186-5p转染引起其靶基因--垂体肿瘤转化基因1（pituitary tumor-transforming gene 1,PTTG1）编码蛋白在A549细胞中明显降低。重要的是,过表达miR-186-5p与敲减PTTG1均可导致上皮-钙黏着蛋白表达上调,而神经-钙黏着蛋白和波形蛋白下调|而miR-186-5p和PTTG1表达载体共转染后,3种EMT相关标志物在A549的表达与对照细胞的表达无明显差异,提示过表达PTTG1可抵消miR-186-5p对EMT相关标志物表达的影响。综上所述,miR-186-5p可通过靶向调控PTTG1抑制EMT的发生,进而抑制肺腺癌细胞的侵袭转移。     

MiR-338-3p靶向调控B3GNT3抑制肺腺癌的侵袭和转移

肺腺癌是目前肺癌最常见的组织学亚型,约占肺肿瘤的一半。MicroRNAs(miRNAs)是非常短(20～24个核苷酸)的非编码RNA,miRNA的异常表达与多种人类肿瘤的进展和转移有关。本研究通过GEO数据集GSE19945查询获得肺癌中降低最显著的miRNA即miR-338-3p,并通过Kaplan-Meier Plotter(Kmplot)网站查得低表达水平的miR-338与肺腺癌病人的不良预后有关。利用qRT-PCR检测发现,miR-338-3p在肺腺癌细胞中表达降低(P0.05)。利用GV369-miR-338过表达慢病毒上调A549细胞中的miR-338,利用qRT-PCR检测过表达效率。Transwell细胞侵袭实验发现,miR-338的上调可抑制肺腺癌细胞的侵袭能力(P=0.0007)。基因预测网站分析获得miR-338-3p的靶基因-B3GNT3(β1,3-N-acetylglucosaminyltransferase-3),生物信息学数据库分析发现,B3GNT3在肺腺癌组织中升高。双荧光素酶分析验证miR-338和B3GNT3可靶向结合(P0.05)。Western印迹结果证明,过表达miR-338后B3GNT3蛋白的表达下降,且差距具有统计学意义(P0.05)。Transwell实验证明,miR-338-3p可通过靶向调控B3GNT3抑制肺腺癌细胞的侵袭和转移(P0.05)。综上,miR-338-3p在肺腺癌组织和细胞中表达降低,且miR-338-3p可靶向调控B3GNT3抑制肺腺癌的侵袭和转移。     

miR-143-3p通过靶向TAK1抑制肺癌增殖和侵袭

目的:分析miR-143-3p在肺癌细胞中的表达情况以及对肺癌进展的作用。方法:通过starBase数据库和肺癌病例组织检测分析miR-143-3p在肺癌组织和正常对照组织中的表达差异;分析miR-143-3p在肺癌细胞HCC27、H1975、A549和肺上皮细胞BEAS-2B中的mRNA水平差异;采用CCK-8法检测miR-143-3p对肺癌细胞增殖活性的影响;采用Transwell实验检测miR-143-3p对肺癌细胞迁移和侵袭的影响;通过qRT-PCR检测miR-143-3p对整合素α6(ITGA6)、锚蛋白重复及PH结构域3(ASAP3)、黑色素瘤相关抗原A9(MAGE-A9)和转化生长因子β激活激酶1(TAK1)表达的影响;通过Western印迹检测miR-143-3p对TAK1蛋白表达的影响。结果:starBase分析和肺癌病例组织检测结果显示miR-143-3p在肺癌组织中低表达,同样地,miR-143-3p在肺癌细胞中的表达也显著低于正常肺上皮细胞;过表达miR-143-3p抑制了肺癌细胞的增殖活性、迁移和侵袭能力;过表达miR-143-3p显著抑制TAK1的表达。结论:miR-143-3p在肺癌中通过靶向TAK1抑制肺癌的增殖和侵袭,miR-143-3p在肺癌进展中详细的分子作用机制和信号通路仍须进一步探讨。     

