恶性疟原虫杂合多肽抗原融合基因的克隆和表达

合成了５对寡核苷酸片段,分别连接在两种恶性疟原虫杂合多肽（４５肽和５８肽）抗原基因片段（ＨＰＦＧＡ和ＨＰＦＧＢ）的头部和尾部,将这两种片段分别与霍乱毒素Ｂ亚单位（ＣＴ－Ｂ）基因末端融合。两种杂合多肽抗原分别含有数个红内期和红外期有代表性的、并能被Ｔ或Ｂ淋巴细胞识别的保护性抗原表位,ＣＴ－Ｂ基因前端具有促使分泌的信号肽序列。将这两种融合基因的不同重组质粒分别转化大肠杆菌,对转化菌的培养上清检测表明融合蛋白被分泌性表达,既具有恶性疟原虫和ＣＴ－Ｂ抗原性,又保持了ＣＴ－Ｂ与其受体神经节苷脂ＣＭ１结合的生物学活性。     

恶性疟原虫杂合多肽抗原融合基因的克隆和表达

合成了５对寡核苷酸片段，分别连接在两种恶性疟原虫杂合多肽（４５肽和５８肽）抗原基因片段（ＨＰＦＧＡ和ＨＰＦＧＢ）的头部和尾部，将这两种片段分别与霍乱毒素Ｂ亚单位（ＣＴ－Ｂ）基因末端融合。两种杂合多肽抗原分别含有数个红内期和红外期有代表性的、并能被Ｔ或Ｂ淋巴细胞识别的保护性抗原表位，ＣＴ－Ｂ基因前端具有促使分泌的信号肽序列，将这两种融合基因的不同重组质粒分别转化大肠杆菌，对转化菌的培养上清检测表明融     

江浙蝮蛇神经生长因子在大肠杆菌中的表达及纯化

将江浙蝮蛇（ＡｇｋｉｓｔｒｏｄｏｎｈａｌｙｓＰａｌａｓ,Ａ．ｈ．Ｐ．）神经生长因子（Ｎｅｒｖｅｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ,ＮＧＦ）基因克隆于分泌型原核表达载体ｐＥＴ２２ｂ＋,以Ｃ端融合了６个组氨酸的形式在大肠杆菌ＢＬ２１（ＤＥ３）中进行了ＩＰＴＧ诱导表达。ＳＤＳＰＡＧＥ分析确定有一比理论值略大的诱导表达条带,其表达量占全菌蛋白质的２０％左右,且表达蛋白质主要是以包涵体的形式存在。用６ｍｏｌ／Ｌ的盐酸胍溶解包涵体后,利用固定化金属离子（Ｎｉ２＋）配体亲和层析一步纯化目的蛋白质,纯度可达８０％左右。对该重组肽进行变复性研究。利用ＰＣ１２细胞进行生物活力测定,证明表达产物具有ＮＧＦ生物活力。     

HCG抗原决定簇与乙肝病毒核心抗原的融合表达

利用ＰＣＲ方法获得编码人绒毛膜促性腺激素β链羧端３７肽基因片段（ＨＣＧ－β－３７－ＣＴＰ）,并将其分别和乙肝核心抗原的氨端（第１位）、羧端（第４５４位）、中间（第７５～８３位）以及中间和羧端同时融合,构建Ｔ４个重组融合表达克隆：ｐＣｎ－ＨＣＧ、ｐＣｃ－ＨＣＧ、ｐＣｍ－ＨＣＧ和ｐＣ－ＨＣＧ２,在大肠杆菌中实现了表达。对表达产物中的乙肝核心抗原和ＨＣＧ抗原的抗原性和表达水平、融合蛋白的颗粒性及其免疫原性进行了分析。其中ｐＣｍ－ＨＣＧ和ｐＣｃ－ＨＣＧ能形成颗粒。用ｐＣｍ－ＨＣＧ免疫小鼠能产生高滴度的抗ＨＣＧ抗体,说明核心抗原的中间部位是合适的融合位点。     

