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棒状杆菌2,5—二酮基—D—葡萄糖酸还原酶Ⅰ基因在大肠杆菌中的克隆?… 总被引:8,自引:0,他引:8
从棒状杆菌(Corynebacteriumsp.SCB3058)初步纯化得到两个2,5-二酮基-D-葡萄糖酸(2,5-DKG)还原酶,在此基础上利用PCR技术,以基因组DNA为模板,扩增得到含有2,5-DKG还原酶Ⅰ基因的片段,定向连接到PGEM3Zf(+并转化大肠杆菌DH5α,是到阳性克隆pGEM813。 相似文献
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棒状杆菌2,5—DGK还原酶基因在欧文氏菌中的表达 总被引:4,自引:0,他引:4
将能够在大肠杆菌内高效表达棒状杆菌2,5-DKG还原酶I基因的质粒pBL4改造成为具有链霉素抗性的质粒pBLS,采用改进的感受态转化法将pBLS导入能够利用葡萄糖高产2,5-DKG的欧文氏菌SB125中,通过提高温度诱导,经SDS-PAGE分析2,5-DKG还原酶I获得了高效表达,占菌体总蛋白的22%,不形成包涵体。体外酶活测定结果表明表达的酶具有较高的活力。同时,通过凝胶活力染色发现了宿主欧文氏 相似文献
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采用异硫氰酸胍(GuSCN)和硅藻从B95-8细胞中快速抽摸板DNA。根据EB病毒(EBV)B95-8株DNA全序列及编码EBV胸苷激酶(TK)的开放读框BXLF1的结构,设计合成一对引物,并在引物的5′一端分别引入EcoRI和PstI切点,用PCR技术扩增出一含完整的EBVTK基因的1.843KbDNA片段,NcoI酶切分析鉴定,EcoRI/PstI双酶切PCR产物和载体,使目的基因定向克隆至选 相似文献
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东亚钳蝎神经毒素在大肠杆菌中的表达 总被引:2,自引:0,他引:2
以山西风陵渡东亚钳蝎(ButhusmartensiKarsch)的尾腺总RNA为模板,根据已知的蝎神经毒素保守氨基酸序列设计引物,利用PCR技术,扩增并克隆了两个蝎神经毒素基因.序列分析表明,由两个基因导出的氨基酸序列(BmKMm1和BmKMm2)与已知的蝎神经毒素BmKⅠ、BmKⅡ、BmKⅢ、BmKM1、BmKM9有很高的同源性.将BmKMm2基因重组到大肠杆菌分泌型表达载体pExSec1中进行表达.SDS-PAGE证明表达产物被分泌到细胞周间质及培养液中.经IgG-Sepharose纯化后的蛋白质注射小白鼠表明表达产物有生物学活性 相似文献
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点状产气单胞菌脯氨酰内肽酶在大肠杆菌中的高效表达 总被引:1,自引:0,他引:1
采用PCR分段克隆法将点状产气单胞菌点状亚种(Aeromonas puctata subsp.jpuctata)脯氨酰内肽酶(prolyl endopeptidase,apPEP)的编码区基因分成3段扩增并拼接成编码690个氨基酸的完整基因apPEP,将其克隆在表达载体pBL和pKKH上,构建成温度和IPTG诱导型高效表达apPEP的重组大肠杆菌BL21/pBL-PEP和BL21/pKKH-PEP 相似文献
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双抗(抗病毒及抗虫)植物表达载体的构建及番茄的化鉴定 总被引:5,自引:0,他引:5
将抗病毒的CMV-cp基因和抗虫的Bt-toxin基因依次插入到植物表达载体PE3的HindⅢ和KpnⅠ位点,通过菌落原位杂交筛选和酶切鉴定,然后以土壤农杆菌GV311-SE介导转化番茄,胭脂碱检测,染色体DNA的点杂交及PCR扩增证明CMV-cp基因和Bt-toxin基因已同时导入转化再生的番茄植株。RNA点杂交证明CMV-cp基因和Bt-toxin基因已在转基因番茄植株中同时获得表达。 相似文献
