时间分辨荧光免疫分析及其在临床检测中的应用

本文介绍了时间分辨荧光免疫分析法的检测原理、检测方法,分析了时间分辨荧光免疫分析仪的结构并介绍了其在临床检测方面的应用。     

时间分辨荧光免疫分析技术研究现状及进展

时间分辨荧光免疫分析是一种新型的超微量的免疫标记分析方法,集酶标记免疫分析和放射免疫分析等优点于一身,且无放射性污染等.本文主要介绍了时间分辨荧光免疫分析的原理、优点,螯合剂的种类,以及各种分析技术及其应用现状和进展.     

时间分辨荧光分析技术在先天性甲状腺功能低下筛查中的应用

目的:探讨时间分辨荧光分析技术(DELFIA)筛查新生儿先天性甲状腺功能低下的的准确率。方法:回顾性分析我院2008年1月至2013年5月收治的20000例新生儿的临床资料。分别利用酶联免疫吸附法(ELISA)和时间分辨荧光分析技术检测新生儿足跟血中三碘甲腺原氨酸(T3)、四碘甲腺原氨酸(T4)及促甲状腺素(TSH)水平。比较两种检测方法的准确率。结果:DELFIA初次筛查CH的准确性明显高于ELISA。对召回的新生儿进行TSH复测,DELFIA对TSH≥20 m U/L的检测准确率最高,差异具有统计学意义(P0.05)。结论:DELFIA在筛查先天性甲状腺功能低下中具有较高的应用价值,可作为临床筛查的首选方法。     

时间分辨荧光免疫分析在兽药残留检测中的应用

近年来,兽药残留引起食物中毒的报道日益增多,兽药残留检测的意义重大。传统的气相色谱法、液相色谱法存在前处理复杂、仪器成本昂贵等缺陷,酶联免疫吸附分析(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)灵敏度也不高,而时间分辨荧光免疫分析(time-resolved fluoroimmunoassay,TRFIA)操作简便、灵敏度高,已在兽药残留检测领域引起重视。介绍了TRFIA的原理和优势,综述了其在促生长繁殖类、瘦肉增产类和杀菌驱虫类兽药残留检测中的应用,并与传统方法进行了对比,TRFIA有望取代传统的检测方法成为兽药残留检测的常规方法。     

荧光原位杂交技术(FISH)及其在环境微生物学中的应用

微生物对整个生态系统具有重要的影响,了解和检测微生物的种类具有十分重要的意义。但是传统的培养方法又不能满足科学研究的需要,荧光原位杂交技术（FISH）就是近年发展起来的一种快速准确检测微生物的方法,作者较全面地介绍了FISH技术的优点、微生物的分离和固定方法,以及原位杂交过程,同时对FISH技术在环境微生物学中的应用及其前景作了展望。     

IgG-Eu-IDPA对抗原IOV的时间分辨荧光免疫检测

镧系螯合物已经被广泛应用于高灵敏度的时间分辨荧光免疫分析.但是,使用紫外光激发镧系螯合物会对生物分子和细胞产生很大的损害.合成了能够被可见光(最大波长565nm)激发的IgG-Eu-IDPA,并测量了IgG-Eu-IDPA的光谱属性,如荧光寿命、在不同pH值和不同浓度环境下的荧光强度.在自制的时间分辨荧光仪上使用IgG-Eu-IDPA作为荧光探针,检测IOV抗原.数据显示,它的灵敏度远远高于传统的荧光仪.结果表明,IgG-Eu-IDPA能够在高灵敏度的原位和活体分析中作为一种新的、有潜力的荧光探针.     

时间分辨荧光分析法在DNA探针检测中的初步应用

应用时间分辨荧光技术进行核酸杂交分析,选用自制整合剂异硫氰酸苯基-EDTA将铕离子标记连接于链霉亲和素分子中,通过光化学反应制备生物素标记pUC118DNA探针,与固定在聚苯乙烯微滴板中的靶DNA杂交后,以铕离子Eu(3+)标记的链霉亲和素为检测物,检测靶DNA的含量,可检测到30pg的靶DNA．     

时间分辨荧光免疫分析法确定血痕种属

采时时间分辨荧光免疫分析法（ＴＲＦＩＡ）鉴定微量血痕种属。固相和铕标记抗体均采用抗人ＩｇＧ抗体。通过检测可确定血痕是否来源于人体。使用本法检测血清样品的灵敏度达５０万倍稀释度,检测血痕样品达２０万倍稀释度,时间分辨荧光免疫分析法具有无放射性污染,标记物保存期长,特异性好,结果稳定,操作简便等优点,适于法医学的常规检测。     

