grp75：脑缺备性损伤的分子标记

ｇｒｐ７５基因是一种对缺氧、缺葡萄糖敏感的基因,由于它在脑缺血性损伤刺激后呈现－上调表达,故可作为是脑缺血损伤的一种新的分子标记,有意义的是相对于热激蛋白等其他分子标记而言,在以缺葡萄糖为主要特征的脑缺血性损伤中,ｇｒｐ７５上有更高的特异性和敏感性;另一方面,ｇｒｐ７５作为一种保护性蛋白,对于细胞损伤的分子治疗将具有重要的、潜在的应用前景。     

分子伴侣grp75在缺糖损伤细胞恢复中的作用

葡萄糖调节蛋白75(grp75)属于热休克蛋白70家族中的一员,细胞中葡萄糖水平下降时(类似于缺血),grp75表达增高。为研究grp75在缺糖及缺糖再灌注条件下对细胞的作用,本文以中国仓鼠肺细胞株CHL为材料,采用脂质体介导的方法,以grp75表达载体pcDNA3/grp75转染CHL细胞,获得过表达grp75的细胞克隆;置于无糖培养基培养20h及无糖培养12h换含糖培养基继续培养8h(缺糖再灌注)或含糖培养20h,运用MTT法、LDH测定和流式细胞术分析等方法评估细胞损伤程度。MTT测定显示,未转染细胞缺糖再灌流的增殖能力比完全培养20h增殖能力明显降低(p<0.05),且低于无糖培养20h(p<0.05),转染细胞缺糖再灌流的增殖能力明显高于对照组(p<0.01);LDH测定结果显示,未转染细胞缺糖再灌流LDH释放百分比显著高于完全培养20h(p<0.01),与无糖培养20h无明显差别(p>0.05),转染细胞缺糖再灌流LDH释放百分比显著低于对照组(p<0.01);流式细胞术分析表明,转染细胞的凋亡率明显低于对照组。以上结果表明grp75过表达的细胞在缺糖损伤细胞的恢复中具有一定强度的抗损害作用。     

L-谷氨酰胺对PC12细胞中grp75的调控作用

条件必需氨基酸谷胺酰胺可上调细胞中热激蛋白(hsp)的表达,为观察谷氨酰胺是否对hsp 家族成员grp75的表达具有调控作用,以PC12细胞为模型用免疫组化、蛋白质印迹法和RT-PCR 等方法检测谷胺酰胺对grp75基因的表达的影响;并以MTT法观察谷氨酰胺对PC12的细胞和grp75低表达的PC12细胞缺糖损伤的保护作用。结果表明谷氨酰胺可以上调grp75的表达,特别是对缺糖细胞的上调作用更显著;但这种上调作用与谷氨酰胺的作用浓度和作用时间并未显示出有明显的关系。MTT检测显示,谷氨酰胺使细胞在缺糖条件下的存活率明显上升;grp75低表达细胞与未转染的细胞相比这种保护效应明显降低,说明谷氨酰胺通过调节grp75的表达对缺糖损伤起到保护作用     

L-谷氨酰胺对PC12细胞中grp75的调控作用

条件必需氨基酸谷胺酰胺可上调细胞中热激蛋白（hsp）的表达,为观察谷氨酰胺是否对hsp家族成员grp75的表达具有调控作用,以PC12细胞为模型用免疫组化、蛋白质印迹法和RT—PCR等方法检测谷胺酰胺对grp75基因的表达的影响：并以MTT法观察谷氨酰胺对PC12的细胞和grp75低表达的PC12细胞缺糖损伤的保护作用。结果表明谷氨酰胺可以上调grp75的表达．特别是对缺糖细胞的上调作用更显著;但这种上调作用与谷氨酰胺的作用浓度和作用时间并未显示出有明显的关系。MTT检测显示,谷氨酰胺使细胞在缺糖条件下的存活率明显上升：grp75低表达细胞与未转染的细胞相比这种保护效应明显降低,说明谷氨酰胺通过调节grp75的表达对缺糖损伤起到保护作用。     

