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重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和人单核细胞趋化激活因子(MCAF)融合蛋白经SephadexG-75和CM-SepharoseFF两步柱层析,获得了电泳纯的GM-CSF/MCAF融合蛋白。为进一步研究其结构与功能,我们以纯化的该融合蛋白为抗原免疫家兔制备抗血清。DotELISA和Westernblot试验表明,该抗血清效价高、特异性好,可分别与GM-CSF/MCAF、GM-CSF和MCAF发生反应。 相似文献
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重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和人单核细胞趋化激活因子(MCAF)融合蛋白经SephadexG-75和CM-SepharoseFF两步柱层析,获得了电泳纯的GM-CSF/MCAF融合蛋白。为进一步研究其结构与功能,我们以纯化的该融合蛋白为抗原免疫家兔制备抗血清。DotELISA和Westernblot试验表明,该抗血清效价高、特异性好,可分别与GM-CSF/MCAF、GM-CSF和MCAF发生反应。 相似文献
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应用基因工程的方法,将含有巨细胞病毒(CMV)启动子的基因片段和人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(hGM-CSF)的cDNA,克隆进逆转录病毒载体N2A,得到重组质粒N2A/CMV/hGM-CSF.经脂质体包装并转染包装细胞,通过G418药物筛选,得到抗性克隆。经PCR和Southemblot检测证实,GM-CSF基因已整合到该克隆细胞的染色体上,获得的逆转录病毒滴度达10 ̄4CFU/ml,克隆细胞培养上清用TF-1细胞可检测到GM-CSF活性。 相似文献
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人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子基因表达受到转录调控与转录后调控。5'非转录区的一些顺式调控成分,如CATT(A/T)重复序列,富含GC序列,CK-1、CK-2、kB特异序列与可诱导的CsA敏感增强子成分等在转录水平上调控hGM-CSF的表达。3'非翻译区有一62bp富含AU序列,这与mRNA的稳定性相关,在翻译水平调控hGM-CSF的表达,细胞因子与一些刺激因子通过不同的机制作用于hGM-CSF基 相似文献
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大肠杆菌表达的重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子的纯化 总被引:1,自引:0,他引:1
对重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)高效表达克隆pZW.GM的表达产物进行了纯化,并对纯化的GM-CSF进行了N端氨基酸序列分析。人GM-CSF基因表达产物在大肠杆菌中以不溶性包涵体形式存在,经过超声破菌、包涵体抽提、凝胶过滤层析、复性、离子交换一系列化步骤,终产物纯度达99%,按蛋白总量计算回收率达10%,比活性达1×10^7u/mg蛋白质。通过测定纯化人GM-CSF的N端1 相似文献
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优化mRNA翻译起始区提高人粒—巨噬细胞集落刺激因子在E.coli… 总被引:2,自引:0,他引:2
人粒-巨噬细胞集落刺激因子(hGM-CSF)是一种重要的造血生长因子。利用基因重组技术构建两个hGM-CSF的E.coli表达菌株,一个为在不改变氨基酸顺序的前提下,对mRNA翻译起始区核苷酸顺序进行优化突变(hGM-CSF(M)),另一个为未突变的对照(hGM-CSF(N))。经酶切电泳、DNA测序、SDS-PAGE和Western blot等未突变的对照(hGM-CSF(N))。经酶切电泳、D 相似文献
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粒细胞巨噬细胞集落刺激因子诱导的巨噬细胞外向K+电流的特性 总被引:1,自引:1,他引:0
以粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF,16ng/ml)长期(0.5-6d)刺激小鼠腹腔渗了的巨噬细胞,采用全细胞膜片箝技术研究在GM-CSF刺激过程中细胞膜电流的变化,观察到一种GM-CSF诱导的瞬间失活的外向K电流,该电流在生理电压范围内可发生稳态失活,且当施加0.5HZ的去极化脉冲刺激时其失活具有频率依赖性。该电流对胞外4-AP高度敏感,胞内Ca^2+浓度「Ca^2+」升主可抑制其幅度, 相似文献
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人粒-巨噬细胞集落刺激因子(hGM-CSF)是一种重要的造血生长因子.利用基因重组技术构建两个hGM-CSF的E.coli表达菌株,一个为在不改变氨基酸顺序的前提下,对mRNA翻译起始区核苷酸顺序进行优化突变(hGM-CSF(M)),另一个为未突变的对照(hGM-CSF(N)).经酶切电泳、DNA测序、SDS-PAGE和Westernblot等分析鉴定,证明两者均能表达特异性的14.6kDhGM-CSF,但hGM-CSF(M)的表达水平较hGM-CSF(N)提高了1.26倍,占菌体总蛋白的16.9%.mRNA翻译起始区二级结构预测分析表明,优化突变后生成自由能ΔG从原来的-10.2提高至-9.4Kcal,AUG从部分配对状态变为非配对状态. 相似文献