HCV/HBV复合抗原基因的克隆、表达及免疫应答研究

为探讨ＨＣＶ／ＨＢＶ 复合疫苗的可行性,将合成的丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）复合多表位抗原基因ＰＣＸ与ＨＢｓＡｇ 基因连接成ＰＣＸＳ基因,与β－半乳糖苷酶（ＧＺ）基因融合后在大肠杆菌及减毒鼠伤寒沙门氏菌中获得表达．目的蛋白ＧＺ－ＰＣＸＳ可被抗－ＨＢｓ 及抗－ＨＣＶ 抗体所特异识别．ＧＺ－ＰＣＸＳ抗原皮下注射免疫ＩＣＲ小鼠后,诱发了较高水平的抗－ＧＺ－ＰＣＸＳＩｇＧ反应．构建的重组减毒鼠伤寒沙门氏菌ＳＬ３２６１（ｐＷＲ／ＰＣＸＳ）口服免疫小鼠后,诱发了高水平的ＣＤ８＋ Ｔ细胞增殖反应及抗ＧＺ－ＰＣＸＳＩｇＧ反应．所有免疫小鼠均未见明显的毒副作用．该研究揭示,ＨＣＶ／ＨＢＶ 复合抗原可诱发特异性体液免疫及细胞免疫应答,而活菌苗口服可能是理想的免疫途径,为ＨＣＶ／ＨＢＶ 双价疫苗研究提供了一定的理论及实验依据．     

重组卡介苗活疫苗的研究进展

重组卡介苗（ｒＢＣＧ）是利用ＢＣＧ活疫苗的优点和特性,借助分子生物学重组技术,将多种外源基因导入ＢＣＧＤＮＡ中,构成重组卡介菌多价活疫苗,期望实现以最少的免疫接种次数,获得抗多种疾病的持久免疫的目的。此研究进展较快,且初步研究结果已显示出ｒＢＣＧ广阔的应用前景,为新型疫苗的开发提供新途径。     

糖基化对乙型肝炎表面抗原疫苗的影响

哺乳动物（ＣＨＯ）细胞表达的三种糖基化程度不同的乙肝表面抗原（ＨＢｓＡｇ）Ａ（含ＧＰ３０,ＧＰ２７,Ｐ２３）,Ｂ（含ＧＰ２７及Ｐ２３）,Ｃ（只有Ｐ２３）,在免疫原性、放置后抗原的稳定性以及对不同单克隆抗体亲和力等方面都有明显的差异;（１）免疫ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠后血清中抗体工（ＥＤ５０）。平均结果为Ａ＝１：８０,Ｂ＝１：１１７,Ｃ＝１：１４,表明有糖基的ＨＢｓＡｇ疫苗对小鼠的免疫力明显高于无糖基的ＨＢ     

抗丙肝病毒核心抗原单克隆抗体的研制与初步鉴定

用基因工程重组技术获得的丙肝病毒（ＨＣＶ）核心蛋白抗原与鼠血清白蛋白交联后免疫Ｂａｌｂ／ｃ小鼠,用杂交瘤技术成功地建立了４株稳定分泌抗核心抗原单克隆抗体的杂交瘤细胞,试验结果表明,该４株ＭｃＡｂｓ与免疫抗原及核心区Ｃ３３肽、ＣＰ９、ＣＰ１０抗原有较强的抗原－抗体反应,与ＨＣＶ ＮＳ３、ＮＳ４、ＮＳ５无反应,在竞争ＥＬＩＳＡ中,对ＨＣＶ－ＩｇＧ阳性血清有较好的抑制作用。４株ＭｃＡｂｓ中３株为ＩｇＧ２     

神经介质C对促胃液素分泌的影响

采用带血管灌流的离体大鼠胃模型,就铃蟾肽类肽能神经介质Ｃ（ＮＭＣ）对促胃液素分泌的影响及其与胆碱能神经的关系,以及铃蟾肽受体拮抗剂（ＢＮ－Ａｎｔ）Ｄ－Ｐｈｅ~６－ＢＮ（６－１３）ＯＭｅ对ＮＭＣ诱导的促胃液素分泌的影响等问题进行探讨。实验结果表明,ＮＭＣ可明显刺激大鼠胃分泌促胃液素（从基础的５５０±１２６ｐｇ／１０ｍｉｎ增加到刺激时的１０６０±１８０ｐｇ／１０ｍｉｎ）,与对照组或自身基础状态比较,差异非常显著（Ｐ＜０．０１）;此效应（净增量）被Ｄ－Ｐｈｅ~６－ＢＮ（６－１３）ＯＭｅ完全消除或被阿托品抵消约６０％（Ｐ＜０．０１）。本实验结果证实,铃蟾肽类肽能神经递质ＮＭＣ是促胃液素分泌的强刺激剂;新近问世的ＢＮ－ＡｎｔＤ－Ｐｈｅ~６－ＢＮ（６－１３）ＯＭｅ具有高效拮抗ＮＭＣ刺激促胃液素分泌的作用;同时揭示,ＮＭＣ的作用机制不仅直接对胃Ｇ细胞、而且还可能通过影响胆碱能神经而发挥效应。     