利用wx基因分子标记辅助选择培育糯性小麦

利用中国春及其缺体-四体对wx-B1基因的STS标记和wx-A1、wx-D1的微卫星(SSR)标记进行了定位.联合应用这2种分子标记,对12个小麦品种和5个高代糯麦株系做了鉴定,与Wx蛋白的SDS-PAGE结果一致;从组合江苏白火麦×关东107的F2分离群体中筛选出8种wx基因型,其中3种基因型(AD同缺型,BD同缺型和糯型)为自然界中所没有,并且培育出了国内首批糯性小麦品系.另外,应用SSR标记对江苏白火麦回交改良群体中个体进行辅助选择,得到了含wx-D1b的7D单体,为将来进一步改良糯性小麦的农艺性状提供广泛的遗传材料.利用wx基因分子标记辅助选择,可以加速培育糯性小麦的进程.     

瘦素对小鼠脑缺血/再灌注损伤神经元凋亡的影响

目的：研究Leptin在脑缺血性损伤神经元凋亡中的作用及其机制。方法：将75只雄性昆明小鼠完全随机分成3组,即假手术组、缺血/再灌注模型组、Leptin干预组;通过大脑中动脉栓塞（MCAO）复制小鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型,Leptin干预组在缺血0 min腹腔注射Leptin（1μg/g体重）,TUNEL染色检测神经元凋亡,RT-PCR检测凋亡相关基因bcl-2和caspase-3 mRNA表达,免疫组化凋亡相关基因bcl-2和caspase-3蛋白水平的表达。结果：模型组脑缺血中心区神经元以坏死为主,与假手术组相比,其半影区神经元凋亡数量显著增多、促凋亡基因cas-pase-3和抑凋亡基因bcl-2的mRNA和蛋白表达水平均显著升高（P<0.01）;与模型组比较,Leptin干预组半影区凋亡神经元数量显著减少、caspase-3 mRNA和蛋白表达水平显著降低（P<0.01）,抑凋亡基因bcl-2 mRNA和蛋白表达水平显著升高（P<0.01）。结论：Leptin能够通过上调抑凋亡基因bcl-2表达,下调促凋亡基因caspase-3表达抑制神经元凋亡,在脑缺血性损伤中发挥神经保护作用。     

蛋白编码基因在细菌分类学中的应用

为弥补16S rDNA在细菌分类应用中的不足,人们应用了一些编码重要蛋白的看家基因作为系统分类的分子标记。蛋白编码基因具有分辨能力强、准确度高、与基因组一致性好等优点,在近缘菌株的鉴别中效果突出,与其他分类标记结合使用则能够取得更加出色的成效。同时,介绍蛋白编码基因在细菌分类和相关技术中的应用情况,并对这一工具的发展前景作展望。     

分子标记在植物学中的应用及前景

1　引言随着近年来分子生物学的发展,遗传标记的种类已越来越多,不只局限于传统的形态标记,分子标记尤其显示出独特的优越性,并被广泛地应用于植物学研究的各个领域。那么什么叫标记呢?King和Stansfield〔1〕将其定义为代表一个位于染色体上已知位点的基因或一种清晰的表型性状。总的来说,分子标记目前主要应用于两方面:一是作为基因,尤其是一些重要农艺性状基因如抗虫、抗病基因或数量性状基因的检测尺度,要做到这点,首先必须确定与目的基因紧密连锁的分子标记;二是作为种群分析、种质资源分析及遗传育种的研究依据。2　分子标记的种类及…     

遗传标记的研究进展

遗传图谱的构建依赖于各种遗传标记 ,在基因组织中可作为标记的特征繁多 ,本文对不同遗传标记的应用和发展作一综述。1　蛋白质标记蛋白质标记是在蛋白多态性基础上发展的一种分子标记 ,最常用是蛋白质电泳及其配套的专一性染色。在具有大量形态标记和细胞学标记定位的物种中 ,可通过两点或三点测交将编码同工酶基因定位于特定的染色体上。即使没有已被定位的标记基因 ,同样可以测定编码酶的基因间的连锁关系。由于编码同工酶的等位基因是共显性的 ,通过产生多个酶座位处于杂合状态的Ｆ1,就可以同时确定这些同工酶座位的连锁关系。随着已定…     

