基因工程

<正> 853001 从专利文献看遗传物质的特性[英]/Knuth,S.…//Acta Biotechnol.-1984,4(3).-195～208[译自DBA,1984,3(25),84-11951]从德意志联邦共和国(D E)专利局、德意志民主共和国(D D)、欧洲专利局     

基因工程

<正> 853411 枯草芽孢杆菌精氨酸基因以开始不稳定的杂合质粒形式被克隆到大肠杆菌后的转录分析[英]/Mann,N.H.…∥Mol.Gen.Genet.-1984,197(1).-75～81[译自 DBA,1984,3(25),84-11993]用鸟枪法在大肠杆菌中将枯草芽孢杆菌染色体 DNA 的 EcoR Ⅰ片段克隆到 pBR322     

基因工程

<正> 852571链霉菌噬菌体载体的构建:硫链丝菌肽抗性基因(tsr)引入R4噬菌体[英]/Morino,T.…//Agric.Biol.Chem.-1984,48(8).-1985～1990[译自DBA,1984,3(23),84-10928]用焦磷酸浓缩法从R4-δ-2中分离出R4噬菌体的两个进一步缺失突变体R4-δ-21和     

基因工程

<正> 854681 一个简单而有效的载体-引物 cDN-A 克隆体系[英]/Alexander,D.C.…//Gene.-1984,31(1～3).-79～89[译白DBA,1985,4(4),85-01574]经修正的 Okayama 和 Berg 的载体-引物     

基因工程

<正> 853821热自养甲烷杆菌的同类物-抗性和营养缺陷突变体[英]/Kiener,A.…//Ar-ch.Microbi0l.-1984,139(1).-87～90[译自DBA,1985,4(1),85-00002]发展甲烷菌基因转移受体系统的先决条件,就是要分离到嗜热的热自养甲烷杆菌     

基因工程

<正>发展了奶制品发酵生产中的重要乳酸链球菌质粒DNA的快速纯化方法。将Strepto coccus cremoris wg2一2和Streptococcus lactis MG1216在含酵母膏和DL一苏氨酸的培养基中分别在25℃和20℃培养24小时,然后离心收集细胞,加人溶菌酶和Mutanolysin溶液以除外壳。再加入Tris-HC1蔗糖溶液混均,培养于37℃经3.5分钟,将制备物冷却,     

基因工程

<正> 854231 大肠杆菌延伸因子 Ts 的改进的大量提纯方法[英]/Yoder,M.…//Anal.Biochem.-1984,141(2).-351～354[译自 DBA,1984,3(25),84-12465]在大肠杆菌中蛋白质合成时,Ts 是多肽链延伸必需的三个细胞质因子之一。Ts 催化     

基因工程

<正>考虑了从琼脂糖和聚丙烯酞胺凝胶中用转移电泳回收DNA片段。大肠杆菌质粒pBR322和腺病毒2 DNA分别进行聚丙烯酞胺凝胶电脉和琼脂糖凝胶电泳。SephadexG一50床(B)包在上端装有电     

基因工程

<正> 为了找到能将基因克隆在产蛋白质的B.bre沉:高产菌株47中的适合载体,测定了12株菌的质粒的存在。从B.breois(pWT481)菌株481鉴别出的一个质粒,被选作可能的载体,因为这株菌与菌株打有许多共同特     

基因工程

<正>851741DNA在酵母和动物细胞的寄主一载体系统中的分子克隆和表达[会,英]/ScottJF//Abstr.Pap.Am.Cliem.Soe-1984,287 Meet一CHED 76[译自DBA1984 ,3(19)-08940] 分子克隆技术及其应用的许多迅速进展是利用细菌系统实现的,但是将类似的方法用于真核寄主-载体系统是既定的目标。已研究出的这类系统(作为寄主细胞)使用各种低     

微生物学

<正> 从聚丙烯酞胺凝胶中有效地电泳转移DNA片段到硝酸纤维素纸上的方法得到发展。此法已用于带有小牛胸腺载体DNA的未经处理的Xl74-RF-DNA和用NaOH处理过的变性DNA。制备好末端标记的限制性片段,进行样品的聚丙烯酸胺凝胶电泳。     

大肠杆菌O157噬菌体中vt2基因A、B亚单位的克隆与序列分析

根据GenBank中毒素基因 vt1、vt2序列设计合成 4 对引物,以大肠杆菌 O157 菌株 DNA为模板,扩增 vt1、vt2,从只含有vt2的菌株中诱导释放噬菌体,以噬菌体DNA为模板进行PCR扩增,获得vt2、vt2 A、vt2 B 3条特异性DNA带;将 vt2 A、vt2 B扩增产物纯化后,分别插入 pMD18 T载体,测序结果与相应序列比较,vt2 A和 vt2 B亚单位的基因序列与 GenBank中编码 VT2 毒素的 A、B亚单位的核苷酸序列(X07865,NC_002655, BA000007,AF291819)的同源性分别为98%~99%、96%~100%,确定 vt2 位于噬菌体,并为进一步研究大肠杆菌 O157 中VT噬菌体的毒力转导、VT2毒素的表达和应用奠定基础。     

