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1.
应用SDS-PAGE后光密度扫描的方法,对兰州生物制品研究所生产的5批肾综合征出血热(HFRS)乳鼠脑Ⅰ型纯化疫苗进行了纯度测定,结果5批疫苗的纯度为75.7%-89.8%,平均为81.68%,说明兰州所生产的乳鼠脑纯化疫苗纯度较好,杂蛋白含量很少,为精制纯化疫苗 相似文献
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大规模区带离心纯化Vero细胞乙脑疫苗 总被引:1,自引:0,他引:1
本文报道一种适合疫苗生产的大规模纯化Vero细胞乙脑疫苗的方法。原疫苗经适当浓缩和去除DNA处理后,用不连续蔗糖梯度(36%和60%)。32600g,速率区带离心4h。纯化后疫苗的效力比中国参考疫苗高出6倍以上,补体结合抗原比中国参考疫苗高4~8倍。总蛋白含量低于30μg/mL,牛血清含量降至0.5μg/mL以下,细胞残余DNA低于100pg/0.5mL。用此法连续制备三批纯化疫苗,其纯度和效力均高于日本鼠脑纯化疫苗。此法对于制备其它纯化Vero细胞疫苗也具有一定的参考意义。 相似文献
3.
为了阐明肾综合征出血热纯化疫苗(I型)中糖蛋白(GP)、核蛋白(NP)在免疫保护中的作用,采用脾细胞转输法,分别将GP、NP、GP+ NP免疫小鼠后的脾细胞与未经免疫的小鼠正常脾细胞(3.5×105 个)经腹腔转输给乳鼠,2 h 后以100 LD50的汉滩(HTN)病毒(LR1 株)进行脑腔攻击。结果表明,其乳鼠的保护率分别达77.0% ,38.5% 和92.3% ,而未经免疫的小鼠正常脾细胞则不能提供保护(0% ),揭示了GP+ NP在抗HTN 病毒感染中具有免疫协同作用。 相似文献
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地鼠肾细胞狂犬病疫苗原液经100 kD 膜浓缩 30 倍,分别选用(1)DEAE Sepharose CL-6B离子交换层析法;(2)Sephacry1 S-200 HR 分子筛选层析法;(3)二次蔗糖等密度区带离心法对其进行纯化。用此三种方法各试制3 批精制疫苗,结果表明,经DEAE Sepharose CL-6B离子交换层析纯化后疫苗总蛋白含量减少99% 以上,抗原比活性提高159 倍,抗原回收率达50% ,纯化疫苗以NIH 法效力测定平均为5.4 IU/2m l;经Sephacry1 S-200HR 分子筛层析纯化后疫苗总蛋白含量减少 98% 以上,抗原比活性提高41 倍,抗原回收率达63% ,纯化疫苗效力平均为6.25 IU/2m l;经一次蔗糖等密度区带离心法纯化后疫苗总蛋白含量减少98% 以上,抗原比活性提高321 倍,抗原回收率达43% ,纯化疫苗效力平均为6.18 IU/2m l,三种纯化疫苗均符合W HO 规程要求。 相似文献
5.
为了提高肾综合征出血热(HFRS)纯化疫苗中糖膜蛋白(GP)的纯度,采用调节pH值使乳鼠脑组织蛋白沉淀的方法,对蔗糖密度梯度区带离心脱糖后的GP样品进一步纯化。试验结果表明,此方法简便易行,能大幅度降低样品中的杂蛋白含量、提高GP纯度。以该法纯化前、后的样品免疫家兔,产生的血清中和抗体水平基本一致。用此方法,可省去部分昂贵的纯化设备,降低生产成本,为HRRS纯化疫苗的批量生产提供又一简单可行的途径 相似文献
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流行性出血热免疫球蛋白的研制 总被引:1,自引:0,他引:1
陈冬星 《微生物学免疫学进展》1994,22(3):1-6
本文首次报告采用纯化灭活流行性出血热(EHF)Ⅰ型疫苗免疫健康献血员,采集EHF抗体高滴度的血浆,用低温乙醇法及盐析法分离纯化三批EHF免疫球蛋白。结果表明:(1)采用0,1,3,4(月)或0,1,4,5(月)免疫程序,疫苗剂量1~2ml(0.15~0.30mg蛋白),受免献血员血清平均抗体滴度可达1∶406(ELISA)或1∶112(RPHI)。(2)通过生化检定,三批制品的电泳纯度为97.05%,96.84%,99.26%;IgG单体和二聚体含量为89.55%,91.30%和98.21%。(3)用空斑抑制中和试验及免疫印染试验证明所纯化的免疫球蛋白具有抗EHF病毒特异性。(4)三批EHF免疫球蛋白的效价测定,结果为ELISA滴度≥1∶512,RPHI滴度≥1∶1024,PRNT(中和抗体)滴度1∶40。按16%蛋白计,EHF免疫球蛋白的效价可达原料血浆的10倍以上。(5)无菌、安全、毒性及热原质试验检定结果,全部通过《中国生物制品规程》要求。 相似文献
8.
