一种分离人血清白蛋白的简单方法

<正> 自Cohn等和Oncley等发展了低温乙醇方法分离血浆成五种主要成分以来,从Cohn分段V制备临床白蛋白的方法在全世界已沿用了30多年。1962年Kistler和Nitschmann简化了Cohn的方法,但即使专为生产白蛋白,在回收白蛋白之前,为了去除其它蛋白质,最少还需要三个沉淀步骤。为了满足临床上不断地对此重要血浆蛋白的需求,曾报导了几种改进的方法。这些方法包括采用聚乙二醇进行血浆的初步分离,继后用电渗析或反复离子交换层析和Schneider等的方法,其方法涉及在乙醇和稳定剂的参与下对血浆加热,再用聚乙二醇进行白蛋白的沉淀分离。可是,在美国这些方法未得到生产上的广泛应用。     

人血浆Cohn法组分Ⅳ沉淀的综合利用研究

目的采用全层析工艺从废弃的Cohn法组分Ⅳ沉淀(Cohn fraction Ⅳ precipitate, Cohn F Ⅳ)中提取抗凝血酶Ⅲ(antithrombin Ⅲ, AT Ⅲ)、α1-抗胰蛋白酶(α1-antitrypsin,α1-AT)和人血白蛋白进行综合利用。方法将Cohn F Ⅳ溶解并澄清处理后进行SD法病毒灭活,得到上柱前料液,再依次采用阴离子交换层析、肝素亲和层析+α1-AT Select串联亲和层析、疏水层析以及分子筛层析后分别得到AT Ⅲ和α1-AT的纯品以及主要含有人血白蛋白的组分。对AT Ⅲ和α1-AT分别进行纯度、活性以及肝素亲和力等方面的检测,并评价其质量属性。结果采用此方法获得的AT Ⅲ纯度可达99%以上,比活达10 IU/mg以上,肝素亲和力达80%以上;α1-AT纯度同样可达99%以上,比活达1.5 PU/mg以上。结论本研究所述方法可成功将Cohn F Ⅳ中的AT Ⅲ、α1-AT以及人血白蛋白等几种目前最具备提取利用价值的蛋白进行有效的分离,在人血浆综合利用方面具有较高的利用价值。     

血浆蛋白制剂中肝炎病毒的消除

<正> 传播病毒性肝炎是使用血浆蛋白制剂最令人担心的问题之一。甲型肝炎病毒血症时间短,除非输入潜伏早期的血液,不会传播病毒。乙型肝炎和非甲非乙型肝炎因长时期的病毒血症,可持续数年甚或终身,传染个体的百分率高。尽管制造部门检查了献血员的乙型肝炎表面抗原,血浆蛋白制剂中仍可能含有一种或多种肝炎病毒,特别是凝血因子制剂,因制造时需保持其蛋白质活性,通常没有灭活肝炎病毒的步骤。 分离血浆蛋白的低温乙醇法被世界各国作为经典方法沿用迄今已40多年。以人血浆为原料用Cohn法制备的免疫球蛋白不传播病毒性肝炎是众所周知的,但近年来某些报道使人们对此产生了疑虑。除白蛋白外,都有传染病毒性肝炎的报导。     

应用经典热乙醇法从组分IV沉淀中制备白蛋白

将Ｃｏｈｎ氏６法低温乙醇分离人血浆中的组分ＩＶ（ＦＩＶ）沉淀,溶解于注射用水中,加入９５％乙醇后使乙醇浓度为９％,经加温、过滤及超滤制得白蛋白。每公斤ＦＩＶ沉淀可制得白蛋白５７．８ｇ。     

血浆分段法纵览

<正> 引言 简言之,血浆分段法是从已知质量的血浆中,经济地分离具有适宜纯度和最大产量的一定量血浆组分的一门技艺。 人血浆的工业分段法,起源于第二次世界大战期间,当时Cohn和其同事发展并发表了他们著名的冷乙醇分段工艺。Cohn-OnCley6法和9法应用至今40多年,发挥了非常重要的作用。与此同时,在     

