巴马小型猪与贵州小型香猪遗传多样性的RAPD分析

RAPD analysis was performed with 31 selected single primers to study genetic diversity of two strains of miniature pigs, The percentages of polymorphisic loic in or between two strains of miniature pigs were 30.9%, 29.2% and 25.7% respectively, and the average genetic distances in and between two strains of miniature pigs were 0.120, 0.072, and 0.067 respectively. These results suggested that genetic diversity and genetic variability were poorer in and between two strains of miniature pigs than ordinary breeds' pigs.     

贵州小型香猪和广西巴马小型猪微卫星位点的遗传学分析

利用35个微卫星位点对贵州小型香猪,广西巴马小型猪的封闭群进行了遗传检测,计算出两个小型猪品系个体样本微卫星位点的平均杂合度,多态信息含量（PIC）、有效等效基因数及品系间的遗传距离。结果表明两个品系的小型猪平均杂合度和PIC均较低,有效等效基因数与实测等位基因数较接近,也表明两品系均有稳定的遗传;两者的遗传距离表明贵州小型香猪和广西巴马小型猪亲缘关系较近,同时表明两者已分别成为两个猛增的封闭群动物。     

成年贵州小型猪淋巴结组织形态学观察及免疫组化研究

目的对成年贵州小型猪淋巴结进行形态学观察及免疫组化研究,为其用于建立人类免疫相关疾病模型提供参考。方法分别取24只成年贵州小型猪淋巴结组织进行固定、切片、HE染色,光镜下观察组织形态,免疫组化SP法检测CD3、CD4、CD8及CD20阳性细胞的比例和分布。结果成年贵州小型猪淋巴结皮质、髓质分布不规则,皮质、髓质并非完全倒置。皮质由淋巴小结和弥散性淋巴组织构成,髓质内可见髓索和髓窦。CD3、CD4、CD8阳性细胞主要分布在副皮质区,CD20阳性细胞主要分布在淋巴小结和髓质内。结论成年贵州小型猪淋巴结组织结构与其他哺乳动物有所不同,淋巴结内可见皮质、髓质倒置分布,但并非完全倒置。淋巴结中T、B细胞分布与人和其它哺乳动物之间没有明显的差异。     

贵州小型猪胃肠道正常菌群的初步检测

目的 检测成年贵州小型猪胃肠内容物和新鲜粪便中正常菌群数量,为相关动物实验提供正常参考值.方法 采用滴注接种法,在选择性培养基上需氧或厌氧培养后,定性定量检测胃肠各段菌群.结果 经检测,获得了成年贵州小型猪胃肠内容物及新鲜粪便中正常菌群的基本数据.结论 贵州小型猪胃肠道正常菌群数量是其相关基础研究和模型应用的重要参考值.     

多层螺旋计算机断层扫描测量成年贵州小型猪腰椎正常数据

目的通过测量成年贵州小型猪腰椎椎体及附件各种径线值,建立贵州小型猪腰椎正常数据。方法选取健康成年贵州小型猪10头(雄性5头,雌性5头),采用西门子双源计算机断层扫描仪(CT)对其进行薄层轴位扫描,经Aquarius iNtuition 4.4进行图像重建,在横断位椎体正中层面测量椎体、椎管横径及纵径,椎弓根的宽度及骨性通道,在矢状位测量椎体、椎弓根高度,并对椎弓根宽度、椎弓根骨性通道与体质量做相关性分析。结果腰1~腰5椎体、椎管横径逐渐变大,而椎体、椎管纵径及椎弓根宽度、高度变化不明显,腰3椎弓根宽度及高度均最大,分别为9.81 mm±0.65 mm,17.77 mm±0.46 mm。椎弓根宽度与体质量均呈显著正相关(r_(L1)=0.96,r_(L2)=0.97,r_(L3)=0.86,r_(L4)=0.73,r_(L5)=0.85;P0.05)。椎弓根骨性通道也与小型猪体质量均呈显著正相关(r_(L1)=0.97,r_(L2)=0.90,r_(L3)=0.89,r_(L4)=0.52,r_(L5)=0.65;P0.05)。结论多层螺旋CT及其后处理软件可以准确测量贵州小型猪腰椎及附件影像资料,为建立小型猪腰椎病理模型提供基础数据。     

巴马小型猪与贵州小型香猪遗传多样性的RAPD分析

应用经过筛选的31条引物对巴马小型猪和贵州小型香猪的基因组DNA进行RAPD扩增,分析二品系实验用小型猪的遗传多样性.两品系实验用小型猪品系内及品系间多态性位点的百分数分别为30.9%和25.7%,品系间及品系内的平均遗传距离分别为0.120、0.072和0.067.结果表明,两品系实验用小型猪品系间及品系内遗传多样性贫乏,遗传变异较小.     

