SV40病毒和多瘤病毒:通过DNA体外重组对它们进行分析以及用它们做真核系统的载体

在过去的二十年里,致瘤的乳多泡病毒(Papovaviruses)--猿猴病毒40(SV40)和多瘤病毒(Polyoma Virus),已经成为使人们产生强烈兴趣的对象。这是由于它们具有两种生物学特性。第一,它们是致瘤的,当把它们接种到适当的实验动物时,就会诱导出肿瘤。现代病毒学尚未解决的主要问题之一,就是这些病毒把一个正常细胞转化     

基因操作原理(续)——第八章 在哺乳动物细胞中克隆

前面几章表明,有很多质粒和噬菌体可作为载体在原核细胞(特别是大肠杆菌)中克隆。然而,明显对比的是,现今只有唯一的一类载体被用于哺乳动物细胞克隆。这类载体是从猿猴病毒40(SV40)衍生而来的。SV40是致瘤的乳多泡病毒(papovavirus);     

病毒编码的细胞周期蛋白

细胞周期蛋白(cyclin)是调控细胞周期的重要因素.近年来发现一些病毒可通过主动编码的与宿主细胞周期蛋白同源的产物来调控宿主细胞增殖周期,这些病毒编码的宿主细胞周期蛋白类似物被命名为病毒编码的细胞周期蛋白.它们的发现为研究病毒与宿主细胞的关系,特别是病毒致瘤机制提供了一条新的思路.     

癌基因的概念研究进展及前景

一、癌基因的概念 癌基因的概念最初来自逆转录病毒。急性转化病毒(如RSV)具有对病毒的致瘤作用及在体外对细胞的转化作用。慢性转化病毒则均具有极弱的致瘤作用。两者之差在于前者多了一段特定的核酸片段,即癌基因。以后才了解到这种病毒中的核酸片段是来自细胞的。即细胞本身本来就存在与病毒癌基因相同源的DNA顺序。     

致瘤性DNA病毒的整合机制及致瘤效应

恶性肿瘤是一种严重危害人类生命和健康的疾病,而致瘤性DNA病毒是多种恶性肿瘤的主要致病因子.致瘤性DNA病毒的整合可以使宿主细胞正常组织逐步向炎症组织转变,并可导致癌变.病毒整合可引起宿主细胞基因组不稳定和重排,产生新的融合基因,并导致宿主基因表达异常,也是病毒本身得以复制,逃避宿主免疫识别并长期维系自我生存的机制之一.本文综述了目前对致瘤性DNA病毒整合规律以及致瘤性DNA病毒整合致瘤效应的研究和进展,并展望致瘤性DNA病毒整合的研究方向以及在肿瘤发生、发展、诊断和治疗上的应用前景.     

正常微生物群与肿瘤

人体上寄居大量的正常微生物群 ,在不规范使用抗生素时是内源性感染的原因菌 ,它们与肿瘤有无关系尚难定论 ,但有一些问题值得加以讨论。1　正常微生物群与肿瘤发生有没有关系 ?目前已知有些病毒能致病 ,包括腺病毒 (AV)、猿猴空泡病毒 (SV4 0 )、人乳头状瘤病毒 (HPV)、牛乳头状瘤病毒 (BPV)、人类 T淋巴细胞瘤病毒(HTLV)、人类巨细胞病毒 (HCMV)、人免疫缺陷病毒 (HIV)、EB病毒 (EBV)等。这些病毒通过诱导宿主细胞周期的一些调控因子发生改变而引起肿瘤。细胞周期素 E(cyclin E)是细胞周期调控中 G1— S期转换的主要促进因子…     

EB病毒的免疫进展

<正>自1964年从地方性Burkitt淋巴瘤(BL)细胞发现Epstein-Barr病毒(EBV)以来,对此病毒的研究已有很大进展。由于一开始就认为EBV与BL有关,故许多实验室对此进行了深入详尽的研究。本世纪初已认识到动物的致瘤病毒,EBV亦可致人类肿瘤,且与其它动物肿瘤相似。     

EB 病毒LMP1 在肿瘤研究中的进展

EB病毒(Epstein-Barr virus,EBV)是具有致瘤潜能的疱疹病毒,与多种恶性肿瘤的发生相关。EB病毒编码的潜伏性膜蛋白1(Latent membrane protein-1,LMP1)作为其主要的致瘤蛋白,能通过细胞内多种信号传导通路,调节和控制细胞的生长、增殖、分化、迁移与凋亡,从而在癌变的发生和发展过程中发挥重要的作用。本文主要就LMP1的结构、生物学功能、介导的信号通路及其与肿瘤关系的相关进展做一阐述。     