人用精制Vero细胞狂犬病疫苗的保护性试验 总被引:7,自引:1,他引:7
用CTN-1V株生产的精制Vero细胞狂犬病疫苗腹腔免疫小鼠后,再用狂犬病毒街毒株SBD07脑内和肌肉攻击,结果表明稀释5倍疫苗的保护率分别为88.9%和90%,且5倍稀释疫苗的保护效果与原苗相当,此研究证明CTN-1V株能用来作为疫苗的生产毒株。 相似文献
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基因工程变链菌防龋疫苗的研制 总被引:1,自引:1,他引:1
本文采用我们自己构建的基因工程龋齿疫苗菌株,大罐发酵培养3批、菌体收量平均湿重为2.67g/L,表达率为44.27%。菌体经超声裂解,硫酸铵和链霉素粗提,再经吸附层检,凝胶过滤和离子交换柱层析等步骤纯化精提GTF抗原3批。提纯的GTF抗原,平均比活,提纯倍数和收率,分别为58.34u/mg、6.08倍和19.25%。此抗原经SDS-PAGE电泳,分子量为55KD,纯度达到96.7%,并对湿度具有较好的稳定性能。且此抗原制备的疫苗免疫家兔具有较好的免疫原性 相似文献
10.
流行性出血热Ⅱ型纯化疫苗(即亚单位疫苗)系用Ⅱ型Hautaan病毒R_(22)SM株感染乳鼠脑精制而成。为了保证疫苗生产和质量控制,我们对病毒株的繁殖量,感染度,毒力及纯毒株的中和指数作了实验性检测,依据检测的结果:用Ⅱ型EHF毒株R_(22)SM株乳鼠脑内接种感染后的第4或5天病毒在脑内开始出现,而大量繁殖则在接种感染后第7~8。其单一鼠脑内病毒繁殖量(病毒滴度)和制成单一收获原液中病毒含量基本相一致;脑内病毒滴度log LD_(50)为9.7;原悬液中病毒滴度log ID_(50)为11.2,纯毒试验的特异性中和指数为1378。如上所述,各种实验检测结果完全符合EHF疫苗生产规程指标要求。 相似文献
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国产重组酵母乙型肝炎疫苗接种小学生的3年免疫效果观察 总被引:2,自引:2,他引:2
本文报告对258 名小学生应用0、1、6 月程序,接种2 批国产酵母疫苗(5 μg/0.5 m l),1 批Am gen 酵母疫苗(10 μg/m l),1 批M SD 酵母疫苗(5 μg/0.5 m l)的小学生免后3 年((T36)效果观察。结果表明,T36 时抗体 GMT(几何平均滴度),Am gen 疫苗组(145.75)显著高于 2 批国产疫苗(92.11、83.52)和M.S.D 苗组(74.62),抗体GMT 峰值显著低于Am gen 和M .S.D 苗的2 批国产酵母疫苗,与M.S.D 苗抗体GMT 水平无显著差异(P> 0.05)。抗体阳转率间各疫苗组均无显著差异(93.10% ~74.14% )。本次随访结果表明,采用0,1,6 免疫程序,国产酵母疫苗免后3 年的抗体阳转率和抗体GMT水平不低于进口同类酵母疫苗的水平。 相似文献
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流行性乙型脑炎病毒在Vero细胞上传代适应的研究 总被引:1,自引:0,他引:1
通过乙脑病毒P_3株以不同方式在鼠脑和Vcro细胞间传代适应的研究,培育出适于工业化大生产制备乙脑疫苗的生产毒种。其毒力可达7.0±0.5lgLD50/0.04ml,空斑滴度为7.5±0.5PFU/ml,免疫原性ID50值为0.000016-0.000023ml;在含有适量人白蛋白的199营养液内,该毒种于-30℃至少可稳定一年;与鼠脑组织毒种相比,传代细胞毒种的毒力、免疫原性及稳定性均与其相当。然而,后者不含脑组织,至少降低了一种过敏的危险。另外,细胞毒种的制备无需手工解剖鼠脑,易于控制外源因子污染,易于标准化。对于大规模生产疫苗、提高疫苗产量和质量,传代细胞毒种比鼠脑组织悬液毒种具有明显的优点。 相似文献
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雷丸凝集素的纯化及理化性质的研究 总被引:3,自引:0,他引:3
雷丸(Omphalia lapidescens Schroet.)经过Tris-HCl缓冲液浸提,硫酸铵分级沉淀,离了负,卵粘蛋白-Sepharose 4B亲和层析以及Sephacryl-S100分子筛等步骤,纯化得到纯度为95%以上的雷丸凝集素(简称OLL)。比活提高45.8倍,活力回收2.5%。雷丸订素是单一肽链的蛋白质,分子量为12kDa,等电点为7.5,可0被半乳糖抑制。具有热稳定性及酸碱 相似文献
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应用出血热病毒的抗核蛋白(NP)和糖蛋白(G1、G2)单克隆抗体的ELISA夹心法对感染细胞培养物和灭活疫苗内的NP和G1、G2抗原成分进行检测,结果表明感染Vero-E6细胞内NP和G1、G2含量均高于细胞外培养液上清,前者的抗原滴度分别为≥512和256,后者仅为64和16。比较三种不同疫苗内的抗原成分,显示乳鼠脑纯化疫苗内的NP抗原最高,滴度达320-≥640,而二种细胞疫苗(沙鼠肾和地鼠肾细胞)则较低,一般在20-80,相反二种细胞疫苗的糖蛋白滴度则高于脑疫苗(8-32对2-8)该方法可用于疫苗生产过程中检测NP和G抗原成分。 相似文献
15.
