双抗体夹心ELISA法检测狂犬病疫苗抗原活性组分

采用多克隆双抗体夹心ＥＬＩＳＡ法快速检测狂犬病毒抗原含量。结果表明,灵敏度达到１５μｇ／ｍｌ,同时特异性及变异系数均合乎要求。本方法用于精制狂苗制备过程中有效抗原活性组分的检测准确、快速、重复性好,且抗原的ＥＬＩＳＡ效价与ＮＩＨ动物法测定效价具有平行趋势。     

混合单克隆抗体ELISA直接法和夹心法检测包虫病人循环抗原

本文对混合单克隆抗体ＥＬＩＳＡ直接法和ＥＬＩＳＡ夹心法检测包虫病人循环抗原的效果进行了比较研究。结果表明,ＥＬＩＳＡ夹心法对细粒棘球蚴囊液纯化抗原的最低检出量（１．２ｎｇ／ｍｌ）较直接法（１０ｎｇ／ｍｌ）低,但检测包虫病人循环抗原时,ＥＬＩＳＡ直接法的阳性检出率为５６．３９％（２７／４８）,ＥＬＩＳＡ夹心法为６０．４％（２９／４８）,二者无显著性差异（Ｐ＞０．０５）。两法同时检测１４份猪囊尾蚴病人血清和４４份正常人血清,均未出现假阳性反应。     

黄曲霉毒素B1的免疫检测：Ⅱ.抗体的产生及应用

将黄曲霉毒素Ｂ１肟（ＡＦＢ１Ｏ）与牛血清白蛋白（ＢＳＡ）的连接物,通过多点、多次免疫法注射免疫兔子。分析了抗体的产生进程、效价以及牧民性,注射抗原后的第６０天开始有较明显抗休平生,第１０２天达到高峰,维持１５天左右后开始下降;抗体的ＥＬＩＳＡ价高达１：３００００;和黄曲霉毒素Ｂ１（ＡＦＢ１）的结构类似物的竞争ＥＬＩＳ 有很好的特异性。运用该抗体,以ＥＬＩＳＡ分析检测了几种农产品及饲料中污染ＡＦＢ１     

黄曲霉毒素B_1的免疫检测 Ⅱ.抗体的产生及应用

将黄曲霉毒素Ｂ１肟（ＡＦＢ１Ｏ）与牛血清白蛋白（ＢＳＡ）的连接物,通过多点、多次免疫法注射免疫兔子。分析了抗体的产生进程、效价以及特异性。注射抗原后的第６０天开始有较明显抗体产生,第１２０天达到高峰,维持１５天左右后开始下降;抗体的ＥＬＩＳＡ效价高达１：３００００;和黄曲霉毒素Ｂ１（ＡＦＢ１）的结构类似物的竞争ＥＬＩＳＡ表明,抗体有很好的特异性。运用该抗体,以ＥＬＩＳＡ分析检测了几种农产品及饲料中污染ＡＦＢ１的含量,并和薄层层析法的分析结构进行了比较,结果表明当ＡＦＢ１的含量大于等于５ｎｇ／ｍｌ时,两者间有很好的相关性。     

ELISA 法用于马抗狂犬病毒抗体的检测

本文建立了ＥＬＩＳＡ间接法,用以检测精制（马）抗狂犬病血清（或血浆）制造过程中的中和抗体效价,并与传统的小鼠脑内中和法比较。结果表明（１）两种检测方法对不同水平抗体的检出是一致的。它们之间有很好的线性关系（ｙ＝２．１７ｘ＋２１,ｒ＝０．９９,ｐ＜０．０１）。（２）应用ＥＬＩＳＡ间接法测定马抗狂犬病血清效价简便、快速、特异性及重复性好,可代替小鼠脑内中和法。     

轮状病毒乳胶试剂盒的研制

用轮状病毒Ａ群单克隆抗体研制出轮状病毒抗原乳胶凝集试剂盒,并与轮状病毒ＥＬＩＳＡ试剂盒进行了比较。试验结果表明,轮状病毒抗原乳胶凝集试剂盒具有较高的特异性（９８７％）和敏感性（８６８％）,与ＥＬＩＳＡ试剂盒比较无显著性差异（Ｐ＞０１）,且操作简便快速、成本低廉     

检测肾综合征出血热抗原特异性循环免疫复合物ELISA方法的建立

检测肾综合征出血热抗原特异性循环免疫复合物ＥＬＩＳＡ方法的建立张东海,孙辉,高峰（山东省淄博第二卫生学校,淄博２５５０１５）关键词肾综合征出血热病毒,循坏免疫复合物,特异性,ＥＬＩＳＡ肾综合征出血热（ＨＦＲＳ）发病机理有多种学说,其中在体液免疫学说中...     

