Bcl—2的抗细胞凋亡机制

Ｂｃｌ－２的抗细胞凋亡机制＠郑英如＠陈竹钦￥第三军医大学附属大坪医院Ｂｃｌ２的抗细胞凋亡机制郑英如陈竹钦（第三军医大学附属大坪医院，重庆６３００４２）ｂｃｌ２为一原癌基因，通过其所编码蛋白Ｂｃｌ２而发挥其抑制细胞凋亡的功能。在生理情况下，Ｂｃｌ２在...     

细胞色素c与细胞凋亡

在哺乳动物细胞凋亡的发生过程中,位于线粒体内膜外侧的细胞色素ｃ被释放进入胞质,作为辅助因子参与死亡蛋白酶－３的激活,后者在凋亡过程中起到重要作用。Ｂｃｌ－２、Ｂｃｌ－ＸＬ,Ｂａｘ可阻止或诱导线粒体细胞色素ｃ释放入胞质,这可能是Ｂｃｌ－２,Ｂｃｌ－ＸＬ,Ｂａｘ调节凋亡的机制之一。     

Bcl—2及其相关蛋白与细胞调亡的调节

在许多类型的细胞中,Ｂｃｌ－２蛋白抑制由各种不同的信号诱导的凋亡,并且对正常发 提示肿瘤形成都有重要的作用。但Ｂｃｌ－２的作用机制还不清楚。近年来的研究已揭示了一系列对细胞凋亡进行正或负调节的Ｂｃｌ－２相关基因产物,Ｂｃｌ－２可与其中的某些蛋白如Ｂａｘ形成异二聚体。     

Bcl—2抑制电离辐射诱发细胞凋亡的线粒体机制探讨

低剂量电离辐射能够诱发细胞凋亡的发生,Ｂｃｌ－２能够抑制多种因素诱发的细胞凋亡,本文报道了Ｂｃｌ－２基因转染细胞克隆对４ＧｙＸ－射线诱发细胞凋亡的影响及其与可能的机制。结果表明,高度表达Ｂｃｌ－２的细胞克隆在７２ｈ内明显抑制了４ＧｙＸ－射线诱发的ＣＨＯ细胞凋亡,进一步的机制探讨表明,Ｂｃｌ－２能够维持或恢复受电离辐射损伤而降低的线粒体膜电位水平,结果提示：Ｂｃｌ－２对低剂量电离辐射诱发的细胞凋亡的     

Bcl—2基因与细胞编程死亡

细胞编程死亡在生物体的发育形成及功能维持中起着重要作用。本着重介绍Ｂｃｌ－２基因及其产物对细胞编程死亡的抑制,探讨了Ｂｃｌ－２基因的作用机制,指出Ｂｃｌ－２基因的研究有重大的理论意义及应用前景。     

新成员Bak基因及Bcl—2家族

Ｂｃｌ－２蛋白家族在细胞编程死亡的调控中起重要的作用,本综述了Ｂｃｌ－２家族新成员－Ｂａｋ的特点及其生物学活性,并就Ｂａｋ及Ｂｃｌ－２家族成员对细胞死亡调控机制进行了初步探讨。     

细胞凋亡的分子机理

细胞凋亡是机体生长发育,细胞分化和病理状态中细胞自主性死亡的过程,调节控制细胞凋亡的基因有存活基因和致死基因两大类,存活基因包括Ｂｃｌ－２及其家族某些成员的基因,原癌基因和病毒基因,这些基因的过量表达可阻止细胞的凋亡,致死基因包括Ｂｃｌ－２家族的另一些成员的的基因、ＩＣＥ家族基因以及ｍｙｃ、ｐ５３和Ｒｂ基因等。细胞因子、激素和细胞间质等细胞外部因素可能通过信号传递途径影响上述基因表达而间接地调节细     