时间分辩荧光分析法在DNA探针检测中的初步应用

应用时间分辨荧光技术进行核酸杂交分析,选用自制螯合剂异硫氰酸苯基ＥＤＴＡ将希有铕离子标中接于链霉亲和素分子中,通过光化学反应制备生物系标记ＰＵＣ１１８ＤＮＡ探针,与固定在聚苯乙烯微滴板中的靶ＤＮＡ杂交后,以铕离子Ｅｕ＾３＋标边霉亲和素为检测物,检测靶ＤＮＡ的含量,可检测到３０ｐｇ的靶ＤＮＡ。     

磷脂模型膜的时间分辨纳秒荧光光谱的研究

叙述了用时间分辨率纳秒荧光技术研究大豆磷脂或合成磷脂模型膜（脂质体）的物理状态变化与荧光寿命以及时间分辨各向异性测量参数变化相关性的实验结果。用荧光探剂ＭＣ５４０标记模型膜的结果表明,荧光寿命（τ）的变化与脂质／探剂比例、磷脂组成、磷脂的极性头部、脂肪酸酰链长度等有关。用ＤＰＨ（１,６－ｄｉｐｈｅｎｙｌ－１,３,５－ｈｅｘａｔｒｉｅｎｅ）标记磷脂模型膜的时间分辨各向异性分析结果表明,序参数（Ｓ）、     

人体鼻咽组织的时间分辨自体荧光光谱研究

实验研究了在397 nm半导体脉冲激光激发下,人体离体鼻咽正常和癌变组织在600 nm荧光发射波长处的时间分辨自体荧光光谱特性。利用双指数衰减方程对时间分辨自体荧光光谱进行拟合后,获得相应的荧光强度随时间的指数衰减方程以及荧光平均寿命。人体鼻咽癌变和正常组织在600 nm处的自体荧光平均寿命分别为(2.94±0.51)ns和(4.29±0.71)ns,两者之间存在显著的差异。应用时间分辨光谱技术的诊断灵敏度和特异性分别为75%和100%。初步表明了时间分辨自体荧光光谱在早期鼻咽癌诊断的应用价值,该方法可望与传统的稳态荧光光谱结合起来,进一步提高早期鼻咽癌荧光诊断的准确率。     

基于时域的时间分辨荧光光谱的蒙特卡洛模拟

利用蒙特卡洛方法构建了生物组织基于时域的时间分辨荧光光谱的仿真模型,并将应用该模型获得的模拟结果与生物组织的实验光谱进行了比较。结果表明：吸收系数与散射系数分别影响光谱的不同区域;低浓度情况下,模拟结果与实验光谱符合得较好（x^2〈1．2）;高浓度下,实验光谱强度会被浓度效应削弱,以致影响其与模拟光谱的吻合程度。该方法为研究生物组织荧光光谱提供了一种新思路。     

激光时间分辨荧光谱仪＊以及荧光各向异性测量

就时间相关单光子计数荧光谱仪的工作原理、实验装置的建立等问题进行了探讨。利用国产的红离子锁模激光同步泵浦腔倒空输出染料激光器等器件与进口的时幅转换器、定时恒分器建成了激光时间分辨荧光谱仪,时间分辨率为８０ｐｓ。本文还建立了荧光各向异性的测量方法,利用该方法对Ｒ－ＰＥ的旋转弛豫时间进行了测量,并与英国Ｅｄｉｎｂｕｒｇｈ公司生产的２９９Ｔ型荧光谱仪的测量结果进行了比较,结果证明仪器及方法都是可靠的。     

固相时间分辨荧光免疫螯合剂 BCPDA 的制备及其标记技术

报道了固相时间分辨荧光免疫螫合剂4,7-二氯磺基苯-1,10-菲罗啉-2,9-二羧酸(BCPDA)的制备方法,BCPDA 标记蛋白质及螫合 Eu³⁺方法,BCPDA-Eu³⁺标记物荧光光谱研究以及固相时间分辨荧光免疫分析法检测甲胎蛋白异质体(AFP-R-LCA)方法的建立.结果表明 BCPDA 能在温合条件下与蛋白质氨基结合并与 Eu³⁺螯合,BCPDA-Eu³⁺蛋白质标记物荧光特性、标记比度、生物结合活性与国外同类产品一致,所建立的检测 AFP-R-LCA 免疫分析法最小检测值0.6ng/ml,为提高我国非放射性同位素标记技术水平奠定了基础.     