免疫—PCR：一种新的抗原检测系统

免疫－ＰＣＲ是１９９２年建立的抗原检测系统，其基本过程和ＥＬＩＳＡ相似，免疫－ＰＣＲ用一段可扩增的ＤＮＡ分子代替ＥＬＩＳＡ中的酶来放大检出信号，因而大大提高了灵敏度，尽管此法尚处于探索阶段，但应用前景是诱人的。     

幽门螺杆菌尿素酶抗原的分离及纯化

本实验采用新型离了交换剂Ｓｏｕｒｅｃｅ Ｑ１５为分离介质,用氯化钠盐浓度梯度洗脱法,从幽门螺杆菌超声处理上清液中纯化了幽累相菌尿毒酶抗原,所得纯化物经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳分析证明具有良好的纯度,只含有分子量为６６０００及２９５００两种蛋白成分,与幽门螺杆菌两种亚基的大小安全相同。以此纯化尿素酶为抗原用于ＥＬＩＳＡ检测临床确诊的幽门螺杆菌感染者血清１２全水感染幽门螺杆者血清１８例,其ＥＬＩＳＡ阳性及     

植物组织粗汁液中的番木瓜环斑病毒的ELISA检测技术

本研究建立和改进了检测番木瓜和西葫芦组织粗汁液里的番木瓜环斑病毒（ＰＲＶ）的ＤＡＣ－ＥＬＩＳＡ法和Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ法。用不同的ＥＬＩＳＡ方法来检测不同寄主植物粗汁液里的ＰＲＶ,其所用的合适的制备粗汁液的缓冲液是不同的。用ＤＡＣ－ＥＬＩＳＡ法检测西葫芦粗汁液时,以０．５ｍｏｌ／Ｌ磷酸盐缓冲液（ｐＨ７．５,内含０．１ｍｏｌ／Ｌ乙二胺四乙酸二钠）为宜;而检测番木瓜粗汁液时,则还要加入０．２５ｍｏｌ／Ｌ脲。用Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ法检测时,在上述磷酸盐缓冲液中加入２％聚乙烯吡咯烷铜能提高对西葫芦粗汁液的检测效果。应用合适的制备粗汁液的缓冲液,ＤＡＣ－ＥＬＩＳＡ法和Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ法的灵敏度分别提高到１／４０９６和１／１０２４（稀释度）。本研究还表明,影响ＤＡＣ－ＥＬＩＳＡ法的定过测定的主要因素是粗汁液的稀释度和包被液（０．０５ｍｏｌ／Ｌ碳酸盐缓冲液,ｐＨ９．６）的用过。在较高粗汁液稀释度和包被液的用量相同时,粗汁液里的病毒含量与ＤＡＣ－ＥＬＩＳＡ法的ＯＤ４９２ｎｍ值呈真实的线性关系。     

ELISA法和NIH法检测狂犬病疫苗抗原量的比较研究

建立优化了用于狂犬病疫苗抗原量检测的ＥＬＩＳＡ方法,并与目前所用的ＮＩＨ法进行了比较,两种方法测定的相对效力符合性良好。与ＮＩＨ法相比,ＥＬＩＳＡ方法具有操作简便、省时省工、降低成本、缩短周期、重复性好、结果可靠等优点,可取代疫苗原液、半成品检测所用的ＮＩＨ法。     

伤寒杆菌SOD抗体对小鼠腹腔吞噬细胞杀灭伤寒杆菌的影响

为了制备伤寒要直菌ＳＯＤ抗体,研究该抗体对小鼠腹腔吞噬细胞杀灭伤寒杆菌的影响,探讨ＳＯＤ与伤寒杆菌抗吞噬作用的关系。采用纯化的伤寒杆菌（Ｓｔｗｌ）Ｆｅ－ＳＯＤ免疫农兔制备兔抗Ｆｅ－ＳＯＤ抗体。利用ＥＡＬＩＳＡ法检测抗体的效价。免疫电泳、双向琼脂扩散试验和抗体对酶活性抑制试验分析抗体的特性。用不同浓度的抗体预先处理伤寒杆菌,然后进行小鼠腹腔吞噬细胞的吞噬杀菌试验。试验结果抗体的ＥＬＩＳ攻疚价为１：１     

一种新的免疫—PCR系统的建立和应用研究

把ＰＣＲ技术作为指示系统引入免疫检测中,建立了免疫－ＰＣＲ技术。在本研究中,以ＰＥＩ作交联剂,首次成功地将特异性抗体直接与ＤＮＡ交联,构建了三种Ａｂ－ＤＮＡ基因探针,组成新的免疫－ＰＣＲ检测系统。此三种特异性Ａｂ－ＮＤＡ探针可用于检测三种相应抗原。检测ＨＳＡ抗原的最低含量可达１０＾－１８ｍｇ／ｍｌ,灵敏度比ＥＬＩＳＡ高１０＾６倍。     

免疫聚合酶链反应技术的建立及其对甲胎蛋白的检测

免疫ＰＣＲ是一种新的具高敏感性的抗原检测技术,它类似传统的ＥＬＩＳＡ法,若与抗体连接的酶用ＤＮＡ片段代替,则该ＤＮＡ片段可用于ＰＣＲ扩增。以链酶亲合素搭桥将生物素标记的抗体与ＤＮＡ相连建立了免疫ＰＣＲ技术,并将其用于检测甲胎蛋白（ＡＦＰ）,其敏感性比ＥＬＩＳＡ法高１０４。因此,免疫ＰＣＲ有可能作为一种具高敏感性的检测手段用于临床早期诊断     