circ＿0015756通过调控miR-515-5p/HMGB3轴影响肺癌细胞增殖、凋亡和迁移

为探讨环状RNA 0015756(circ_0015756)对肺癌细胞增殖、凋亡和迁移的影响和潜在机制,该研究采用实时定量PCR(RT-qPCR)分析肺癌组织和癌旁组织中circ_0015756和微小RNA(miR)-515-5p的表达水平。同时,将circ_0015756小干扰RNA(si-circ_0015756)、miR-515-5p模拟物、si-circ_0015756+miR-515-5p抑制物分别转染肺癌细胞A549,采用四甲基偶氮唑蓝实验、平板克隆实验检测A549细胞的增殖能力,采用流式细胞术分析A549细胞的凋亡率,采用划痕愈合实验和Transwell实验检测A549细胞的迁移能力。蛋白质印迹法测定高迁移率族蛋白3(HMGB3)的表达水平。双荧光素酶分析circ_0015756与miR-515-5p、miR-515-5p与HMGB3的靶向关系。结果显示,肺癌组织中circ_0015756的相对水平显著高于癌旁组织(P0.05),miR-515-5p的相对水平显著低于癌旁组织(P0.05)。干扰circ_0015756表达后A549细胞增殖抑制率、凋亡率、miR-515-5p的相对水平显著升高(P0.05),集落形成数、迁移距离、迁移细胞数、HMGB3蛋白的相对水平显著降低(P0.05)。过表达miR-515-5p后A549细胞增殖抑制率、凋亡率显著升高(P0.05),集落形成数、迁移距离、迁移细胞数、HMGB3蛋白的相对水平显著降低(P0.05)。抑制miR-515-5p表达明显减弱干扰circ_0015756表达对A549细胞增殖、集落形成、迁移以及HMGB3蛋白表达的影响(P0.05)。circ_0015756与miR-515-5p直接结合,miR-515-5p与HMGB3直接结合。总之,干扰circ_0015756通过靶向上调miR-515-5p/HMGB3轴抑制肺癌细胞增殖和迁移,诱导细胞凋亡。     

miR-28-5p通过靶向MTSS1调控非小细胞肺癌细胞的恶性生物学行为

[目的]探讨miR-28-5p通过靶向MTSS1调控非小细胞肺癌细胞的恶性生物学行为。[方法]用双萤光素酶检测试剂分析荧光素酶活性,同时应用RT-PCR检测MRC5细胞和A549细胞中miR-28-5p和MTSS1 mRNA水平;用Lipofectamine法将miR-NC、miR-28-5p inhibitor和miR-28-5p mimic转染到A549细胞,培养48h后分别采用MTT法、流式细胞术和Transwell法检测细胞增殖、凋亡和迁移情况,同时蛋白印迹法法检测A549细胞中MTSS1、PI3K、AKT和Caspase-3表达。[结果] miR-28-5p与MTSS1有潜在的结合位点;转染miR-28-5p mimic可明显降低MTSS1-WT的荧光素酶活性,对MTSS1-MUT没有影响,而miR-28-5p inhibitor则表现出相反作用,表明miR-28-5p与MTSS1存在靶向调节作用;A549细胞中miR-28-5p mRNA的相对表达量高于MRC5细胞(P<0.05),A549细胞中MTSS1 mRNA的相对表达量低于MRC5细胞(P<0.05);通过miR-28-5p inhibitor降低miR-28-5p后,A549细胞凋亡、MTSS1、MTSS1、PI3K、AKT和Caspase-3的表达增加,细胞增殖和迁移降低(P<0.05);通过miR-28-5p mimic增加miR-28-5p后,A549细胞凋亡、MTSS1、MTSS1、PI3K、AKT和Caspase-3的表达降低,细胞增殖和迁移增加(P<0.05)。[结论] miR-28-5p在A549细胞中高表达,通过基因干预降低miR-28-5p表达后,miR-28-5p通过靶向MTSS1的3’端非编码区,提高MTSS1的翻译水平,抑制A549细胞的恶性生物学行为。     