利用抑制差减杂交技术分离三角褐指藻在缺氮条件下上调表达的基因

为了阐明硅藻利用氮源的分子机制, 以三角褐指藻为材料, 利用抑制差减杂交技术, 分离鉴定了16个在缺氮诱导条件下上调表达的基因片段。其中, 与已知功能基因具有较高相似性的有7种, 都是跟氮源的吸收利用相关的。Northern blotting验证其中5个基因, 包括硝酸盐转运蛋白基因、铁氧化还原蛋白亚硝酸还原酶基因、铵盐转运蛋白基因、结合ATP盒的转运蛋白基因和嘌呤透过酶基因, 在缺氮诱导条件下转录水平有明显上调。     

用微卫星标记定位小麦T型CMS的恢复基因

以T型细胞质雄性不育系 75 336 9A×恢复系 72 6 9 10的F2 群体作为育性调查和基因定位群体。通过育性分析 ,确定该恢复系含有 2个主效恢复基因 ;结合群分法 ,对恢复基因进行了SSR分子标记定位 ,在 2 30对微卫星引物中 ,微卫星标记Xgwm136和Xgwm5 5 0分别与 2个主效恢复基因连锁。这两个标记与Rf基因之间的遗传距离分别为 6 7cM和 5 1cM ,从而将该恢复基因定位在 1AS、1BS染色体上。     

基于表达序列标签的微卫星标记(EST-SSRs)研究进展

作为一种新型分子标记,EST-SSR来自表达基因,因而除具备传统基因组来源的SSR标记所有优势外,可能与基因功能表达具有直接或间接关系,从而强化了SSR标记在遗传研究中的应用.本文综述了近几年来EST-SSR用于遗传图谱构建、基因定位、比较基因组学及重要基因筛选和发掘等方面的研究.     

GRP94 生物学特点与肿瘤的关系的研究进展

葡萄糖调节蛋白94又叫做内质网蛋白99,是一种内质网分子伴侣蛋白,与HSP90有50%的同源性。GRP94蛋白可以和Ca2+结合具有蛋白伴侣特性,能协助新合成的多肽转位、折叠、寡聚体的组装、降解,抑制错误折叠蛋白的分泌;GRP94还具有抗原呈递的作用,可以作为肿瘤细胞的伴侣蛋白,参与肿瘤细胞的新陈代谢,保护肿瘤细胞免受有害因素的侵害。GRP94可能与人类多种肿瘤的发生有关,其表达的增高可能是肿瘤发生发展的一个重要因素。GRP94在肿瘤组织中高表达提示相关研究者,应用基因手段抑制GRP94的表达可能能够抑制肿瘤细胞的生长、侵袭和转移、增加肿瘤细胞对化疗药物的敏感性等,并且利用GRP94作为一种新的肿瘤治疗的靶分子或介质可能为肿瘤的基因治疗带来更广泛的应用前景。     

分子标记技术在玉米基因定位上的研究进展

该文概述几种分子标记的特点,论述了DNA分子标记在玉米品质性状基因、产量性状基因、生育期和主要植株性状基因、抗性基因、育性基因等基因定位方面的研究进展,并提出了今后的应用前景与发展方向。     

脑缺血再灌流大鼠海马hsp70及bcl—2基因的表达

为进一步了解中枢神经系统中选择性易损伤的分子机制,采用大鼠短暂前脑缺血再灌流损伤动物模型,应用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交、原位杂交及免疫组织化学方法,检测了ｈｓｐ７０及ｂｃｌ－２基因的表达及其组织学分布。发现易损伤的海马ＣＡ１区锥体细胞出现ｈｓｐ７０基因的诱导表达,ＢＣＬ－２蛋白合成受抑制;而耐受缺血的海马ＣＡ３区锥体细胞则明显地持续表达ＢＣＬ－２蛋白,却未见明显的ｈｓｐ７０基因表达。因此提示,ｈｓｐ７０基因的表达是神经元缺血的应激指征,也可能对神经元有保护作用;ＢＣＬ－２蛋白对神经元有保护作用     