PSⅡ核心复合物能量传递的飞秒时间分辨荧光光谱学研究

运用稳态、瞬态荧光光谱技术对光系统Ⅱ核心复合物的能量传递动力学进行研究.分别用436 nm光脉冲激发叶绿素a分子、45l nm光激发叶绿素a和β-胡萝卜素分子、473和481 nm光激发β-胡萝卜素分子,得到5组反应能量传递、电荷重组等过程的寿命组分:8～40 ps为核心天线中β-胡萝卜素分子通过相邻β-胡萝卜素分子或中间叶绿素a向叶绿素a分子传递能量的时间;85～152 ps为核心天线色素分子激发能传递时间;201～925 ps反映部分电荷重组过程;1.03l～1.2l ns为参与能量传递的色素分子从激发态衰退回到基态的时间;6.17～18.13 ns的长寿命时间组分归因于P680+Pheo-的重组过程.将荧光发射谱进行高斯解析,发现在核心复合物中还至少存在Chla 685 683、Chla 682 680、Chla679 673,677三种特征叶绿素a分子.     

时间分辨免疫荧光分析测定人血清铁蛋白

用一种新型非放射性免疫分析——时间分辨荧光免疫分析法测定人血清铁蛋白含量。方法灵敏度达2ng/ml;测量范围5—1500ng/ml;批内、批间变异系数分别为7.1±0.8％和10.0±1.3％(x±SD);回收率为98.4±7.4％。测定值与RIA法测定值比较,相关性良好。     

时间分辨荧光免疫分析仪的临床实验方法和评价方案

时间分辨荧光免疫分析技术是一种利用稀土离子及其螯合物作为示踪剂的灵敏度高、线性范围宽、应用范围广的非放射性标记免疫分析技术。研制了一种性能稳定的时间分辨荧光免疫分析仪,为了进一步将这一先进超微量物质检验技术推广于临床应用,根据美国国家临床实验室标准化委员会（NCCLS）制订的临床评价方案,选择放射免疫分析法、化学发光免疫分析法以及Perkin Eimer Life Sciences公司的Auto DFLFIA-1235全自动时间分辨荧光免疫分析仪作为比较方法,提出了三套检验时间分辨荧光免疫分析仪性能的临床实验方法和评价方案。并利用其中的一套方案进行了实验,结果表明这些方案可操作性强,结果可信,经济适用,可作为同类医疗检验仪器进行临床实验的参考。     

时间分辨荧光光谱测量结果的一种数据处理改进方法

在综合矩方法和拉普拉斯变换方法原理的基础上,本文报道一种时间相关单光子计数测出的荧光衰变动力学曲线的数据处理的改进方法.此方法使我们能在花费时间较少的条件下得出和用最小二乘法拟合相比拟的准确分析结果.这一方法的优点已被用于分析香豆素102+DCM和香豆素102+PBBO激光染料乙醇溶液的双指数荧光衰变过程的结果所证实,此外,本文也讨论了仪器时间漂移校正及拉普拉斯变换的数据截取问题.     

C肽与胰岛素双标记时间分辨荧光免疫分析法的建立及初步临床应用

建立钐(Sm3+)标记检测C肽(C-peptide)及铕(Eu3+)标记检测胰岛素(insulin)的双标记时间分辨荧光免疫分析法(TRFIA),并初步尝试检测人血C肽以及胰岛素含量.将抗C肽单克隆抗体(Biodesign No.E54094M)与抗insulin单克隆抗体(BiodesignNo.E86306M)混合包被96孔板,然后用Sm3+标记抗C肽单克隆抗体(Medix No.9103),Eu3+标记抗insulin单克隆抗体(Biodesign No.E86802M),运用双抗体夹心一步法建立C肽/胰岛素双标记时间分辨免疫荧光分析法.结果显示:C肽分析灵敏度为0.2μg/L,线性范围为0.5～22μg/L,平均回收率达到99.6%,分析内和分析间变异系数分别为4.6%～6.0%和5.1%～7.6%.胰岛素分析灵敏度为0.8 mU/L,线性范围为3.6～180 mU/L,平均回收率为99.4%,分析内和分析间变异系数分别为3.7%～6.0%和5.1%～8.0%.C肽/胰岛素双标记检测试剂与PerkinElmer公司对应的单标记进口试剂盒分别同时测定血清样本200份,检测结果高度相关,具有较好的一致性,相关系数分别为0.98与0.99.总之,自建C肽/胰岛素双标记时间分辨荧光免疫分析方法的性能均可以达到临床检测要求,有望替代现有国内外较为昂贵的单标记试剂,可用于胰岛素分泌不足导致的糖尿病诊断及糖尿病的大规模普查筛选.