骨髓间充质干细胞外泌体miR-190a-5p通过靶向KLF15抑制肺癌细胞迁移和侵袭

目的:探讨骨髓间充质干细胞(BMSC)来源的外泌体miR-190a-5p对肺癌细胞的影响。方法:通过超速离心获得BMSCs外泌体,透射电镜观察外泌体形态,采用纳米颗粒示踪分析(NTA)检测外泌体粒径,利用Western印迹检测外泌体上的标志蛋白CD63、CD9及HSP70;选取肺癌细胞系A549、LK79、H1975和HCC827,以及人正常上皮细胞BEAS-2B检测对比miR-190a-5p在这些细胞中和BMSCs衍生的外泌体(BMSC-exosome)中的表达量;双萤光素酶报告基因检测验证Krüppel样因子15(KLF15)是否为miR-190a-5p的靶基因;定量PCR(qRT-PCR)和Western印迹检测miR-190a-5p对KLF15的表达调控;Transwell法检测外泌体对肺癌细胞迁移和侵袭的影响。结果:BMSCs外泌体呈圆形,粒径集中在150～200 nm,标志蛋白CD63、CD9及HSP70阳性表达;BMSCs外泌体中miR-190a-5p的相对表达量均高于在4种肺癌细胞及正常肺细胞BEAS-2B中的表达;双萤光素酶报告基因检测KLF15是miR-190a-5p的靶基因;BMSCs外泌体与miR-190a-5p mimics均能使肺癌细胞中的miR-190a-5p含量升高,并抑制KLF15的mRNA和蛋白表达,从而抑制肺癌细胞迁移和侵袭。结论:BMSCs外泌体miR-190a-5p通过下调KLF15抑制肺癌细胞迁移和侵袭,为肺癌的诊断和治疗提供了新的思路。     

lncRNA BLACAT1通过抑制miR-374b-5p促进非小细胞肺癌细胞增殖和转移

目的:研究长链非编码RNA BLACAT1在非小细胞肺癌发生和转移过程中的作用机制。方法:starBase软件分析TCGA数据库中肺腺癌及肺鳞癌与癌旁组织之间BLACAT1表达差异;qRT-PCR检测人非小细胞肺癌细胞A549、HCC827、NCI-H1299、NCI-H23和正常肺上皮细胞BEAS-2B中BLACAT1的转录水平差异,筛选BLACAT1高表达非小细胞肺癌细胞系;CCK-8检测BLACAT1对非小细胞肺癌细胞增殖能力的影响;Transwell检测BLACAT1对非小细胞肺癌细胞迁移和侵袭能力的影响;starBase软件预测BLACAT1作用的miRNA,采用qRT-PCR验证敲低BLACAT1对预测miRNA表达的影响,筛选与BLACAT1相互作用的miRNA,双萤光素酶报告基因实验验证结果;CCK-8检测BLACAT1/miR-374b-5p对非小细胞肺癌细胞增殖能力的影响;Transwell检测BLACAT1/miR-374b-5p对非小细胞肺癌细胞迁移和侵袭能力的影响;Western印迹检测非小细胞肺癌细胞转移相关基因的蛋白表达水平。结果:肺腺癌及肺鳞癌组织中BLACAT1表达量显著高于癌旁组织;非小细胞肺癌细胞A549的BLACAT1表达量最高;敲低BLACAT1降低A549细胞活力、迁移和侵袭能力;BLACAT1作为海绵吸附miR-374b-5p;敲低BLACAT1增加miR-374b-5p的表达,抑制非小细胞肺癌细胞增殖、迁移和侵袭。结论:BLACAT1通过抑制miR-374b-5p促进非小细胞肺癌细胞增殖和转移。     

miR-670-5p对肺癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响

目的: 探讨miR-670-5p对肺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响,分析其调控WW结构域氧化还原酶基因(WWOX)的机制。方法: 收集2016年1月至2017年10月收治的28例肺癌组织和对应癌旁组织,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测肺癌组织、癌旁组织中miR-670-5p的表达水平。将肺癌细胞A549分为anti-miR-NC组(转染anti-miR-NC)、anti-miR-670-5p组(转染anti-miR-670-5p)、anti-miR-670-5p+si-NC组(转染anti-miR-670-5p与si-NC)、anti-miR-670-5p+si-WWOX组(转染anti-miR-670-5p与si-WWOX)。转染48 h后,RT-qPCR或蛋白质印记(Western blot)检测转染效果。细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞活力;Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力;Western blot检测P21、上皮细胞钙粘蛋白(E-cadherin)和基质金属蛋白酶2(MMP-2)蛋白的表达水平。双荧光素酶报告基因实验和Western blot验证miR-670-5p和WWOX的靶向关系。结果: 肺癌组织中miR-670-5p的表达水平较癌旁组织显著升高(P＜0.05)。抑制miR-670-5p可抑制MMP-2蛋白表达(P＜0.05),促进P21和E-cadherin表达(P＜0.05),抑制A549细胞增殖、迁移和侵袭(P＜0.05)。WWOX是miR-670-5p的靶基因,miR-670-5p负调控WWOX表达。抑制WWOX可部分逆转anti-miR-670-5p对A549细胞增殖、迁移和侵袭的影响(P＜0.05)。结论: miR-670-5p通过靶向WWOX能够促进肺癌细胞增殖、迁移、侵袭。     