CED—4和细胞凋亡信号传递

ＣＥＤ－４是线虫细胞凋亡信号通路上的信号接头分子,具有信号接头和活化ＣＥＤ－３的功能,它的同源类似物Ａｐａｆ－１在哺乳动物细胞凋亡过程中也具有信 号接头分子的作用,可寡聚化并与ｃａｓｐａｓｅｓ－９,Ｂｃｌ－ｘＬ形成三元复合传递细胞凋亡信号。     

重组RA—538及反义c—myc腺病毒对人胃癌,食管癌和bcl—2高表达细胞系的作用

本课题研究ＲＡ５３８、反义c-ymc重组腺病毒对人胃癌（ＳＧＣ７９０１）、食管癌（Ｅ Ｃ１０９、ＥＣ８７１２）、正常人胚肺２ＢＳ（２ＢＳ）及ｂｃｌ－２高表达细胞第的体仙外生物学作用及其分子机制。结果显示Ａｄ－ＲＡ５３８及Ａｄ－ＡＳｃ－ｍｙｃ对ＳＧＣ７９０１细胞体内外均具有明显的生长抑制及凋亡诱导作用,并能抑制其ｃ－ｍｙｃ、ｂｃｌ－２、ｃｙｃｌｉｎＤ１基因的表达及刺激ｂａｘ基因的表达。对ＥＣ１０９、ＥＣ８     

小鼠成纤维细胞凋亡过程中P53与bcl-2表达的时序性

为探讨细胞凋亡过程中,ｂｃｌ－２与Ｐ５３,这两种凋亡关键性基因的相互关系,用５－氟尿嘧啶（５－Ｆｕ）诱导小鼠正常与恶性转化的成纤维细胞的凋亡,观察了这两种基因在凋亡过程中表达变化的时序．经流式细胞计检测,这两种细胞在５－Ｆｕ作用２４ｈ均出现了凋亡峰,细胞存活率随之下降,ＤＮＡ电泳显现梯状断裂．Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交结果显示,在５－Ｆｕ作用６ｈ后两种细胞Ｐ５３ｍＲＮＡ水平已明显增高,而ｂｃｌ－２ｍＲＮＡ水平则在作用１２ｈ方明显降低．Ｐ５３上调与ｂｃｌ－２下调的明显时序性,说明Ｐ５３具备作为ｂｃｌ－２基因负调控转录因子的条件．由此,为进一步了解凋亡过程的ｂｃｌ－２基因下调机理提供了线索     

bcl－2基因家族对细胞凋亡的调节

ｂｃｌ－２基因为一原癌基因,因其在淋巴瘤和白血病中出现重排而得名。近年研究表明,ｂｃｌ－２基因是细胞凋亡的重要抑制基因,它的过度表达是癌症和自身免疫病发生的重要原因。最近又发现了几个与ｂｃｌ－２基因有不同程度同源性的调节基因,也在细胞凋亡中发挥作用。     

神经酰胺诱导药物敏感型和耐药型细胞凋亡机制的探讨

以药物敏感型细胞株Ｋ５６２／Ｓ和耐药型细胞株Ｋ５６２／Ａ０２为对象．观察原癌基因Ｂｃｌ－２的表达量在两种细胞中的差异,以及神经酰胺作为一个新的脂质第二信使诱导细胞凋亡的能力,并利用酪氨酸激酶抑制剂ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ,酪氨酸磷酸酯酶抑制剂ｖａｎａｄａｔｅ,观察酪氨酸可逆磷酸化与细胞凋亡间的关系．结果显示：在Ｋ５６２／Ａ０２中Ｂｃｌ－２的表达量明显高于Ｋ５６２／Ｓ;外源性神经酰胺能成功地诱导Ｋ５６２／Ｓ,Ｋ５６２／Ａ０２细胞凋亡,凋亡细胞具有典型的形态学改变和ＤＮＡ“Ｌａｄｄｅｒ”形成,ＦＣＭ检测出现凋亡细胞峰,但在同样的诱导条件下,Ｋ５６２／Ｓ细胞凋亡明显高于Ｋ５６２／Ａ０２细胞．ＦＣＭ检测ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ能显著改变这两种细胞生长周期,但细胞阻滞于Ｇ２／Ｍ期,便对神经酰胺诱导的细胞凋亡无明显作用,ｖａｎａｄａｔｅ单独对细胞地明显作用,但与神经酰胺共同作用能明显提高细胞凋亡率．以上结果表明在药物诱导的细胞调亡中Ｂｃｌ－２基因起重要作用,神经酰胺能诱导Ｋ５６２／Ｓ和Ｋ５６２／Ａ０２细胞调亡．     