可移植性小鼠白血病(L615)的实验研究——Ⅲ.细胞化学及电子显微镜观察

L615白血病细胞经细胞形态学、细胞化学及电子显微镜观察,表明L615白血病细胞是一种分化程度较差、增殖较旺盛的网织细胞。因此,本白血病株属于网织细胞型白血病。 在电子显微镜下,L615白血病细胞内可见病毒样颗粒出现,此种病毒样颗粒符合致瘤性RNA病毒分类中“池内A颗粒”(Intracisternal A Particles)的特点。实验证明此种病毒样颗粒并无生物学活性。它们在L615白血病细胞内大量出现的原因以及与“津638”C病毒颗粒的关系值得进一步研究阐明。     

人乳头瘤病毒E5蛋白

E5是人乳头瘤病毒(human papillomavirus, HPV)表达的3个致瘤蛋白之一,它的致瘤能力较弱,在一些HPV相关的恶性肿痛经常缺乏E5表达.E5主要通过与表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)和V型H+-腺三磷酶(ATPase)等的相互作用,在肿瘤形成早期对细胞增殖、转化、免疫逃避等细胞行为发挥重要影响,促进宫颈上皮从HPV感染到恶性转变.     

EB病毒编码的蛋白质在癌变过程中的作用

EB病毒是一种与人类肿瘤有密切关系的DNA病毒.在病毒感染的不同时期有不同病毒编码蛋白质的表达,因此研究所表达不同抗原的致瘤作用将有助于研究EB病毒的致瘤机制.本文仅就EB病毒编码蛋白LMP1、EBNA1、EBNA2、BARF0和BARF1在癌变中作用的研究进展作一综述.     

可移植性小鼠白血病（L615）的实验研究III.细胞化学及电子显微镜观察

L615白血病细胞经细胞形态学、细胞化学及电子显微镜观察,表明L615白血病细胞是一种分化程度较差、增殖较旺盛的网织细胞。因此,木白血病株属于网织细胞型白血病。在电子显微镜下,L615白血病细胞内可见病毒样颗粒出现,此种病毒样颗粒符合致瘤性RNA病毒分类巾“池内A颗粒,,(Intracisternal A Particles)的特点。实验证明此种病毒样颗位并无生物学活性。它们在L615白血病细胞内大量出现的原因以及与“津63 S" C病毒颗粒的关系值得进一步研究阐明。     

一株人乳头瘤病毒阳性的新的食管癌细胞系的建立及鉴定

为了探讨人乳头瘤病毒(Human papillomavirus,HPV)与上消化道肿瘤食管癌关系,从食管癌高发区安阳市取到一例76岁的中国女性食管鳞癌患者肿瘤组织。通过直接SCID小鼠致瘤实验,可长成移植瘤。取出组织做组织培养并多次纯化传代筛选后,成均一单层细胞。分别进行免疫荧光,细胞生长曲线,软琼脂鉴定,染色体分析,细胞致瘤实验及瘤体切片HE染色等确定是上皮细胞来源的癌细胞。利用细胞STR分型结果显示,基因座均未出现三等位基因现象,无人类细胞交叉污染。对细胞DNA分析发现存在HPV18型的DNA。利用蛋白检测实验发现有HPV病毒癌蛋白表达。结果表明,所建细胞株为有HPV核酸存在并能表达病毒癌蛋白的新的食管鳞癌细胞株。为我们进行食管癌的发生发展的病因学研究提供了新的细胞学材料。     

利用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建马立克病病毒超强毒株原癌基因meq缺失株及其鉴定

近年来,CRISPR/Cas9基因编辑技术正迅速应用于大基因组DNA病毒的编辑,尤其是一些致瘤性疱疹病毒。马立克病病毒(Marek’s disease virus,MDV)属于甲亚科疱疹病毒,血清I型MDV(MDV-1)感染自然宿主可诱导快速发作的T细胞淋巴瘤。meq基因是MDV-1致瘤的主要原癌基因,在马立克病(Marek’s disease,MD)肿瘤发生中具有重要作用。本文以超强毒MDV(very virulent MDV,vvMDV)国际代表株Md5和我国分离株GX0101为研究对象,设计合成了多组meq基因特异性gRNA,利用CRISPR/Cas9系统成功构建了两个meq基因缺失的毒株Md5△meq-C45和GX0101△meq-C56,并对病毒基因组相关区域进行PCR扩增和测序。结果证实,meq基因被完全编辑并敲除。间接免疫荧光实验(Indirect immunofluorescence assay,IFA)显示,MEQ蛋白在两个meq基因编辑毒株感染的CEF细胞中均无表达,并且meq基因缺失经连续15次传代仍保持稳定。通过荧光定量PCR(quantitative PCR,qPCR)对病毒增殖曲线进行测定,证实meq基因编辑不影响病毒的体外复制。本研究建立了CRISPR/Cas9系统快速编辑MDV-1病毒基因的技术方法,获得了稳定的meq基因缺失毒株,为后续MDV-1的致病及致瘤机制研究、MEQ单抗筛选鉴定及诊断试剂研发等奠定了重要基础。     