贵州小型猪肠菌群失调模型的制备

目的 探索小型猪肠菌群失调模型的制备方法.方法 分别采用大黄和氨苄青霉素灌服,通过检测贵州小型猪新鲜粪便中双歧杆菌、乳酸杆菌、肠杆菌、肠球菌的数量,了解其肠菌群变化情况.结果 两种方法都可导致贵州小型猪肠菌群改变.两组相比,大黄组菌群变化速度较快、持续时间较短;氨苄青霉素组菌群变化速度较慢、持续时间较长.结论 两种方法均可制备比较稳定的贵州小型猪肠菌群失调模型,但具体表现不尽相同,应用时可根据需要选择.     

实验用小型猪环境条件控制指标比较

本文比较了中国、美国、欧洲、加拿大等国家及两个主要生产和实验企业关于小型猪环境条件指标控制情况,提出我国实验用小型猪环境条件控制标准的建议。     

多层螺旋CT测量成年贵州小型猪活体肾参考数据

目的通过测量成年贵州小型猪肾脏各种径线值及体积,建立贵州小型猪肾脏数据。方法采用西门子双源CT对12头成年贵州小型猪(雄性6头,雌性6头)进行薄层容积扫描,原始数据经Aquarius iNtuition4.4软件进行MRP及VR重组,在横断位正中层面测量双肾前后径及左右径,在冠状位最大面测量双肾长径及短径,计算小型猪体积及双肾体积,双肾长径与短径比值,采用统计学软件对肾长径、长短径比值与肾脏体积,肾脏体积与小型猪体积及体重做相关性分析,P0.05为差异有统计学意义。结果左肾前后径及左右径分别为(40.40±1.67)mm及(27.47±1.40)mm,长径及短径分别为(80.36±2.74)mm及(31.79±1.99)mm,左肾体积为(52.78±2.25)cm3,左肾长径与短径比值为(2.42~2.71)∶1;右肾前后径及左右径分别为(40.95±1.43)mm及(26.90±0.65)mm,长径及短径分别为(79.03±2.38)mm及(32.04±2.34)mm,右肾体积为(51.91±2.25)cm3,右肾长径与短径比值为(2.33~2.77)∶1。双肾长径与肾脏体积呈高度正相关(r左=0.92,P0.05;r右=0.88,P0.05),肾脏体积与小型猪体积呈正相关(r左=0.90,P0.05;r右=0.81,P0.05),与体重也呈高度正相关(r左=0.96,P0.05;r右=0.98,P0.05),但肾脏长短径比值与体积呈负相关(r左=-0.51,P0.05;r右=-0.67,P0.05)。结论多层螺旋CT及其后处理软件可准确测量贵州小型猪活体肾脏的多项影像学数据,为人类肾脏疾病的动物模型研究提供参考。     

在动物福利和“3R”原则的指导下建立贵州小型猪的实验方法

目的在动物福利及＂3R＂原则的指导下,建立贵州小型猪常用的实验方法。方法应用对动物刺激小、痛苦少的方法给贵州小型猪肌内注射、灌胃给药、采血、麻醉、静脉注射、处死给药等方法。结果建立了一套符合动物福利要求和＂3R＂原则的小型猪的实验方法。     

5-氮胞苷对贵州小型猪淋巴细胞DNA损伤及修复的影响

目的　研究贵州小型猪淋巴细胞对化学物或药物引起的DNA损伤及修复影响的反应。方法　用单细胞凝胶电泳技术检测比较 5 氮胞苷对PHA刺激和未刺激淋巴细胞的DNA损伤及其修复过程。结果　 5 氮胞苷引起未刺激淋巴细胞明显的DNA泳动 (彗星尾 ) ,经修复孵育 2h后 ,DNA泳动与孵育前比较无显著差异 ,而 5 氮胞苷引起的刺激细胞DNA泳动经 2h修复孵育后与孵育前比较显著减少。结论　 5 氮胞苷引起贵州小型猪未刺激淋巴细胞DNA损伤经 2h孵育未能修复 ,而刺激细胞的DNA损伤明显修复。     