miR-195-5p在结直肠癌和肺癌细胞中的功能差异性研究

目的:分析miR-195-5p在结直肠癌和肺癌组织及相应肿瘤细胞中的表达差异和功能差异。方法:通过starBase数据库调取癌症基因组图谱(TCGA)中miR-195-5p表达数据,分析其在结直肠癌和肺癌组织中的表达差异;采用人结直肠癌细胞系SW620、小鼠结直肠癌细胞系MC38、人肺癌细胞系A549和小鼠肺癌细胞系344SQ进一步分析miR-195-5p在不同肿瘤细胞中的表达差异;采用CCK-8法检测miR-195-5p过表达对SW620和A549细胞增殖的影响;采用Transwell实验检测mi R-195-5p过表达对SW620和A549细胞侵袭与迁移能力的调控差异。结果:生物信息学分析结果显示miR-195-5p在结直肠癌组织中显著高表达,而在肺癌组织中的表达量却低于正常对照;与组织表达结果类似,结直肠癌细胞中miR-195-5p的表达量显著高于肺癌细胞;过表达miR-195-5p抑制人肺癌细胞A549的增殖、迁移与侵袭,而在人结直肠癌细胞SW620中结果却截然相反。结论:miR-195在不同类型的肿瘤中表达不同,功能也存在差异,不能简单地概括为一种抑癌因子或致癌因子,miR-195在肿瘤中的作用仍有待进一步研究。     

miR-490-3p通过靶向调控TGFBR1抑制非小细胞肺癌细胞的增殖和侵袭

目的:以非小细胞肺癌A549细胞为模型,探讨miR-490-3p在肺癌发生发展过程中的作用及其调控机制。方法:通过miRBase数据库获得miR-490-3p序列,设计miR-490-3pmimics并转染A549细胞,CCK8、细胞划痕及Transwell实验分别检测miR-490-3p过表达对A549细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响;使用miRwalk在线工具预测miR-490-3p可能的调控基因,通过实时荧光定量PCR及Western印迹对候选调控基因进行筛选,最后通过双萤光素酶报告基因实验验证miR-490-3p与调控基因之间的靶向关系。结果:过表达miR-490-3p可显著抑制A549细胞的增殖、侵袭和迁移能力;在预测的miR-490-3p候选靶基因中,选择与细胞增殖、迁移等表型相关的RASAL2、TGFBR1、PAPPA、HMGA2、TGFA靶基因进行实时荧光定量PCR及Western印迹筛选,结果仅TGFBR1基因在mRNA和蛋白水平的表达与miR-490-3p水平呈负相关,且双萤光素酶报告实验证实miR-490-3p可直接与TGFBR1的3'-UTR结合并抑制其表达。结论:miR-490-3p通过靶向调控TGFBR1的表达抑制非小细胞肺癌A549细胞的增殖和侵袭。     

miR-338-3p靶向调控RNF121促进人肺癌A549的增殖及侵袭能力

近期研究表明,miR-338-3p对肺癌的增殖和侵袭具有重要作用,但其通过靶向调控环指蛋白121(ring finger protein 121,RNF121)在肺癌增殖和侵袭中的研究尚不清楚.为探究其机制,体外培养正常肺细胞系MRC-5和非小细胞肺癌系A549,采用qRT-PCR和Western印迹检测发现,A549...     

miR-181-5p下调人非小细胞肺癌细胞KLF6表达并抑制其增殖、迁移和侵袭

[目的]探讨miR-181-5p下调人非小细胞肺癌细胞KLF6表达并抑制其增殖、迁移和侵袭的作用。[方法]检测30例肺癌和癌旁组织中miR-181-5p和KLF6 mRNA水平,并分析miR-181-5p与NSCLC患者临床病理特征的相关性。用萤光素酶检测miR-181-5p对KLF6的调控作用,将miR-NC、miR-181-5p inhibitor和miR-181-5p mimic转染到A549细胞,采用RT-PCR法检测各组A549细胞中miR-181-5p和KLF6 mRNA表达,同时分别采用MTT法和Transwell法检测各组A549细胞增殖、迁移和侵袭情况。[结果]肺癌组织的miR-181-5p和KLF6 mRNA表达水平均低于癌旁组织(P<0.05);miR-181-5p的表达水平与年龄、性别和是否吸烟不相关(P>0.05);miR-181-5p的表达水平与肿瘤直径、是否转移、TNM分期相关(P<0.05);miR-181-5p与KLF6有潜在的结合位点;转染miR-181-5p mimic可明显增加KLF6-wt的荧光素酶活性,对KLF6-mut没有...     