口蹄疫病毒抗原变异性的分子基础

我们克隆和测定了口蹄疫病毒(FMDV)的两种血清型(C1和A5)的病毒蛋白(VP1)编码区的核苷酸序列,由此得出的氨基酸序列与已知的FMDV O_1K型的VP1序列和A型的两个亚型A_(10)和A_(12)的氨基酸序列比较,发现此蛋白40-60和130-160两个部位是高度可变区域,推测它们可能为抗原区域。在这两个区域中有几个位点,A型的三个亚型序列为相同的,而A,C,O三种血清型却彼此不同。我们还发现第二个可变区域与病毒的一个主要的致免疫决定子重叠。     

表达LacZ基因的重组CVI988病毒的构建及特性研究

马立克氏病(MD)是一种鸡的淋巴增生性肿瘤疾病,是由马立克氏病病毒血清1型(Marek'sdisease virus serotype 1,MDV1)引起的,但是,可以由致弱的或天然不致病的疫苗株进行防制.疫苗株分为三种类型:致弱的血清1型,天然不致瘤的血清2型(MDV2)和天然不致病的火鸡疱疹病毒(HVT).     

病毒疫苗制备用不同核型VERO细胞系在裸鼠体内致癌/致瘤性的系统实验研究

生产疫苗用细胞系可能具有致瘤性,一些常用的细胞系需要检查不同代次有无致癌性。在建立传代细胞种子库与工作库基础上,对研制生产病毒活疫苗所用8株VERO细胞系在219只裸鼠进行了致癌(瘤)实验。本研究结果表明,VERO细胞染色体核型可发生变异,亚四倍体JA株与超二倍体KA株具有强的致癌性,不能用于致弱活病毒疫苗制备,但可替代HeLa细胞系用作恶性肿瘤阳性对照细胞。筛出无致瘤性的YB、dC、M和JB株亚二倍体VERO细胞系,可替代BHK-21细胞用于狂犬病减毒活疫苗制备。VERO细胞系染色体遗传相对稳定。不同代次变化不大。研究发现细胞染色体遗传特征决定致瘤性质并具有种属特异性,不同核型细胞致瘤性不同,细胞染色体数目变异大小和致癌性成正相关,通过体内外交替选育可在裸鼠体内快速选育成功高变异率肿瘤细胞系。高变异率HeLa或VERO细胞系移植于裸鼠可能产生恶性横纹肌样瘤。因此,应当强调疫苗生产用细胞系致瘤性评价的重要性。     

人乳头瘤病毒结构蛋白在病毒感染中的作用研究进展

人乳头瘤病毒(Human papillomavirus,HPV)属于乳多空病毒科(Papovaviridae)的乳头瘤病毒属,是一种无包膜的双链DNA病毒,能诱发人的皮肤或粘膜产生疣和乳头状瘤,某些基因型与子宫颈癌密切相关.     

肾综合征出血热双价纯化疫苗（Vero细胞）安全性的研究

在肾综合征出血热（HFRS）双价纯化疫苗（Vero细胞）的研制中,对病毒培养用Vero细胞致瘤性和试制疫苗的过敏原性进行了动物实验研究,结果表明,病毒培养用Vero细胞无致瘤性,三批试制疫苗无过敏原性。说明用Vero细胞为培养介质的HFRS双价纯化疫苗是安全的。     

卡波氏肉瘤相关病毒编码的miRNAs的研究进展

MicroRNAs(miRNAs)是由内源性基因编码的转录后调节基因表达的小分子RNAs,可与靶基因mRNAs的3'非翻译区互补结合,抑制翻译.最近,在卡波氏肉瘤相关病毒(Kaposi sarcoma-associated herpesvirus,KSHV)的基因组中鉴定出12条miRNAs编码基因,这些病毒的miRNAs可能作用病毒本身,也可能调节宿主细胞的基因表达.然而,对它们的功能仍然所知甚少.主要介绍卡波氏内瘤相关病毒KSHV(HHV8)编码的miRNAs对宿主细胞基因表达的干预,并探讨病毒miRNAs在病毒发病机理中的可能的作用途径.