建立了一个实验室制备重组hGM-CSF的培养、复性和分离纯化的技术工艺。通过对PEGM工程菌的生长和诱导表达等条件的初步调整,使hGM-CSF的表达量从16.9%提高到32.3%,获得0.749g/L的包含体,纯度为65%;包含体用6mol/L盐酸胍溶解和稀释复性后,经CMSepharoseFF.DEAESepharoseFF和SephacrylS200HR层析分离,制得纯度达97%以上、比活性为3.0×107u/mg的hGM-CSF,纯化总回收率约为5% 相似文献
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卫生部兰州生物制品研究所生产的肾综合征出血热(HFRS)(I型)纯化疫苗在陕西、湖南,浙江的出血热流行区进行了人群免疫效果观察。基础免疫三针后,中和抗体阳转率平均50%,荧光抗体阳转率为8426%,全程接种者26492人,疑似发病1人,保护率平均为96%。对陕西长安县不同年龄的30人进行了免疫后25年抗体水平观察,中和抗体阳转率为57%,有良好的免疫效果,并具有一定的免疫持久性。 相似文献
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选用在Vero细胞上初步适应的LR1(Ⅰ型)、R22(Ⅱ型)株病毒,经乳鼠脑或腹腔接种,收剖感染鼠脑并在Vero细胞传代适应,此收获病毒与直接以Vero细胞传代的病毒比较表明:抗原效价、毒力滴度有明显提高。用LR1、LR22株病毒感染的Vero细胞培养物制备单价粗制疫苗和双价精制纯化疫苗免疫家兔,经空斑减少中和试验检测中和抗体,结果表明经乳鼠和Vero细胞交替传代适应后的LR1、R22株病毒具有良好的抗原性和免疫原性。 相似文献
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空心莲子草口服治疗乳鼠流行性出血热病毒感染的研究 总被引:11,自引:0,他引:11
空心莲子草经口服治疗流行性出血热病毒(EHFV)感染的乳鼠。结果显示,5、7.5、10.0mg三个剂量组的存活率各为80%、72.2%和40.0%,平均存活天数(MTD)为56.5±0.9、53.5±1.1和41.5±2.7d,而病毒对照组的存活率为0.0%,MTD为26.3±0.8d,经该药治疗的感染鼠体内的EHFV抗原表达减少,而未经治疗的感染乳鼠体内的EHFV抗原则在全病程中都显示出较强的表述。治疗组抗病毒效果类似于病毒唑,且口服病毒唑毒性小。说明空心莲子草在体内对EHFV感染鼠有治疗作用。 相似文献
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高效表达了HCV核心区基因抗原之后,对表达蛋白C27进行了纯化,经研究,重组蛋白是以包涵体形式存在于宿主菌内的。C27重组蛋白分别经过包涵体洗涤、DEAE阴离子交换层析和S-200分子筛两步柱层析纯化之后,纯度大于95%,纯化得率为53.2%,总回收率为17.9%,纯化工艺流程简单、得率高,适合向规模化生产发展。 相似文献
20.
卫生部兰州生物制品研究所生产的肾综合征出血热纯化疫苗在陕西,湖南,浙江的出血热流行区进行了人群免疫效果观察。基础免疫三针后,中和抗体阳转率平均50%,荧光抗体阳转率为84.26%,全程接种者26492人,疑拟发病人1人,保护率平均为96%。 相似文献