双链杂交分子“胰岛素－类胰岛素生长因子－I

以去Ｂ链Ｃ端八肽胰岛素（ＤＯＩ）和化学合成的ＩＧＦ－Ｉ的２２～２９（８肽）及２２－３２（１１肽）为底物,用酶促半合成方法制备了杂交分子“胰岛素－类胰岛素生长因子－Ｉ,Ｉｎｓ／ＩＧＦ－Ｉ（８）和Ｉｎｓ／ＩＧＦ－Ｉ（１１）。研究了它们的胰岛素生物活性,结果表明,猪胰岛素Ｂ链Ｃ端Ｂ２７的Ｔｈｒ被Ａｓｎ取代,Ｂ３０的Ａｌａ被Ｔｈｒ取代同时Ｂ２５～Ｂ２６及Ｂ２８－Ｂ２ｋ９氨基酸顺序颠倒以及在Ｂ链Ｃ末端延长３肽（Ｇｌｙ－Ｔｙｒ－Ｇｌｙ）都不影响胰岛素的生物活力。     

国产避孕疫苗研究现状和前景

国产第１代避孕疫苗已经研制成功。疫苗构建是采用妊娠特异性强、妊娠期短暂出现的糖蛋白激素－－人类绒毛膜促性腺激素（ｈｕｍａｎ ｃｈｏｒｉｏｎｉｃ ｇｏｎａｄｏｔｒｏｐｉｃ ｈｏｒｍｏｎｅ,ｈＣＧ）为靶抗原,应用蛋白质工程技术研制的。抗原不但保留了ｈＣＧ的生物活性,而且不与垂体的其他３种激素交叉,并克服了“自身免疫耐受性”,使免疫系统对它作为“非自身”而产生抗体反应。以此构建的第１代避孕疫苗原型,经临     

人α降钙素基因相关肽与肿瘤坏死因子的融合表达

用半酶和半化学合成的方法合成和克隆了人ａ降钙素基因相关肽基因,将该基因融合在肿瘤坏死因子之后插入表达载体ｐＳＢ－９２中,使融合基因的５＇端直接置于大肠杆菌ＰＬ启动下游,采用３０℃培养,４２℃诱导,使ＴＮＦ与ＣＧＲＰ融合蛋白在大肠杆菌中获得了表达,表达的融合蛋白既有ＣＧＲＰ的结合活性（酶标检测为阳性）又有ＴＮＦ的生理功能（对Ｌ－９２９细胞的细胞毒活性）。表达菌裂解液走ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳,显示     

重组BCG疫苗的研究进展

卡介苗（ＢＣＧ）由于其广泛应用的安全性和免疫佐剂作用,因而以ＢＣＧ为载体的重组疫苗研究日益被科学家们重视。本文就近年来细菌、病毒、寄生虫等的重组ＢＣＧ疫苗的研究进展作一简要概述。     

高效融合表达中载体蛋白对hIGF－Ⅰ免疫原性结构形成的影响

利用人工全合成人胰岛素样生长因子工（ｈＩＧＦ－Ｉ）基因,构建了分别以β－半乳糖苷醇（β－ｇａｌ）的三种即含５９０、３１０、２８０个氨基酸序列片段和一种以ＰｒｏｔｅｉｎＡ的Ｂ、Ｃ结构域（ＰＡＢＣ）为载体蛋白的融合型表达质粒,并在大肠杆菌中高效表达了以上各种ｈＩＧＦ－Ｉ的融合蛋白产物。通过对羟胺裂解前后的ｈＩＧＦ－Ｉ产物进行放射免疫结合测定分析,结果显示以β－Ｇａｌ６９０、３１０、２８０为载体蛋白,均严重影响与其融合的ｈＩＧＦ－Ｉ的免疫原性结构形成,但在ＰＡＢＣ－ｈＩＧＦ－Ｉ融合蛋白中,载体蛋白ＰＡＢＣ无明显的影响作用。这表明在高融合表达低分子量蛋白或肽段中,需选择适宜的载体蛋白,以利于目的产物的功能性结构形成。     

