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以携有结合转座子Tn916的Enterococcus faecalis JH2-2为供体,脱卤脱亚硫酸菌HSS1(Desulfitobacterium dehalogenans,Sm抗性突变株)为受体,在厌氧条件下,通过滤膜杂交、结合转移,将Th916转移并插入到受体菌的染色体上,其转移频率为:1.1×10-7~3×10-8。 在丙酮酸/乳酸-3-氯-4-羟基苯氧乙酸、Tc、Sm培养基上,筛选脱氯呼吸的缺陷型突变株,并用反向PCR(I 相似文献
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以携带质粒pAM120(Ap^r,Tc^r/Tn916)的大肠杆菌(E.coli CG120)为供体菌株,与受体菌巴西固氮螺菌采用膜接合法进行接合转移,在选择平板上得到具较高频率的接合子(10^-5/每个供体菌,选择四环素抗性)。从846株四环素抗性接合子中进一步用奈氏法筛选得到氨分泌突变株3株。在无氮培养基上,其氨分泌量可达7.5 ̄14.0mmol/L。用乙炔还原法分析氨分泌突变株在不同浓度氮源 相似文献
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白腐菌产锰过氧化物酶条件的研究 总被引:25,自引:0,他引:25
白腐菌PhanerochaetechrysosporiumMIG.383降解桉木时具有显著的选择性,30天内降解37.23%Klason木素,7.29%综纤维素。该菌株产胞外锰过氧化物酶,并在高碳低氧培养基中显示较高酶活,静置液体培养的优化培养条件是(L^-1):10g葡萄糖,2mmol酒石酸铵,10mmolpH4.5醋酸钠缓冲液;1g吐温80,2gKH2PO4,0.5gMgSO4.7H2O,0. 相似文献
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以0.1mol/LNH4Cl溶液为介质,用2.5次微分伏安法测定了丙二醛,线性范围为1.0*10^-6至1.0*10^-3mol/L,检测限达1.0*10^-7mol/L。并测定了细胞培养液介质中新生SD大鼠室肌细胞样品的丙二醛。 相似文献
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人肝癌中Lewis抗原,α1,3岩藻糖转移酶与转移倾向 总被引:9,自引:0,他引:9
为了测定人原发性肝癌中Lewis抗原和α1,3岩灌糖转移酶(FucT)亚型的表达,及其与癌栓形成和转移抑制基因nm23-H1表达的关系,用免疫组化法测Lewis抗原,用Northern印迹法测FucT和NM23-H1的mRNA。结果表明,肝癌组织中SLe^x、Le^x、SDLe^x、SLe^a4和Lewis抗原表达的 率均在80%左右。其中SLe^x表达较多,Le^x和SLe^a较少,SDLe^x 相似文献
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[B3—Lys]—胰岛素的研究:受体结合及生物活性 总被引:2,自引:1,他引:1
本文用^125I-[B3-Lys]-胰岛素和^125I-胰岛素研究了[B3-Lys]-胰岛素和胰岛素与人胎盘细胞膜胰岛素受体结合物性并进行了比较。实验结果表明[B3-Lys]-胰岛素与HPM胰岛素受体结合能力比天然猪胰岛素高。由竞争取代曲线得到的[B3-Lys]-胰岛素和猪胰岛素的IC(50)值分另为0.65和1.11nmol/L。经Scatchard分别得出[B3-Lys]-胰岛素与HPM胰岛素 相似文献
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利用Tn5定位诱变筛选紫云英根瘤菌Exo^—变种 总被引:1,自引:0,他引:1
利用Tn5定位诱变方法,对质粒pJBB5进行Tn5插入诱变,得到10个Tn5在59kbB5外源片段上有不同插入位点的质粒TN11,TN112,TN22,TN23,TN31,TN41,TN91,TN101,TN131,TN141。将Tn11等分别转移到已经含有不相容质粒pPH1JI的紫云英根瘤菌107菌株中,使之发生同源变换。通过抗性选择及表型鉴别,筛选到3株菌落表型干燥(Muc-)的酸性胞外多糖(EPS)合成缺陷菌株(Exo-)107(TN22),107(TN101),107(TN131)。Southern杂交分析证明这3株变种的Tn5插入确实是同源交换而不是转座产生,表明经过适当改良的Tn5定位诱变法可以应用于紫云英根瘤菌Exo-变种的筛选。 相似文献
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使用钙离子荧光探针Fluo-3AM和DNA荧光染料Hoechst33342联染细胞的方法,利用显微分光光度计MPVⅡ测量了两种温度敏感细胞—6M2和tsRSVNIH3T3-LA90细胞及C3H10T1/2和转化C3H10T1/2细胞在不同细胞周期时相内钙的浓度,发现从G1期到S期到G2期,6m2细胞当在33℃培养时(转化状态)胞内钙的浓度〔Ca^2+〕i分别为85.0,138.4239.0nmol 相似文献