神经酰胺：细胞凋亡信号转号的第二信使分子

神经酰胺是细胞凋亡信号调控中的一个第二信使因子,许多应激刺激能激活神经鞘磷脂循环产生神经酰胺诱导多种细胞体系发生凋亡。神经酰胺介导细胞凋亡的机理尚未完全明了,可能是通过多个下游靶分子包括ＣＡＰＫ,ＣＡＫＫ,ＰＫＣ,ＳＡＰＫ／ＪＮＫ,ＣＰＰ３２,Ｂｃｌ－２以及Ｒａｓ－ＲａｃｌＪＮＫ／ｐ３８－Ｋ→ＧＡＤＤ１５３信号传导链等作用于不同的信号转导途径而诱导细胞凋亡的。     

慢性缺氧大鼠肺血管c-myc及bcl-2基因表达研究

应用免疫组织化学和Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交方法,对慢性缺氧大鼠肺组织（主要是肺血管壁）原癌基因ｃ－ｍｙｃ和抗凋亡基因ｂｃｌ－２表达进行了研究。免疫组织化学观察提示,正常对照组大鼠肺血壁Ｃ－ｍｙｃ和Ｂｃｌ－２蛋白仅为弱阳性或不表达,慢性缺氧１、２周组大鼠肺血管壁这两种抗原表达比对照组显著增强,呈强阳性,Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交结果表明：慢性缺氧１、２周组大鼠肺组织内ｃ－ｍｙｃ和ｂｃｌ－２的ｍＲＮＡ表达比对照组显著增加,以上结果提示,ｃ－ｍｙｃ及ｂｃｌ－２两种基因调节的细胞增殖与凋亡可能参与了慢性缺氧性肺动脉高压的发病进程。     

细胞凋亡过程中bcl-2基因的甲基化

为探讨凋亡过程中,ｂｃｌ－２基因下调与该基因甲基化状态的关系,用５－氟尿嘧啶（５－Ｆｕ）诱导小鼠成纤维细胞ＮＣ３Ｈ１０,ＴＣ３Ｈ１０及人乳腺癌细胞ＭＣＦ－７的凋亡,分别检测了这三种细胞凋亡过程中ｂｃｌ－２的表达变化,与其调控区及编码区的甲基化状况．我们曾观察到５－Ｆｕ作用２４～４８ｈ出现细胞存活率下降,ＤＮＡ梯状断裂及细胞周期凋亡峰显现等典型凋亡现象．Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交显示,在５－Ｆｕ作用１２ｈ时ｂｃｌ－２ｍＲＮＡ水平已明显降低．由此,我们用小鼠ｂｃｌ－２（ｍｂｃｌ－２）及人ｂｃｌ－２（ｈｂｃｌ－２）基因调控区ＰＣＲ扩增片段及ｂｃｌ－２编码区（ｃＤＮＡ）片段作为探针,与５－Ｆｕ作用１２ｈ的细胞ＤＮＡ的ＭｓｐⅠ／ＨｐａⅡ酶切产物进行Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交,以未作用的细胞ＤＮＡ同样酶切杂交为对照．通过杂交带谱的变化,分析ｂｃｌ－２基因的甲基化状况．结果显示：ｍｂｃｌ－２及ｈｂｃｌ－２在５－Ｆｕ作用１２ｈ后调控区甲基化水平增高,但其编码区甲基化状态皆未出现可检出的变化．上述结果提示：ｂｃｌ－２基因调控区甲基化水平升高可能与该基因下调有关     