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用pUC19质粒作载体,克隆了黄地老虎颗粒体病毒(Agrolissegetumgranulosisvirus,简称AsGV)DNAPstI-D.E.F.G.H.J.K.等7个片段。以[ ̄(32)P]-dCTP标记的油桐尺蠖核型多角体病毒(Buzurasuppressarianuclcarpolyhedrosisvirus简称BsNPV)多角体蛋白基因为探针,在37℃条件下对AsGV)颗粒体蛋白基因进行了定位,将其分别定位于BslⅡ-S或TPsTI-A或B和EciRI-A片段上。 相似文献
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苜蓿丫纹夜蛾核型多角体病毒(AcMNPV)大立方形多角体突变株的分子生物学研究 总被引:1,自引:0,他引:1
利用空斑技术,从既能形成多角体又含TK酶基因的苜蓿丫纹夜蛾重组核型多角体病毒AcMNPV-TK中,纯化了一株形成大立方形多角体的病毒突变株AcMNPV-TKmt513。用EcoRI、PstⅠ、BglⅡ及KpnⅠ等限制性内切酶对它做了酶切分析,并克隆了多角体蛋白全基因及其侧翼部分的片段。对所克隆的部分全序列测定结果,发现在多角体蛋白基因读码框内只出现了一个碱基的突变,导致了第25位的氨基酸密码子由GGT变为GAT,该位氨基酸由甘氨酸(Gly)变为天冬氨酸(Aspq)还利用PCR技术扩增出突变了的多角体蛋白基因部分片段,并将它克隆入转移载体质粒pEV55,与不形成多角体的重组病毒TnNPV-HBsD4DNA共转染Sf9细胞,结果产生同样的大立方形多角体病毒。 相似文献
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D.radiodurans CatB基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达 总被引:1,自引:0,他引:1
通过生物信息学方法从耐辐射奇球菌(D.radiodurans)全基因组居库中查鼠并克隆了编码过氧化氢酶(Cartalase,Cat)的1611bp长CatB基因,将CatB基因连人pKK223-3表达载体,转化Cat酶链陷型大肠杆菌(E.coli UM2)。转化菌裂解液PAGE酶活性染色分析实物具有Cat酶活性,电泳过移位置与CatB位置相符。D.radiodurans CatB基因的表达可使E. 相似文献
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用PCR扩增和克隆马立克氏病病毒糖蛋白D基因 总被引:2,自引:0,他引:2
用PCR技术,从GA株马立克氏病病毒(MDV)感染的成纤维细胞(GEF)基因组DNA中扩增出MDV糖蛋白D(gD)抗原基因片段的约1300bp编码序列,将该pcR扩增的产物于EcoRI和Kpnl位点克隆到pUC18质粒载体中,在以digoxigenin(dig)标记的gDPCR产物作为探针,进行原位杂交初步筛选到阳性重组质粒克隆,再根据酶切分析筛选到含MDVgD基因的重组质粒p18MgD。将p18MgD质粒DNA用dig标记后,在Southernblot中,该探针能识别MDV基因组DNA的BamHI-A克隆中的A片段DNA。酶切位点分析表明,该gD克隆也和已发表的MDV的RBIB株gD一样,不含有EcoRⅠ、HindⅢ、PstⅠ、SmaⅠ、pvuⅡ等酶切位点。证明该重组质粒是MDVgD克隆。 相似文献
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人表皮生长因子(EGF)与单核—巨噬细胞集落刺激因子(GM—CSF)融合?… 总被引:1,自引:0,他引:1
应用基因工程技术,将EGF,GM-CSF基因克隆到pGEM-3Zf载体的EcoRI,BamHI位点上,再钭重组融合基因亚克隆到表达载体pBV220扔EcoRI,BamHI位点上,在大肠杆菌DH5α中进行表达,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳和Western blot表明EG-FGM-CSF融全蛋白获得表达,并且具有EGF,GM-CSF免疫学活活。 相似文献
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汉滩病毒核壳蛋白(NP)在杆状病毒系统的表达及其免疫原性研究 总被引:11,自引:0,他引:11