肾综合征出血热病毒LR1株在Vero细胞上适应的特性研究

选取不同代次的ＬＲ１毒株在Ｖｅｒｏ细胞上传代适应,不同天数连续动态观察细胞病变情况,同时用免疫荧光法和ＥＬＩＳＡ进行抗原检测,收毒前细胞反复冻融及超声波破碎,细胞破碎前后用ＥＬＩＳＡ检测抗原含量,半微量空斑法检测病毒滴度。结果证明：ＬＲ１株病毒能在Ｖｅｒｏ细胞上产生细胞病变,病变程度与其毒力明显相关;ＬＲ１株病毒在Ｖｅｒｏ细胞上繁殖的最佳收毒时间为１１天左右;病毒释放性较差,冻融和超声波破碎细胞能明显提高其抗原含量和病毒滴度     

应用ELISA法检测纯化狂犬病疫苗制备过程中的病毒回收率

应用ＥＬＩＳＡ和病毒毒力滴度测定两种方法对狂犬病疫苗纯化过程中各步样品进行检测,并应用ＮＩＨ效力测定法对ＥＬＩＳＡ法测定的结果进行验证。结果显示,ＥＬＩＳＡ法具有灵敏度高、特异性强、重复性好、简便易行等优点,是一种较理想的病毒回收率测定方法。     

中华鳖病毒的血清学检测

中华鳖病毒（ＴＳＶ）是从病鳖中分离到的一种病毒病原。经细胞培养和差异离心制备ＴＳＶ抗原,肌注家兔获ＴＳＶ抗体（ＴＳＶ－Ａｂ）,中和效价为１：２０,用ＴＳＶ－Ａｂ进行双向免疫扩散和间接ＥＬＩＳＡ检测,被检样品有健康和病鳖组织匀浆液、ＴＳＶ细胞培养液、提纯的ＴＳＶ,以及鱼传染性胰脏坏死病毒（ＩＰＮＶ）、草鱼呼肠孤病毒（ＧＣＶ）、鱼病毒性出血败血症病毒（ＶＨＳＶ）、鲁痘疮病毒（Ｃａｒｐ ｐｏｘ ｖｉｒｕ     

重组人GM－CSF／MCAF融合蛋白抗血清的制备与鉴定

重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）和人单核细胞趋化激活因子（ＭＣＡＦ）融合蛋白经ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－７５和ＣＭ－ＳｅｐｈａｒｏｓｅＦＦ两步柱层析,获得了电泳纯的ＧＭ－ＣＳＦ／ＭＣＡＦ融合蛋白。为进一步研究其结构与功能,我们以纯化的该融合蛋白为抗原免疫家兔制备抗血清。ＤｏｔＥＬＩＳＡ和Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ试验表明,该抗血清效价高、特异性好,可分别与ＧＭ－ＣＳＦ／ＭＣＡＦ、ＧＭ－ＣＳＦ和ＭＣＡＦ发生反应。     

重组人GM－CSF／MCAF融合蛋白抗血清的制备与鉴定

重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）和人单核细胞趋化激活因子（ＭＣＡＦ）融合蛋白经ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－７５和ＣＭ－ＳｅｐｈａｒｏｓｅＦＦ两步柱层析,获得了电泳纯的ＧＭ－ＣＳＦ／ＭＣＡＦ融合蛋白。为进一步研究其结构与功能,我们以纯化的该融合蛋白为抗原免疫家兔制备抗血清。ＤｏｔＥＬＩＳＡ和Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ试验表明,该抗血清效价高、特异性好,可分别与ＧＭ－ＣＳＦ／ＭＣＡＦ、ＧＭ－ＣＳＦ和ＭＣＡＦ发生反应。     

无标签鼠疫耶尔森菌V抗原突变体在大肠杆菌中的表达、纯化及免疫原性分析

目的：在大肠杆菌中表达、纯化无标签鼠疫耶尔森菌低钙反应Ｖ抗原突变体,并对其免疫原性进行研究。方法：采用融合ＰＣＲ方法将Ｖ抗原基因中编码半胱氨酸的碱基缺失突变,将获得得Ｖ抗原突变体基因克隆到原核表达载体ｐＥＴ３２ａ（＋）后转化大肠杆菌ＢＬ２１（ＤＥ３）,用ＩＰＴＧ诱导表达并进行柱层析纯化,纯化产物以Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹进行鉴定并免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠,通过ＥＬＩＳＡ检测免疫血清效价。结果：目的蛋白在大肠杆菌中获得了可溶性高表达,经三步柱层析后纯度高于９５％,经Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹检测可与野生型Ｖ抗原单克隆抗体特异性结合,免疫小鼠后获得高效价免疫血清。结论：获得了无标签的鼠疫耶尔森菌Ｖ抗原突变体蛋白,并证实其具有免疫原性,将对Ｖ抗原结构和功能的研究提供帮助。