三品系小型猪35个微卫星基因座的遗传学研究

利用35个微卫星基因座对中国三个品系的小型猪（贵州小型香猪、广西巴马小型猪、版纳小耳猪近交系）进行了遗传检测。计算出三个小型猪品系个体样本在35个微卫星基因座的纯合率,并对其进行t检验。计算出各品系的平均杂合度,多态信息含量（PIC）及品系间的遗传距离,并进行了系统聚类。结果表明三个品系的小型猪其基因纯合率均较高,其中版纳小耳猪近交系的基因纯合率最高;PIC和平均杂合度均较低;贵州小型香猪和广西巴马小型猪亲缘关系较近,并均与版纳小耳猪近交系的亲缘关系略远。 Abstract：The polymorphism of 35 microsatellites in the three miniature pig breeds in China(Guizhou miniature pig, Guangxi Bama miniature pig, Banna miniature pig inbred) was analysed. Rates of homozygote for 35 microsatellite loci in three miniature pig breeds were calculated,and t-test for them were performed. Mean heterozygosity and polymorphism information content(PIC) were calculated for all breeds, and genetic distances between these breeds were estimated. The dendrograms were obtained based on genetic distances. The results suggest that rates of homozygote in the three breeds are all high, and that is the highest in Banna miniature pig inbred. The results also suggest that polymorphism information content and mean heterozygosity in all the three breeds are low, and the genetic relationship between Guizhou miniature pig and Guangxi Bama miniature pig is closer than their relationship with Banna miniature pig inbred.     

Atherosclerosis Induced by a High-Cholesterol and High-Fat Diet in the Inbred Strain of the Wuzhishan Miniature Pig

Coronary artery disease has a significant genetic predisposition, which mainly results from atherosclerosis. Miniature pig is an excellent model to investigate atherosclerosis. This study investigated whether the occurrence and development of atherosclerosis in the Wuzhishan miniature pigs (WZSPs) that were closely bred 12 generations had better consistency. The WZSPs (n?=?9) were fed a high-cholesterol and high-fat diet (HCFD). After continuous feeding, 3 WZSPs each were sacrificed at 6, 8, and 12 months, respectively, and the general clinical manifestations and serological indexes were detected. The pathological changes of the major arteries and main organs were recorded. The results showed WZSPs were quite susceptible to the HCFD. At 6 months, plaque lesions appeared in the abdominal aorta and iliac artery, while at 8 months, they appeared in the coronary artery. At 12 months, atherosclerotic lesions could be found in all major arteries, while lipid core, cholesterol precipitation, and calcium deposition appeared in the most serious sites. The progression of arterial lesions and distribution of the lesions were highly consistent in the pigs. However, apparent variations in serum markers were observed. In conclusion, inbred WZSP is a good model to investigate atherosclerosis and has good predictability for the occurrence and development of the disease.     

我国巴马小型猪SLA-2基因克隆及分子特征

为研究我国巴马小型猪SLA-Ⅰ分子特征,设计引物克隆了SLA-Ⅰ类分子SLA-2基因(SLA-2bm),并通过分子生物学软件分析其分子特征。经克隆及序列测定分析,SLA-2bm为1119bp,其中3~1097为ORF区,共编码364个氨基酸,分别在第125、188、227和283位置出现半胱氨酸残基,含有两对链内二硫键。氨基酸同源性分析显示SLA-2bm与其它SLA-2、SLA-3和SLA-1序列的同源率分别为88.4%~96.4%、88.3%~90.5%和87.7%~92.7%。系统进化树显示SLA-2bm与其它SLA-2等位基因在遗传关系上相对独立,进化程度较低;各功能区分析,SLA-2bm与人HLA-A2和小鼠H-2K分子结构相似,且保留了人HLA-A2基因的部分功能位点。结果表明,SLA-2bm属于一个新的等位基因,巴马小型猪是保留原始基因特征的品种。     