抗生素

<正> 854552 发酵过程中的膜过滤[英]/Sasser-od,S.//Process Biochem.-1984,Pro BioTech.-10～12[译自 DBA,1984,3(25),84-12470]讨论了酶、黄原酸树胶(xanthan gum)、醋和抗菌素的制备,强调后阶段加工技术。     

基因操作的运载体

随着遗传工程研究的深入,新的运载体不断出现,使人难以跟上它的发展。     

农业其它

<正> 852803促进供体菌株Tn5转座子的定性和根癌土壤杆菌的一种染色体连锁图的发展[英]/Pischl,D.L.…//J.Bacteriol.-1984,159(1).-1～8[译自D BA,1984,3(19),84-09209]对根癌土壤杆菌15955已开展的促进染色体基因转移Tn5转座子系统做了进一步定     

大肠杆菌O157：H7中编码vt2基因的噬菌体的分离与鉴定

根据GenBank中VT1、VT2毒素的基因序列设计合成2对引物,以大肠杆菌O157:H7菌株DNA为模板,扩 增vt1、vt2。诱导只扩增出vt2的菌株释放噬菌体,利用多种指示菌经双层琼脂平板法来分离纯化VT2噬菌体,观 察噬菌斑的特征,提纯病毒粒子进行电镜观察,并对噬菌体中vt2基因检测、克隆和序列分析。结果显示VT2噬菌 体感染MC1061在双层琼脂平板上形成的噬菌斑小而混浊,多呈磨玻璃样;而首次感染大肠杆菌CC118(λpir),此 后用MC1061分离的噬菌体,再以MC1061为指示菌,在双层琼脂平板上形成小而清晰透明的噬菌斑。电镜下噬 菌体头部呈六边形外廓,尾部细长无尾鞘结构。以噬菌体DNA为模板进行PCR扩增,检测到vt2特异性DNA 带,克隆的vt2基因序列与GenBank中编码VT2毒素的核苷酸序列(X07865,NC_002655,BA000007,AF291819) 的同源性分别达到99％,确定编码VT2毒素的基因位于噬菌体上,并获得VT2噬菌体(?)HY。     

牛和猪的生长激素在细菌中高效率表达

用垂体的Poly(A)mRNA制备的cDNA含有牛和猪生长激素(bGH,pGH)编码序列,并在细菌中克隆。由各自cDNA的核苷酸序列而得知的肽激素的一级结构大约有90％的同源性。为了组建能在细菌中高效产生成熟的动物生长激素的表达质粒,利用合成DNA的方法来修饰克隆的cDNA。     

链霉菌工业菌种HS007的基因组标记

通过小片段基因组文库的构建获得工业生产菌HS007的若干基因组片段,并以大肠杆菌-链霉菌穿梭质粒pHJL400为载体,构建了5个插入了特异性标记序列及抗性筛选标记的重组质粒pHJL02AFOH,pHJL07AFOH,pHJL08AFOH,pHJL10AFOH和pHJL12AFOH.利用这些质粒转化工业生产菌株HS007,获得具有特异性标记序列和相应抗性的标记菌株02-72,07-44,08-02,10-81和12-58,其中02-72和12-58的生产能力不受插入片段的影响.利用重组质粒pSP02AFOH上抗性标记两端两个FRT序列的分子内重组去除抗性标记,并以大肠杆菌一链霉菌穿梭质粒pGH112替换该质粒的载体部分,得到重组质粒pGH02FH.以pGH02FH转化标记菌株02-72,获得具有特异性标记序列而没有相应抗性的菌株02-72-36.发酵结果表明,标记片段的插入不影响菌株02-72-36的生产能力.本方法建立了链霉菌工业菌种基因组标记的技术平台.     

pGEM-8Hepc克隆载体的构建与序列分析

hepcidin是一种由肝脏合成的富含半胱氨酸的小分子肽,它的主要生物学功能是维持机体铁稳态,并且具有抗菌活性.本实验从大鼠肝脏组织克隆出hepcidin基因,用同尾酶法构建多拷贝串联基因克隆载体pGEM-nHepc(n=1,2,4,8)(单个hepcidin基因之间用一段连接肽的DNA连接),分别含有不同拷贝首尾串连的hepcidin cDNA,并在大肠杆菌DH5 α中扩增.重组体经双酶切和PCR鉴定后进行序列测定,所得结果与genbank中的大鼠序列比对,结果完全正确,为后续进一步的表达纯化奠定了基础.     

人抗氧化基因GLRX2、TXN1的初步研究

对抗氧化酶系统和非酶系统同时进行研究是揭示细胞衰老和凋亡的新途径.GLRX2和TXN1是人体细胞内有关氧化还原反应的基因,分别编码抗氧化酶系统成员硫氧还蛋白和非酶系统成员谷氧还蛋白.根据GenBank已登录的GLRX2和TXN1基因序列设计适合转导的引物,以人类Hela细胞cDNA为模板进行目的基因的序列扩增,将目的基因转入大肠杆菌受体细胞,克隆出具有目的基因的重组质粒.提取带有目的基因的质粒DNA,通过测序对所克隆的目的基因进行了鉴定.本实验结果为GLRX2和TXN1基因在细胞内的表达和氧化还原反应机制的研究奠定了基础.