miR-424-5p通过下调BCL-2的表达抑制人肺癌A549细胞增殖

microRNAs(miRNAs)是一类在真核生物中广泛存在的长度约为20～22个核苷酸的单链非编码小RNA,通过与其靶基因mRNA的3′非翻译区（3′UTR）结合发挥转录后抑制作用,参与调节细胞生长增殖、细胞代谢、细胞凋亡以及肿瘤的发生发展等过程。为研究microRNA-424-5p（miR-424-5p）在肺癌细胞中的作用及机理,利用lipo2000转染试剂将miR-424-5p mimics转染入人的非小细胞型肺癌细胞(NSCLC)A549中,流式细胞术检测A549细胞的周期变化及凋亡情况,发现细胞生长阻滞于G1/G0期且凋亡率显著上升。利用克隆形成实验和CCK-8法分别检测,发现miR-424-5p导致A549细胞增殖能力及活力降低。用在线数据库预测出抗凋亡基因BCL-2可能是miR-424-5p的靶基因,随后扩增BCL-2 mRNA 的3′UTR,采用双荧光素酶报告实验及Western印迹检测证明BCL-2确为miR-424-5p的靶基因。构建BCL-2的真核表达载体pCMV-HA-BCL-2,与空载分别转染A549细胞后发现过表达BCL-2可抵消miR-424-5p引起的细胞周期阻滞及细胞凋亡。以上结果提示,miR-424-5p可以通过下调BCL-2的表达来抑制肺癌细胞增殖。     

MiR-150-5p通过靶向调控Rab1A抑制乳腺癌细胞MDA-231的上皮-间质转化

先前的研究表明,miR-150-5p发挥抑癌基因的作用,调控肿瘤细胞的侵袭与转移。然而,关于其在乳腺癌细胞侵袭与转移中的机制尚不明确。本实验旨在研究miR-150-5p负向调控Rab1A在乳腺癌细胞上皮-间质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）中的作用。双荧光素酶的结果显示,miR-150-5p可负向调控Rab1A。荧光定量PCR (qRT-PCR) 结果显示,miR-150-5p在乳腺癌细胞MCF-7及MDA-MB-231（MDA-231）中的表达水平明显低于正常乳腺上皮细胞MCF-10A; 在MDA-231中过表达miR-150-5p后,qRT-PCR结果显示,Rab1A mRNA的表达水平明显降低。Western印迹结果显示,过表达miR-150-5p后,miR-150-5p组细胞中的Rab1A、波形蛋白(vimentin)及N-钙黏着蛋白(N-cadherin)的表达水平相对于对照组（NC）细胞明显降低,而E-钙黏着蛋白(E-cadherin)的表达水平明显增加。Transwell侵袭和划痕实验显示,与miR-150-5p+Con组细胞相比,miR-150-5p+Rab1A组细胞的侵袭和迁移能力明显增加。qRT-PCR结果显示,miR-150-5p+Rab1A组细胞的Rab1A mRNA表达水平明显增加。Western印迹结果显示,miR-150-5p+Rab1A组细胞中的波形蛋白、N-钙黏着蛋白表达水平明显增加, 而E-钙黏着蛋白表达明显降低,过表达Rab1A后显著逆转了miR-150-5p对EMT的影响。综上所述,miR-150-5p可以通过负向调控Rab1A抑制EMT,进而抑制乳腺癌细胞的侵袭和迁移。     