乙醇对病毒的作用

<正>在从人血浆分离的蛋白情况看,乙醇对病毒的两种作用应该明确地区分开来: (1)自从Cohn和他的同事们开创性的工作以来,乙醇沉淀法一直用作血浆蛋白的纯化方法。蛋白的相位分离必然把病毒分开,这种分开可能有利也可能不利。依在特殊的蛋白分离物中病毒滴度是减少抑或浓缩而定。     

人血浆蛋白连续沉淀分离技术试验

目的:考察人血浆蛋白连续流沉淀分离装置的分离性能。方法:将传统的人血浆蛋白低温乙醇批处理法改进为连续沉淀分离法,并设计了一套连续沉淀分离装置。采用人血浆低温乙醇分离的组分FⅠ Ⅱ Ⅲ沉淀为试验物料,将蛋白液与试剂(乙醇和缓冲液)在特制的混合器内与循环母液迅速混合,形成连续沉淀分离过程。结果:实现了人血浆蛋白的连续沉淀分离,所得蛋白组分FⅡ中的IgG含量为5.0～8.4g/L,纯度达94%～97.4%。结论:该装置能够实现人血浆蛋白的连续分离,须进一步的试验和工艺优化。     

静注免疫球蛋白生产过程中的病毒灭活

<正>许多静注免疫球蛋白(IVIG)制品有传染输血后肝炎(PTH)的记录而肌肉注射免疫球蛋白(IMIG)却有良好的病毒安全性记录,在许多IVIG制备过程中。血浆首先被低温乙醇法分离,该法也用于制备常规的IMIG。尽管如此,IMIG与IVIG的制备在分离过程的结尾即乙醇的去除方法上有所不同:Cohn乙醇法(IMIG)中通常使用冻干法,而在IVIG的生产中却使用了凝胶过滤或透析过滤法。此外,通过使用如胃蛋白酶或PEG处理的生产工艺去除IVIG中的聚合免疫球蛋白。使用胃蛋白酶和     

免疫球蛋白制造工艺中爱滋病毒的灭活

<正> 人类免疫缺陷病毒(HIV)对热及乙醇的耐受性较弱,例如用56℃30分钟可灭活到检出限度以下,20％乙醇即使之灭活。20％乙醇相当于乙醇分段分离法自血浆提纯IgG的乙醇浓度。由此看来,乙醇法制备的IgG制剂,HIV即使混入原料血浆中,由于在制造工艺中被灭活,故一般认为无HIV感染的危险性。美国食品药品管理局以大量的基础研究与流行病学的调查结果为基础,宣布由乙醇法制备的IgG制剂不存在引起HIV传播的可能性。 可是,Prince等报告在乙醇分段分离法中所作的类似实验,HIV几乎不失活。用乙醇提纯IgG时,尽管Cohn氏法是基本方法,然而详细条件各个厂家也不尽相同。乙醇加     

用离子交换柱层析生产静脉输注用人血清免疫球蛋白

<正>各种特异和非特异免疫血清球蛋白(ISG)制剂用于被动免疫和治疗不同类型的感染。这些制剂绝大部分是按Cohn冷乙醇沉淀技术生产,并仅供肌肉注射。肌肉注射引起ISG吸收缓慢,并在注射部位降解。与此相比,静脉注射是与血浆内抗体的立即出现,给予每单位剂量中较高的血浆抗体水平和给予较大量抗体的能力相联系的。静脉注射伴有的局部疼痛和组织损伤较肌肉注射更轻。     