应用杆状病毒表达载体成功地表达了汉滩病毒76-118株(HTNV)核壳蛋白,将HTNVS基因插入杆状病毒转染质粒pAcYMIB的多角体基因启动子下游附近,与经Bsu361酶切线性化的杆状病毒(AcVEPA)DNA共同转染S19细胞,经空斑筛选获得了高效表达NP的重组杆状病毒(AcVHanS)。经SDS-PAGE和Western blot证实,表达产物与HTNV毒粒NP分子量均为50KD左右,紫外扫 相似文献
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双抗(抗病毒及抗虫)植物表达载体的构建及番茄的转化鉴定 总被引:6,自引:0,他引:6
将抗病毒的CMV-cp 基因和抗虫的Bt-toxin 基因依次插入到植物表达载体pE3 的HindⅢ和KpnⅠ位点,通过菌落原位杂交筛选和酶切鉴定,然后以土壤农杆菌GV311-SE介导转化番茄,胭脂碱检测,染色体DNA 的点杂交及PCR扩增证明CMV-cp 基因和Bt-toxin 基因已同时导入转化再生的番茄植株。RNA 点杂交证明CMV-cp 基因和Bt-toxin 基因已在转基因番茄植株中同时获得表达。 相似文献
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点状产气单胞菌脯氨酰内肽酶基因克隆与序列测定 总被引:2,自引:0,他引:2
点状产气单胞菌点状亚种(Aeromonas puncata subsp.punctata)具有脯氨酰内肽酶(prolyl endopeptidase PEP)活性。将其染色体DNA有Eco RⅠ部分酶切后回收8-16kb的DNA片段,与EcoRⅠ消化载体pUC18连接后转化E.coil DH5α,用该酶的专一性底物Benzyloxycarbonyl-Gly-β-naphthylamide从质粒库中 相似文献
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对畲族血浆组特异性成分(Gc)、红细胞磷酸葡萄糖变位酶1(PGM1)、酸性磷酸酶(AcP1)、6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶(6-PGD)、腺苷脱氨酶(ADA)、腺苷酸激酶(AK1)的遗传多态性进行了研究。Gc与PGM1是用薄层聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦分析的,AcP1、6-PGD、ADA及AK1是用淀粉凝胶电泳分析的。各基因座的基因频率分别为Gc*1F0.4722、Gc*1S0.2421、Gc*20.2738;PGM1*1A0.5357、PGM1*1B0.1627、PGM1*2A0.1587、PGM1*2B0.1429;AcP*1A0.1825、AcP1*B0.8175;6-PGD*A0.9683、6-PGD*B0.0278;ADA*10.9881、ADA*20.0119;AK1*11.0000。畲族Gc、PGM1、AcP1、6-PGD和ADA基因为多态,而AK1基因为单态。发现1例带有6-PGD*R和3例带有Gc*1A2变异等位基因的个体,其中Gc*1A2基因频率为0.0119,达到多态水平。 相似文献
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表达流行性感冒病毒血凝素蛋白的重组腺病毒的构建 总被引:5,自引:0,他引:5
用RT-PCR方法扩增流感病毒血凝素基因,将其克隆到5型腺病毒载体质粒pAD5C中。用此质粒与EcoRI酶切回收的5型腺病毒基因组片段共转染293细胞,通过PCR初步筛选得到重组病毒。SDS-PAGE电泳、West-ern blot重组病毒能表达流感病毒的血凝素蛋白。此重组病毒经滴鼻免疫Balb/C小鼠,ELISA实验证明能诱导小鼠产生针对流感的循环抗体IgG和分泌型抗体IgA。本实验证明,利用E 相似文献
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马立克氏病病毒(MDV)814株B抗原基因的克隆及部分序列分析 总被引:6,自引:1,他引:6
提取感染鸡胚成纤维细胞MDV-I弱毒株814病毒DNA为模板,根据RBIB株gB基因5′及3′两端核苷酸离列设计引物,利用PCR技术扩增了我国MDV-I弱毒株814gB基因(2.9kb)将扩增片段平末端克隆到载体pBluescriptSK中EcoRV位点,经BamHI,HindIII酶切鉴定得到不同插入方向的重组质粒。构建圹增片段的酶切图谱及部分序列分析证明与RBIB株gB基因无差异,显示了极高的 相似文献