人胎儿胸腺内bc1－2基因表达与分布

采用免疫酶组织化学与地高辛标记的单链ｃＤＮＡ探针原位杂交技术,研究了抗凋亡基因ｂｃｌ－２在人胎儿胸腺组织中的表达与分布。结果ｂｃｌ－２ｍＲＮＡ及其蛋白均优势定位于髓质区。提示胸腺中ｂｃｌ－２基因表达调控发生在转录水平;ｂｃｌ－２基因介导的细胞凋亡状态可能参与Ｔ淋巴细胞的成熟过程。     

反义bcl—2在胃癌细胞中的诱导表达及促凋亡作用

为了观察ｂｃｌ－２反义ＲＮＡ对胃癌细胞ＳＧＣ７９０１的促凋亡作用及ＭＴ－１１启动子的启动诱导活性,用分子克隆方法构建载体,以电泳术,电镜术,流式细胞术,原位杂交,裸鼠肿瘤抑制试验及化学发光分析等方法观察,结果表明,可诱导载体ｐＭＴｂＮ具有良好的诱导启动转录活性,Ｂｃｌ－２蛋白的表达下降使胃癌细胞ＳＧＣ７９０１更易发生凋亡,致瘤性也发生改变。     

镉离子诱导BA／F3β细胞发生奇特的细胞调亡

细胞调亡一般都伴随着有ＤＮＡ片段化,活性氧含量增加,并能被过量的Ｂｃｌ－２所抑制。以ＢＡ／Ｆ３β细胞为模型,利用ＭＴＴ检测、Ｈｏｃｈｅｓｔ染色以及透射电镜检测等技术却发现,镉离子虽然可以诱导该细胞调亡,但是这种调亡没有ＤＮＡ片段化,也没有活性氧含量增加。此外,过量Ｂｃｌ－２对这种凋亡也没有保护作用。因此,可以确认镉离子诱导ＢＡ／Ｆ３β细胞发生了奇特的细胞调亡。     

光化学法脑缺血后细胞凋亡及其相关基因bcl-2表达的变化

采用ＴＵＮＥＬ染色及免疫组织化学技术对光化学法脑缺血后细胞凋亡及其相关基因ｂｃｌ－２表达的变化进行了研究。结果发现，缺血后１２ｈ，损伤侧皮层缺血区内凋亡细胞数及ｂｃｌ－２免疫反应阳性细胞数明显增加，一直持续至缺血后７２ｈ；并呈现下列时程变化：在缺血后３ｈ每张切片上几乎无凋亡细胞出现，以后逐渐增加，缺血后１２ｈ达到峰值，缺血后２４ｈ和缺血后７２ｈ逐渐减少，但仍高于假手术组水平。凋亡相关基因ｂｃｌ－２的表达在缺血后３ｈ以前不明显，缺血后１２ｈ逐渐增加，缺血后２４ｈ最多，以后逐渐下降。上述结果提示，缺血后凋亡细胞的时程变化可能与缺血后梗塞灶的发生和发展有关，而ｂｃｌ－２表达的变化可能与抑制细胞凋亡、发挥内源性细胞保护作用有关。     

镉离子诱导BA/F3β细胞发生奇特的细胞凋亡

细胞凋亡一般都伴随有ＤＮＡ 片段化, 活性氧含量增加, 并能被过量的Ｂｃｌ２ 所抑制。以ＢＡ／Ｆ３β细胞为模型, 利用ＭＴＴ 检测、Ｈｏｃｈｅｓｔ 染色以及透射电镜检测等技术却发现, 镉离子虽然可以诱导该细胞凋亡, 但是这种凋亡没有ＤＮＡ 片段化, 也没有活性氧含量增加。此外, 过量Ｂｃｌ２ 对这种凋亡也没有保护作用。因此, 可以确认镉离子诱导ＢＡ／Ｆ３β细胞发生了奇特的细胞凋亡。