大鼠鼻粘膜肽能神经末梢分布的研究

用免疫组化技术（ＡＢＣ法）系统研究了大鼠鼻粘膜９种肽能神经末梢分布的特征,这９种神经肽分别是Ｐ物质（ｓｕｂｓｔａｎｃｅＰ,ＳＰ）,神经激肽Ａ（ｎｅｕｒｏｋｉｎｉｎＡ,ＮＫＡ）,神经激肽Ｂ（ｎｅｕｒｏｋｉｎｉｎＢ,ＮＫＢ）,降钙素基因相关肽（ｃａｌｃｉｔｏｎｉｎｇｅｎｅ－ｒｅｌａｔｅｄｐｅｐｔｉｄｅ,ＣＧＲＰ）,血管活性肠多肽（ｖａｓｏａｃｔｉｖｅｉｎｔｅｓｔｉｎａｌｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ,ＶＩＰ）,神经肽Ｙ（ｎｅｕｒｏｐｅｐｔｉｄｅＹ,ＮＰＹ）,甘丙肽（ｇａｌａｎｉｎ,ＧＡＬ）,生长抑素（ｓｏｍａｔｏｓｔａｔｉｎ,ＳＯＭ）及神经降压素（ｎｅｕｒｏｔｅｎｓｉｎ,ＮＴ）,同时选择与鼻粘膜神经肽（ＮＰ）作用密切相关的三叉神经节（ＴＧ）细胞进行上述ＮＰ的定位。用重组ＰＳＰ６５质粒（４００ＳＯＭｃＤＮＡ）制备ＳＯＭｍＲＮＡ单链探针,以地高辛精标记,在鼻粘膜及ＴＧ细胞进行ＳＯＭｍＲＮＡ的原位杂交组化研究。结果提示大鼠鼻粘膜有丰富的肽能神经末梢;ＴＧ细胞含有多种ＮＰ并且可以合成ＳＯＭ。该研究结果对重新认识鼻粘膜神经分布规律有一定意义。     

小鼠颌下腺降钙素基因相关肽的免疫组织化学定位

本文用免疫组织化学ＡＢＣ法,对小鼠颌下腺中降钙素基因相关肽（ＣａｌｃｉｔｏｎｉｃＧｅｎｅ－ＲｅｌａｔｅｄＰｅｐｔｉｄｅ,ＣＧＲＰ）的分布进行了观察。结果表明：小鼠颌小腔内有降钙素基因相关肽免疫反应神经的分布,它们主要分布于小叶间结缔组织中。此外,颗粒由管细胞也呈降钙素基因相关肽免疫反应阳性。提示降钙素基因相关肽可能参与颌下腺的分泌活动及血液循环等生理调节。     

基因工程重组嵌合抗原作为丙型肝炎诊断试剂的应用

利用基因工程重组技术获得了三种嵌合抗原,两种为丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）结构区核壳蛋白Ｃ２２和ＮＳ３非结构区Ｃ３３ｃ双表位的嵌合抗原Ｂ１和Ｂ２,另一种是既具有上述两段优势抗原,还包括ＮＳ４非结构区Ｃ１００多表位的嵌合抗原Ｃ２５。在大肠杆菌水解酶阴性Ｂ株菌中表达的产物,经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析,Ｂ１,Ｂ２和Ｃ２５嵌合抗原分子量分别为４３,５３和７０ｋＤ,抗原蛋白表达量分别各占电泳蛋白条带的４０％,１０％和     

重组BCG疫苗的研究进展

重组ＢＣＧ疫苗的研究进展程继忠,皇甫永穆（同济医科大学实验医学研究中心医学分子生物研究室,武汉４３００３０）疫苗是最经济有效的预防疾病的医学手段［１］。卡介苗（ＢＣＧ）是分枝杆菌中牛结核杆菌的一种突变株,它具有的特点’可使之发展成为一种特别有吸引力的...     

人a降钙素基因相关肽基因在酵母细胞中的分泌表达与产物的分…

化学合成的人ａ降钙素基因相关肽（ＣＧＲＰ）基因用ＰＣＲ法改造后使其能正确融合在酵母分泌型表达载体ｐＶＴ１０２Ｕ／ａ中的ａ交配因子前导肽序列之后,然后进行克隆并转化酵母宿主菌Ｓ－７８进行表达,培养物的上清用酶标（ＥＬＩＳＡ）鉴定为阳性,而对照Ｓ－７８、ｐＶＴ１０２Ｕ／ａ为阴性,表达量用ＥＬＩＳＡ定量大于２ｍｇ／Ｌ。表达产物经阳离子交换层析（ＣＭ－Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｃ２５）和ＨＰＬＣ纯化得到了ＨＰＬＣ     

人肝癌细胞的IGF—BP1分子特性及内源性蛋白酶对其降解的研究

用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳、高效液相色谱（ＨＰＬＣ）、质谱等方法,研究了人肝癌细胞（ＨｅｐＧ２）分泌的胰岛素样生长因子结合蛋白－１（＾３５Ｓ－ＩＧＦ－ＢＰ１）的分子结构、特性,及其被内源性蛋白酶降解的特点,＾３５Ｓ－ＩＧＦ－ＢＰ１的经抗体免疫沉淀、生化分离,纯化为均一体,其分子是由多个亚构成的蛋白质,分子量约为２７ｋＤ;细胞ＵＭＲ、ＨｅｐＧ２、Ｈ３５ＢＲＬ３Ａ分泌的蛋白酶能将＾３５Ｓ－ＩＧＦ－ＢＰ１催