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以粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)为筛选文库的靶分子,通过高效筛选(Highthroughputscreening,HTS)方法来筛选多种多肽噬菌体文库,在一个以噬菌体主要蛋白质为载体的多肽噬菌体文库中筛选到了一些与GM-CSF结合的多肽,并通过了ELISA和微淘选(micropanning)实验的证实,这些多肽先导化合物经过进一步的优化,可能成为GM-CSF细胞因子的拮抗剂。 相似文献
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将人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和人血清白蛋白第三功能区(HAS-D3)的基因串联后,在E.coli中获高效表达,表达量占菌体蛋白的32.6%.利用TF-1体外细胞活性测定表明,GM-HSA的活性单位为1.04×10~6U/mg,虽然其比活性低于GM-CSF,但比后者具有更高的体外热稳定性和储藏稳定性. 相似文献
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在无外源刺激条件征,我室所建小鼠胎肝基质细胞系MFLC可自发分泌多处类型细胞因子,其中IL-6及化学趋化因了水平较高,GM-CSF较低,但示检测到IL-3及IL-7活性,引细胞上清对小鼠骨髓造血干细胞有明显的促集落形成效应。并呈现剂量依赖关系,所形成的集落以CFU-GMM及CFU-GM为主,此细胞上清还促进5-Fu耐受小鼠骨髓造血干细胞的集落形成,提示上清中存在SCF样活性成份。上述结果表明,MF 相似文献
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人重组GM—CSF/HSA—D3嵌合蛋白(GM—HSA)在大肠杆菌中的表达及其产… 总被引:1,自引:0,他引:1
将人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和人血清白蛋白第三功能区(HSA-D3)的基因串联后,在E.coli中获高效表达,表达量占菌体蛋白的32.6%。利用TF-1体外细胞活性测定表明,GM-HSA的活性单位为1.04×10^6U/mg,虽然其比活性低于GM-CSF,但比后者具有更高的体外热稳定性和储藏稳定性。 相似文献
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重组人GM—CSF基因在昆虫细胞中的表达 总被引:1,自引:0,他引:1
利用苜蓿夜蛾核型多角体病毒(AcNPV)带β-Galactosidase基因标记的非融合蛋白基因转移载体pBlueBac将人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(hGM-CSF)基因成功地插入病毒AcNPV的基因组中.hGM-CSF基因在感染重组病毒的草地夜蛾(Spodopterafrugiperda)培养细胞Sf9中得到表达,感染后的Sf9细胞培养液能刺激人骨髓细胞在体外形成典型的集落,表达水平可达2.7×1055CFU/ml。以hGM-CSF单抗所作的WesternBlotting表明,表达的hGM-CSF对是3种糖基化程度不同的产物,分子量分别约为15kd,18kd和20kd。 相似文献
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FL对脐血造血细胞长期液体培养的影响 总被引:3,自引:0,他引:3
用脐血进行干细胞移植有许多优点,但有一个主要的缺点是可获得的细胞数量有限,因此脐血干细胞的体外扩增对于其临床应用具有重要意义。考察了Flt-3配体(FL)和干细胞因子(SCF),白介素3(IL-3),IL-6,粒细胞集落刺激因子(G-CSF),粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)的组合对脐血细胞扩增和分化的影响,培养42d,总细胞最多扩增了385.30±163.51倍(FL+SCF+G-CS 相似文献
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本文应用造血祖细胞体外培养技术研究了重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(rhGM—CSF)对正常人骨髓粒单祖细胞集落(CFU—GM)形成的影响,结果表明rhGM—CSF在体外能促进细胞集落的形成,此种效应在一定范围内呈剂量依赖关系,与LEUCOMAX各剂量组相比无显著性差异。采用NBT还原试验和APAAP法观察了rhGM—CSF对U937细胞分化的影响,结果显示rhGM—CSF能抑制U937细胞的增殖,促进其分化,部分细胞具有NBT还原能力,CD116阳性细胞数增加。 相似文献
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低能量激光与集落刺激因子对人脐带血造血细胞的增殖作用 总被引:1,自引:0,他引:1
本研究用铜蒸气激光照射人脐带带血造血细胞,观察低能量激光与集落因子对造血细胞的增殖作用。结果显示激光加CSF对造血细胞GM-CFUc有协同增殖作用,与单用激光照射组,CSF刺激组及对照组相比,有非常显著性差异。 相似文献
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利用PCR扩增得到粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、白细胞介素-3(IL-3)完整基因片段,将其分别克隆pGEM-T构建成GM-CSF/IL-3融合蛋白基因,DNA序列与设计预期一致。将得到的融合蛋白基因克隆对72RNA聚合酶表达载体pT7zz,得到表达质粒pFu,经转化至表达宿主E.coli BL21(DE3),在IPTG诱导下获得融合蛋白目的产物的直接表达。经SDS-PAGE电泳鉴 相似文献