吞噬细胞运动蛋白1通过NF-κB/snail信号通路促进肺腺癌细胞A549的上皮-间质转化

吞噬细胞运动蛋白1(engulfment and cell motility 1,ELMO1)在许多恶性肿瘤的侵袭转移中发挥重要作用,但其在肺腺癌侵袭转移中的研究相对较少。本研究旨在探讨ELMO1在肺腺癌上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)中的作用,为临床预防肺腺癌的侵袭和转移提供理论和实验依据。Western印迹结果显示,ELMO1在人正常肺上皮细胞BEAS-2B中的蛋白质表达水平低,而在人肺腺癌细胞A549中表达水平高。si ELMO1/A549细胞组中ELMO1的表达水平明显降低。用白细胞介素-8(interleukin-8,IL-8)刺激肺腺癌细胞A549 24 h后,趋化运动实验结果显示,IL-8浓度为100 ng/m L时为最适刺激浓度,此时肺腺癌细胞A549具有最强的趋化运动能力,增高或降低IL-8的浓度时细胞的趋化运动能力均下降。Transwell侵袭实验结果显示,用IL-8刺激24 h后,si ELMO1/A549细胞相比于Scr/A549细胞组的侵袭转移能力明显减弱。Western印迹结果显示,与未用IL-8刺激或用IL-8和抑制剂BAY11-7082同时刺激的相比,si ELMO1/A549细胞较Scr/ELMO1A549细胞组E-cadherin蛋白的表达上调,Vimentin蛋白的表达下调,p-IκBα、细胞核中snail的蛋白质表达水平均降低。综上所述,ELMO1可以通过NF-κB信号通路影响snail的转核,从而促进肺腺癌细胞A549的上皮-间质转化。     

MEKK3稳定表达细胞株的建立及其对A549细胞增殖的影响

目的 构建人MEKK3基因编码区序列（cDNA）的真核表达载体、建立其稳定表达细胞株并观察其对肺腺癌细胞增殖的影响.方法 从A549细胞中提取总RNA,应用RT-PCR扩增MEKK3 cDNA的全长序列后克隆入pcDNA3.1/hygro（＋）质粒中,构建成MEKK3基因的真核表达载体,然后转染入人肺腺癌A549细胞中,潮霉素筛选稳定转染克隆,通过MTT实验,研究转染MEKK3基因前后细胞增殖的变化.结果 重组载体经酶切鉴定和测序证实目的 基因正确无误,Western印迹检测结果显示MEKK3基因在A549细胞中具有良好的表达;荧光实时定量PCR结果表明MEKK3基因在其稳定转染的A549细胞克隆中表达上调,与空载体稳定转染及未转染细胞比较,差异具有统计学意义（P＜0.05）;MTT结果显示MEKK3表达上调的稳定克隆组,A549细胞的增殖活性显著增强（A570=0.876 1±0.074 5）,明显高于空载体稳定转染组（A570=0.582 8±0.070 3）及未转染亲代细胞组（A570=0.584 9±0.035 2）,差异具有统计学意义（P＜0.01）,而后两者之间差异无统计学意义（P＞0.05）.结论 MEKK3表达上调可导致肺腺癌细胞的增殖增强.     

miR-138-5p靶向缺氧诱导因子1α对胰腺癌PANC-1细胞生长和转移的调节作用

目的探索miR-138-5p对胰腺癌细胞PANC-1生长、转移的影响及其相关机制。方法应用荧光实时定量PCR (real-time quantitative PCR, RT-PCR)检测miR-138-5p及其缺氧诱导因子1α(hypoxia inducible factor 1 alpha, HIF-1α)在PANC-1细胞中的表达。应用荧光素酶报告检测验证miR-138-5p与HIF-1α之间的生物学关系。通过体外试验研究miR-138-5p、HIF-1α在PANC-1细胞中的生物学功能,Western blot检测蛋白表达情况;CCK-8检测PANC-1细胞增殖能力;Transwell试验检测PANC-1细胞侵袭能力;划痕试验检测PANC-1细胞迁移能力。结果 miR-138-5p表达明显下调HIF-1α表达水平(P<0.01),生物信息学预测和荧光素酶报告试验证明miR-138-5p通过直接结合HIF-1α 3′-未翻译区域(3′-UTR)抑制HIF-1α。在PANC-1细胞中,miR-138-5p过表达可抑制HIF-1α表达及细胞增殖、侵袭、迁移,且差异有统计学意义(P<0.01)。结论 miR-138-5p结合HIF-1α 3′-UTR的沉默HIF-1α;miR-138-5p通过打靶HIF-1α而抑制胰腺癌细胞PANC-1增殖和转移。HIF-1α可能是胰腺癌的治疗靶点。     