α1-抗胰蛋白酶的分离纯化

为建立从Cohn's组分IV沉淀中分离纯化α1-抗胰蛋白酶(α1-antitrypsin,α1-AT)的技术路线,以Cohn's组分IV为原料,利用还原剂1,4-二硫苏糖醇(DTT)、气相二氧化硅等处理,再经压滤、离子交换层析和疏水层析提取α1-AT.用SDS-PAGE及合成基质法检测α1-AT的纯度以及生物活性.结果可见,Cohn组分IV沉淀中α1-AT占蛋白总量的11%～13%,经该工艺提取的α1-抗胰蛋白酶纯度为97.6%,疏水层析后α1-AT的收获率为21%,比活为每毫克总蛋白中含 0.54 mg功能活性α1-AT.可见用此方法从Cohn组分IV沉淀中可制备高纯度的α1-AT.     

人血清白蛋白纯化技术研究进展

本文综述了国内外关于血浆人血清白蛋白（pHSA）和基因重组人血清白蛋白（rHSA）分离纯化的进展和发展趋势。以冷乙醇沉淀为主的pHSA分离方法仍是目前多数工业采用的工艺,但近年来发展的离子交换色谱、凝胶过滤色谱、亲和色谱等多种色谱分离技术具有自动化程度高、生产周期短、更符合GMP等特点,正在逐步取代传统的冷乙醇沉淀法。当前用基因工程技术表达的人血清白蛋白对分离纯化提出了新的挑战。为获得高纯度、安全、稳定的产品,各种色谱分离技术得到更多的应用,其中扩张床离子交换色谱可以省去离心、过滤等传统固液分离操作。尽管rHSA的纯化技术已有一定的发展,但纯化过程仍需进一步优化以提高产品纯度及收率。     

利用牛血块分离提取铜锌超氧化物歧化酶的工艺研究

改进了传统提取超氧化物歧化酶的工艺 ,即直接用血块 ,加入保护剂、溶膜剂 ,采用机械破碎法破膜 ,热变性及两次乙醇 -氯仿沉淀除杂蛋白 ,然后丙酮沉淀 ,按照此工艺分离提取获得高纯度的Cu ,Zn SOD ,比活达到 6 988U/mg·pro。     

非甲非乙型肝炎和静注pH4.2免疫球蛋白的安全性

<正> 十九世纪四十年代中末期Cohn等人开创了免疫球蛋白疗法的新时代,发展了从人血浆分离提纯各蛋白组分的技术。此法今天仍广泛使用着。较早的免疫球蛋白浓缩物全是肌肉注射,因为静脉输注有较大的副作用而不被人们接受。1979年报导了一种安全、成功地用     

细菌DNA的一种大量提取方法

本文介绍了一种大量提取细菌DNA的方法。该法是用60℃裂解菌体,以氯仿-苯酚去除蛋白,用Rnase去除RNA,用1倍体积95%乙醇沉淀DNA,省略了异丙醇沉淀步骤。而且该方法操作方便,对仪器要求不高。该法改进结果是:可稳定地得到50—60%的DNA回收率。可用于革兰氏阴性和阳性细菌的DNA提取。有些菌株用Marmur法和Zaslott法提取,DNA回收率在10%以下,采用本法仍能得到50%的回收率。每次提取的DNA量在毫克数量级。特别适合用于Tm法测定DNA G+C mol%含量所需DNA样品的制备。     

黄鳝骨硫酸软骨素提取纯化的初步研究

在稀碱-酶解提取基础上,辅以超声波破碎从黄鳝（Monopterus albus）骨中提取硫酸软骨素（Chondroitin Sulfate,CHS）。比较了三氯乙酸（TCA）法、Sevag法和等电点法除蛋白的效果,并进行了多糖的乙醇分级沉淀实验;粗品经离子交换树脂（CM22）和透析膜（3500Da）透析进一步分离纯化。研究结果表明酶解后用TCA法除蛋白效果好,再加入除蛋白液2倍体积95％乙醇可使大部分CHS沉淀析出;精制品经鉴定含有硫酸基,CHS含量达92．31％;琼脂糖凝胶电泳和红外吸收光谱结果显示精制品与标准CHS相似,初步确定提取物为CHS类多糖。     