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通过对重组质粒pGXN300中的 2.3kb EcoRI片段测序分析发现,其上有一完整的lrp基因和部分 putA基因,与 King ND等[1]报道的 B.japonicum的lrp基因DNA序列有 88%同源性。利用 Tn5 gusA5定位 诱变方法,对质粒pGXN300进行插入诱变,得到2.3kb EcoRI片段上有Tn5gusA5插入位点的质粒pGXN300- T38,将pGXN300-T38转移到大豆馒生根瘤苗(B.japonicum)GX201中,得到的GX201转移接合子与不相容 质粒pPH1JI发生同源双交换。通过抗性及gusA活性检测,筛选到一lrp基因突变株。Southem杂交分析证 明这突变株的 Tn5 gusA5插入确实是同源交换而不是转座产生,表明 Tn5 gusA5 诱变可以应用于大豆慢生根 瘤菌中的突变林筛选。 相似文献
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木糖代谢基因表达水平对酿酒酵母重组菌株产物形成的影响 总被引:14,自引:2,他引:12
以E.coli-S.cerevisiae穿梭质粒YEp24为骨架,将树干毕赤酵母(Pichia stipitis CBS6054)的木糖还原酶(XR)基因XYL1及木糖醇脱氢酶(XDH)基因XYL1分别以不同的相对表达方向置于酿酒酵母的乙醇脱氢酶I(ADH1)启动子和磷酸甘油激酶(PGK)启动子下,构建不同XYL1及XYL2的重组质粒。这些重组质粒分别转化酿酒酵母(H158)受体菌。得到的重组菌株 相似文献
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人血管内皮细胞生长因子受体Flt—1胞外区cDNA在毕赤酵母中的?… 总被引:2,自引:0,他引:2
将编码血管内皮细胞生长因子受体FIt-1胞外区1-3loop316个氨基酸残基的cDNA插入到含AOX1启动子和α分泌信号肽序列的Pichia pastoris酵母载体中,构建了重组表达质粒pPIC9K/FIt=1(1-3),转化酵母景菌GS115,筛选His^+Mut^s表型转化子,经插瓶培养,1%甲醇诱导表达4d后,SDS-PAGE结果显示,培养上清中FIt-1(1-3)表达这总蛋白的30-% 相似文献
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二价金属离子Ca^2+、Mg^2+和Mn^2+能增加重组鱼生长激素(brGH)与黑鱼肝膜生长激素受体(GHR)的相互作用,其最适浓度为8-12mmol/L。在这一浓度范围,Ca^2+、Mg^2+和Mn^2+能分别使专一结合提高到无二价阳离子存在时的230%、180%和200%。通过Eadie-Scatchard作图对Ca^2+结合位点进行动态学分析证明brGH-受体复合物存在一个低亲和的Ca^2+ 相似文献
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c-fos基因在内皮素-1促肺泡Ⅱ型细胞表面活性物质合成中的作用 总被引:17,自引:0,他引:17
应用反义技术探讨c-fos基因ET-1调控肺泡Ⅱ型细胞(ATⅡ)表面活性物质(PS)合成的胞内信号转导中的作用,结果显示:(1)内皮素-1(ET-1)可提高ATⅡ细胞的^3H-胆碱掺入。(2)蛋白激酶C(PKC)激活剂PMA可使ATⅡ细胞的^3H-胆碱掺入量增加,PKC抑制剂H7可抑制ET-1的促PS合成效应。(3)ET-1和PMA可显著提高Fos蛋白表达量,H7和c-fos反义寡核苷酸(ODN) 相似文献
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自发性高血压大鼠中枢5—HT1A受体的特性 总被引:1,自引:0,他引:1
本文用放射性配基[^3H]8-OH-DPAT的结合实验显示,自发性高血大鼠海马,下丘脑及低位脑干的5-HT1A受体结合位点数较正常Wistar大鼠为多,其中以海马最为显著,脑干的5-HT1A受体虽较正常Wistar大鼠多,但不太明显。SHR下捕脑中5-HT1A受体除结合位点较正常Wistar鼠多外,亲和力也有增大。以上结果表明,SHR与正常Wistar大鼠之间各脑区中5-HT1A受体的差别可能与高 相似文献
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电融合构建嗜杀啤酒酵母及其发酵性能的研究 总被引:1,自引:0,他引:1
以MK2-3:K^+R^+leu^-p^+(n)为供体菌,AS2420-1;K^-P^-leu^+p^0(2n)为受体菌,通过电融合技术构建一批嗜杀啤酒酵母。其中4株融合子具有较高的嗜杀活性,对这4株融合子的遗传性状、DNA含主细胞大小、形态、嗜杀质粒ds-RNA提取及电泳等研究表明,这4株菌具有双亲的互补性。对其中MAR1的进一步实验表明,MAR1的某些发酵性能接近甚至优于亲株AS2420-1, 相似文献