长链非编码RNA SNHG17通过抑制p57表达促进肺癌进展

目的:分析肺癌中长链非编码RNA(lncRNA)小核仁RNA宿主基因17(SNHG17)与p57的表达相关性及功能联系。方法:通过starBase数据库分析SNHG17和p57在肺癌组织和正常组织中的表达差异;采用人正常肺上皮细胞BEAS-2B和人肺癌细胞系A549、H1975进一步分析SNHG17和p57在肺癌细胞和正常肺细胞中的表达差异;采用qRT-PCR和Western印迹检测si-SNHG17在mRNA和蛋白表达方面对SNHG17和p57的影响;采用CCK-8法检测siSNHG17对A549细胞增殖的影响;采用Transwell法检测si-SNHG17对A549细胞迁移和侵袭能力的影响。结果:通过数据分析发现SNHG17在肺腺癌和肺鳞癌组织中显著高表达,而p57在肺腺癌和肺鳞癌组织中却显著低表达;与正常肺细胞相比,SNHG17和p57在肺癌细胞中的表达趋势与在肺癌组织中一致;SNHG17和p57的表达呈负相关;沉默SNHG17使p57的表达一定程度上调,A549细胞的增殖、迁移和侵袭能力受到抑制。结论:SNHG17在肺癌中高表达,促进肺癌细胞增殖,并通过调节p57的表达来抑制肺癌细胞的增殖和迁移。SNHG17和p57在肺癌中的具体作用机制仍有待进一步研究。     

红色诺卡氏菌细胞壁骨架对肺癌细胞的抗癌作用及机制

前人研究发现红色诺卡氏菌细胞壁骨架(N-CWS)具有较好的抗癌活性,然而其对肺癌的抗癌作用机制尚不清楚。本研究旨在揭示N-CWS对肺癌细胞的抗癌作用及机制。通过平板克隆形成实验测定N-CWS对人肺腺癌细胞系A549菌落形成的影响,发现N-CWS可按照浓度依赖性方式降低A549细胞的菌落形成能力(p0.05)。通过5-乙炔基-2'-脱氧尿苷(EdU)法测定N-CWS对肺癌细胞增殖能力的影响,发现N-CWS可按照浓度依赖性方式降低EdU阳性细胞比例(p0.05)。通过Transwell小室和伤口愈合实验评估N-CWS对肺癌细胞侵袭和迁移能力的影响,发现N-CWS以A549浓度依赖性方式降低细胞的侵袭和迁移数量及伤口愈合百分比(p0.05)。通过qRT-PCR和Western blotting检测N-CWS对A549细胞E-cadherin、IL-6和MMP-9表达的影响,发现N-CWS以浓度依赖性方式上调了A549细胞的E-cadherin mRNA和蛋白表达(p0.05),但以浓度依赖性方式下调了IL-6和MMP-9的m RNA和蛋白表达(p0.05)。本研究证实红色诺卡氏菌细胞壁骨架可按照浓度依赖性方式降低肺癌细胞的增殖、侵袭和迁移能力,其抗癌机制与上调E-cadherin和下调IL-6和MMP-9有关。     

转录因子WSTF对肺癌细胞增殖和侵袭的实验研究

目的:研究转录因子WSTF对肺癌细胞增殖和侵袭作用的影响。方法:采用慢病毒介导的基因转染方法建立A549细胞WSTF高表达细胞系A549-WSTF和空质粒对照细胞系A549-control。细胞增殖实验和克隆形成实验观察ING5过表达对肺癌A549细胞增殖能力的影响;Trans-well迁移实验和侵袭实验观察WSTF对肺癌细胞迁移和侵袭能力的影响。结果:Western blot验证A549-WSTF细胞WSTF蛋白水平显著高于对照细胞A549-control,P=0.0004。WSTF高表达明显促进了肺癌细胞的增殖能力(1-4天P值分别为0.002、0.0004、0.0002和3.21×10-5)和克隆形成能力(P=0.004);WSTF过表达还显著促进了肺癌细胞从trans-well小室迁移到下室的作用,其OD570值分别为0.626±0.013(A549-WSTF)和0.322±0.010(A549-control),P=2.37×10-5;WSTF还促进肺癌细胞穿透基质胶迁移到下室,其OD570值分别为0.600±0.027(A549-WSTF)和0.333±0.017(A549-control),P=0.0004。结论:WSTF可以促进肺癌细胞的增殖和侵袭能力而发挥促癌作用。