右美托咪定对肺缺血/再灌注损伤小鼠内质网应激相关分子Caspase-12表达的影响

目的：探讨右美托咪定（DEX）对肺缺血/再灌注（I/R）损伤小鼠内质网应激（ERS）相关分子天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-12（Caspase-12）表达的影响。方法：选用C57BL/6J小鼠复制在体左肺原位I/R损伤模型。随机将40只小鼠分为4组（n=10）：假手术组（sham组）,I/R损伤组（I/R组）,生理盐水对照组（NS组）,右美托咪定干预缺血/再灌注组（DEX组）。DEX组在夹闭小鼠左肺门30 min前经腹腔注射DEX 25 μg/kg,NS组为用同DEX组等体积的生理盐水替代DEX,其余操作同DEX组。3 h肺再灌注结束后,留取左肺。测定肺组织湿/干重比（W/D）及总肺含水量（TLW）,光镜观察肺组织形态学改变,对肺组织进行损伤评估（IQA）。原位末端标记（TUNEL）法检测组织细胞凋亡指数（AI）,蛋白免疫印迹法（Western blot）和逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）分别检测Caspase-12、葡萄糖调节蛋白78（grp78）蛋白和mRNA表达水平。结果：与sham组比,I/R组和NS组肺W/D、TLW、IQA、AI均明显升高（P<0.01）,肺组织形态结构破坏明显,Caspase-12、grp78蛋白和mRNA表达量增加（P<0.01）;I/R组与NS组相比,两组Caspase-12、grp78蛋白和mRNA表达量无明显差异（P>0.05）。DEX组与I/R组比,W/D、TLW、IQA和AI均有下降（P<0.01或P<0.05）,肺组织形态学改变明显减轻,Caspase-12和grp78蛋白和mRNA表达量下降（P<0.01）。结论：DEX可有效缓解小鼠肺缺血/再灌注性损伤,其机制可能与其对抗ERS中Caspase-12引起的细胞凋亡有关。     

微卫星标记及其在鸟类中的应用

微卫星DNA作为一种分子标记,以其诸多优点被认为是各类遗传标记中最有价值的一种。目前已被广泛应用于鸟类的研究中。本文介绍了微卫星DNA标记的分布特点、突变机制和作为分子标记的特点,并综述了微卫星DNA标记在鸟类的亲权分析及种类鉴定、遗传图谱构建及基因定位、物种进化历史揭示和遗传多样性研究中应用现状。     

加性基因效应与分子标记回归方程的关系

控制数量性状的基因作用历来是遗传学工作者所关注的重要课题．本文对以正交表形式表现的共显性动物分子标记资料,根据加性效应基因控制的数量性状遗传模型配合了动物分子标记回归方程通式．结果表明：对以正交表形式表现的加性效应基因共显性分子标记资料配合的分子标记回归方程,可对加性等位基因的相对作用差加以估计,并可作为育种的依据．     

分子标记技术及其在分离和克隆水稻基因中的应用

分子标记是近些年来发展起来的一种分子生物学技术,利用各种分子标记可以构建水稻高密度的分子遗传图谱,并进行基因定位和克隆。本文概述了几种常用的分子标记及其在研究水稻基因中应用进展。     

DNA甲基化在克罗恩病中的调控作用

克罗恩病(Crohn's disease, CD)是一种慢性、反复发作的多病因肠道异质性疾病。在此过程中,CD可显著改变肠道黏膜组织形态及炎症相关基因的甲基化水平,并可影响血细胞炎症基因的甲基化修饰,进而调控相关基因的表达并诱导CD相关的炎症、黏膜损伤等病理反应,这也意味着特定位点的DNA甲基化可作为CD诊疗的潜在分子靶标。该文将综合阐述CD与DNA甲基化修饰的相关性及DNA甲基化作为CD诊断分子标记的可行性。