锁阳原花青素提取方法及抗氧化和抗糖基化研究北大核心CSCD

为比较不同提取方法对锁阳原花青素得率、抗氧化性和抗糖基化活性的影响,本研究分别采用超声波法、乙醇/硫酸铵双水相萃取法、水提法、微波法和酶解法提取锁阳中原花青素,用香草醛-浓盐酸法测定原花青素含量。采用DPPH·清除能力和·OH清除能力衡量其体外抗氧化能力,采用牛血清白蛋白(BSA)-葡萄糖模拟反应体系和牛血清白蛋白-丙醛酸(MGO)模拟反应体系评价原花青素抗糖基化活性。结果表明:微波法提取得率最高,可达15. 00%,提取时间短,仅为19 min。不同提取方法对DPPH·清除能力依次为微波法>酶法>超声波法>乙醇/硫酸铵双水相萃取法>水提法;不同提取方法对·OH清除能力依次为:微波法>酶解法>超声法>水提法>乙醇/硫酸铵双水相萃取法。微波法制备原花青素在牛血清白蛋白-果糖模拟反应体系和牛血清白蛋白-丙酮醛模拟反应中均有最高抑制率;但抗氧化和抗糖基化活性无相关性。     

锁阳原花青素提取方法及抗氧化和抗糖基化研究

为比较不同提取方法对锁阳原花青素得率、抗氧化性和抗糖基化活性的影响,本研究分别采用超声波法、乙醇/硫酸铵双水相萃取法、水提法、微波法和酶解法提取锁阳中原花青素,用香草醛-浓盐酸法测定原花青素含量。采用DPPH·清除能力和·OH清除能力衡量其体外抗氧化能力,采用牛血清白蛋白(BSA)-葡萄糖模拟反应体系和牛血清白蛋白-丙醛酸(MGO)模拟反应体系评价原花青素抗糖基化活性。结果表明:微波法提取得率最高,可达15. 00%,提取时间短,仅为19 min。不同提取方法对DPPH·清除能力依次为微波法酶法超声波法乙醇/硫酸铵双水相萃取法水提法;不同提取方法对·OH清除能力依次为:微波法酶解法超声法水提法乙醇/硫酸铵双水相萃取法。微波法制备原花青素在牛血清白蛋白-果糖模拟反应体系和牛血清白蛋白-丙酮醛模拟反应中均有最高抑制率;但抗氧化和抗糖基化活性无相关性。     

疏水层析结合冷乙醇沉淀纯化人血清白蛋白

将层析技术与冷乙醇工艺相结合用于人血清白蛋白的纯化 ,对各过程所采用的层析介质及层析条件进行了探索 ,得到了一条从人血浆中制备血清白蛋白的新路线 :将一步冷乙醇沉淀后的血浆上清进行脱盐除乙醇 ,用阳离子交换介质CMSepharoseFF以透过式层析的模式吸附非白蛋白组分 ,最后选用ButylSepharoseFF一步疏水层析后所得样品经SDS-PAGE银染显示一条单带 ,分析其纯度大于 99% ,计算工艺收率为 81.2%。与传统冷乙醇工艺相比较 ,该工艺最终样品纯度更高 ,且层析可以在常温下操作 ,易实现自动化控制.     

在分离静脉注射免疫球蛋白时病毒的灭活和消除:湿热处理和PEG分离

<正>静脉注射免疫球蛋白(IVIG)治疗无丙种球蛋白血症的效果和安全性,使治疗原发性血小板减少性紫癜、kawasaki病、骨髓移植和获得性免疫缺陷综合征都成为适应症。这些病人的防御能力可能很弱,需要给相对大剂量的IVIG。人类免疫缺陷病毒(HIV)在Cohn氏乙醇分离纯化IgG的过程中已被