我国巴马小型猪SLA-2基因克隆及分子特征

为研究我国巴马小型猪SLA-Ⅰ分子特征,设计引物克隆了SLA-Ⅰ类分子SLA-2基因（SLA-2*bm）,并通过分子生物学软件分析其分子特征。经克隆及序列测定分析,SLA-2*bm为1119bp,其中3～1097为ORF区,共编码364个氨基酸,分别在第125、188、227和283位置出现半胱氨酸残基,含有两对链内二硫键。氨基酸同源性分析显示SLA-2*bm与其它SLA-2、 SLA-3和SLA-1序列的同源率分别为88.4%～96.4%、88.3%～90.5%和87.7%～92.7%。系统进化树显示SLA-2*bm与其它SLA-2等位基因在遗传关系上相对独立,进化程度较低;各功能区分析,SLA-2*bm与人HLA-A2和小鼠H-2K分子结构相似,且保留了人HLA-A2基因的部分功能位点。结果表明,SLA-2*bm属于一个新的等位基因,巴马小型猪是保留原始基因特征的品种。     

我国巴马小型猪SLA-2基因克隆及分子特征

为研究我国巴马小型猪SLA-Ⅰ分子特征,设计引物克隆了SLA-Ⅰ类分子SLA-2基因（SLA-2*bm）,并通过分子生物学软件分析其分子特征。经克隆及序列测定分析,SLA-2*bm为1119bp,其中3～1097为ORF区,共编码364个氨基酸,分别在第125、188、227和283位置出现半胱氨酸残基,含有两对链内二硫键。氨基酸同源性分析显示SLA-2*bm与其它SLA-2、 SLA-3和SLA-1序列的同源率分别为88.4%～96.4%、88.3%～90.5%和87.7%～92.7%。系统进化树显示SLA-2*bm与其它SLA-2等位基因在遗传关系上相对独立,进化程度较低;各功能区分析,SLA-2*bm与人HLA-A2和小鼠H-2K分子结构相似,且保留了人HLA-A2基因的部分功能位点。结果表明,SLA-2*bm属于一个新的等位基因,巴马小型猪是保留原始基因特征的品种。     

猪内源性反转录病毒在中国实验小型猪中的存在与表达

目的对中国实验小型猪中内源性反转录病毒的存在与mRNA的表达进行检测,摸清中国实验小型猪中内源性反转录病毒的携带情况.方法根据已发表的PERV的序列设计并合成了三对引物,分别用于检测PERV核心蛋白基因(gag)、多聚酶基因(pol)及囊膜基因(env)的存在与表达;同时,根据目前通用的env基因分型方法合成了三对用于分型检测的引物env-A、env-B、env-C.应用PCR、RT-PCR扩增的方法,对来自于中国实验小型猪外周血淋巴细胞的DNA和RNA样品进行了检测.结果在6个被检DNA样品中均检出了PERV特异性DNA的存在;同样,在被检RNA样品中均有PERV特异性RNA的表达,且所表达的PERV均为A型和B型,在所有样品中均未检出C型PERV的表达.结论初步表明中国实验小型猪中存在内源性反转录病毒序列,且能以mRNA的形式表达,这一结果为我国特有小型猪的开发、利用及其病毒安全性评价奠定了基础.     

利用启动子缺陷型打靶载体敲除五指山小型猪GGTA1基因

目的:获得α-1,3-半乳糖基转移酶(GGTA1)基因敲除的五指山小型猪胎儿,为异种器官移植研究提供基础平台。方法:以新霉素磷酸转移酶基因(neo)为筛选标记基因构建启动子缺陷型打靶载体,打靶载体线性化后用电转染法将其导入胎儿成纤维细胞中,转染后的细胞经G418筛选后,用PCR法检测药物抗性的细胞克隆,对阳性细胞进行核移植构建重构胚胎及胚胎移植。结果:转染后,经筛选共得到176个具有G418抗性的细胞克隆,经PCR检测,其中2个细胞克隆发生了同源重组;以其中1个GGTA1+/-细胞克隆为供体细胞进行核移植,将重构胚移植到2头自然发情的受体母猪中,1头受体妊娠;第37 d将代孕母猪处死,获得2个胎儿,经PCR和Southern印迹鉴定,均为GGTA1单等位基因敲除胎儿。结论:构建了五指山小型猪GGTA1基因部分外显子4区域敲除的启动子缺陷型打靶载体,获得了GGTA1单等位基因敲除的胎儿,为培育GGTA1基因敲除的五指山小型猪奠定了基础。