流行性出血热灭活疫苗人体试验的反应观察

由流行性出血热(EHF)病毒浙_(10)株感染沙鼠肾细胞,经0.05％β-丙内酯灭活研制成的EHF灭活疫苗,于4℃放置7个月后,对10名志愿者免疫三针(0天、7天、28天各注射1ml)。结果免疫者的局部和全身均无任何副反应。首针免疫后第28天,血清用反向被动血凝抑制试验(RPHIA)、ELISA和间接免疫荧光试验(IFA)检测EHF抗体,分别有9人、9人和8人阳转,第42天,血清用三种方法检测抗体均全部阳转。空斑减少中和试验(PRNT)于第28天有4人阳转,第42天有9人阳转。上述结果表明,此疫苗对人体有较好的的安全性和免疫原性。     

丙肝病毒核心蛋白与乙肝病毒核心抗原的融合表达及其性质研究

构建了丙肝病毒核心蛋白 ( 1～ 191)及其N端 ( 1～ 69)和 ( 1～ 40 )与乙肝病毒核心抗原 ( 1～ 14 4 )羧端的融合克隆 ,在大肠杆菌中进行了表达 .其表达产物B14 4C191,B14 4C69和B14 4C40同时具有乙肝核心抗原 (HBc)和丙肝核心蛋白 (HCc)的双重抗原性和免疫原性 .CsCl密度梯度超离心和电镜观察表明 ,融合蛋白能组装成颗粒 .比较等量的融合蛋白的抗原性和免疫原性后发现 ,融合的HCc长度对HBc的抗原性和免疫原性影响不大 .而B14 4C69和B14 4C40比B14 4C191免疫小鼠能产生更高的抗HCc抗体 .利用表达的融合蛋白建立了ELISA法 ,对人血清中抗HBc抗体和抗HCc抗体进行了检测 .     

E.tenella感染雏鸡特异性抗体的动态变化和母源免疫的研究

本实验用斑点酶联免疫试验 (Dot ELISA)检测了E .tenella感染雏鸡特异性抗体、免疫母鸡卵黄和后代血清中特异性母源抗体的动态变化及不同日龄雏鸡的抗球虫水平。结果表明 :(1)雏鸡感染E .tenella后第 6d即可在循环血液中检测到特异性IgG ,于第 18天达到峰值 ,第 30天降至感染后第 7天时的水平。 (2 )母鸡二次免疫后第 5天卵黄中即有高水平的母源抗体 ,免疫母鸡后代 1日龄时母源抗体滴度高达 9.83,与未免疫对照组差异极显著 (P <0 .0 1) ,二者都随着日龄增长降低 ,但免疫组下降幅度很小 ,2 9日龄时仍和对照组 18日龄水平相当。 (3)免疫母鸡后代对再感染的抵抗力显著增强 ,卵囊减少率高达 93%,抗球虫指数和相对增重率都与对照组差异极显著 (P <0 .0 1) ,雏鸡的抗球虫水平随着日龄增长逐渐降低 ;母源抗体、抗球虫指数和相对增重率三者之间两两呈现明显的正相关 ,而这三者又都与卵囊产量呈明显的负相关。     

抗霍乱毒素B亚单位合成肽抗体的特性

<正> 有几个研究小组已报道霍乱毒素B亚单位合成肽能有效激发产生抗霍乱毒素的中和抗体。该合成肽有希望表现出霍乱毒素的生物功能,它对于研究霍乱毒素B亚单位的结构与功能(霍乱毒素结合GM_1-神精节苷脂和毒素进入细胞膜内分化)很有帮助。 我们根据霍乱毒素B亚单位结构制备出合成肽并检测了它的生物学活性。 1)根据Merrified的固相法我们合成了3个肽,CTB30-48,CTB41-50和CTB84-97(数字代表B亚单位N末端氨基酸残基的限定位置)。在合成中承蒙大阪大学Dr_1 Shimonish合作。 2)用肽-BSA(牛血清白蛋白)结合体免疫家免制备的抗肽血清与霍乱毒素呈     

HCV核心区与HBV核心区融合基因的DNA免疫

构建了在CMV启动子控制下在真核系统表达丙肝核心蛋白基因全长(HCc1 91 )及其氨端片段 (HCc6 9及HCc40 )的表达克隆 ,以及这 3种不同长度的HCc分别与乙肝核心区基因 (HBc1 44 )在羧端融合的表达克隆 .在COS细胞中实现了暂时表达 .ELISA和Westernblot分析表明 ,表达产物具HCc抗原性或同时具有HBc的抗原性 .非融合和融合基因的DNA直接免疫小鼠 ,能有效地产生抗HCc抗体或同时产生抗HBc抗体 .融合形式要比非融合形式产生抗HCc抗体的持续时间长 .结果表明不同长度的HCc的融合并不影响HBc免疫原性的表现 ,却有利于HCc免疫原性的表现 .     

肠道菌共同抗原ECA(续二)

<正> 六、免疫原性 免疫原性菌株 抗ECA最初是在几个大肠艾希氏菌血清型(O14,O56,O124,O114)免疫的家兔血清中发现的,而许多大肠艾希氏菌的其它血清型免疫家兔明显地不能使家兔产生抗ECA。当用完整的死菌作免疫原时,很少几株菌(虽然以不同的血清学试验ECA为阳性)能导致抗ECA抗体的产生(表4)。虽然后来发现也能从无免疫原性菌种,如以在85％乙醇中溶解的组分制备免疫原性ECA,免疫原性菌种仍有区别:它们的有免疫原性的ECA部分是乙醇不溶解的,并存在于和     

重组霍乱毒素B亚基与恶性疟原虫多抗原表位融合蛋白对恒河猴的免疫保护作用研究

使用重组霍乱毒素B亚基（CTB）与恶性疟原虫抗原表位融合蛋白（AWTE）免疫恒河猴,研究其免疫应答并观察对食蟹疟原虫攻击的保护作用。结果表明：在0,14,28天分别通过鼻腔和肌肉注射免疫恒河猴,第3次免疫后2周,抗CTB抗体平均滴度可达1∶512（鼻腔免疫）和1∶10000（肌肉免疫）;肌肉免疫后抗疟原虫抗体滴度也显著高于鼻腔免疫组。用125×10⁸个食蟹疟子孢子攻击,对照组5只恒河猴在攻击后10～14d全部感染,其中1只在攻击后21d死亡,另4只重度感染,感染持续30d以上。鼻腔免疫组的5只动物均在攻击20d后出现原虫,其中3只轻度感染,感染持续4d后即恢复,其余2只感染持续36d以上。肌肉注射组3只未受感染,其余2只在攻击后19d后轻度感染,感染4d后即完全恢复。以上结果表明,使用霍乱毒素B亚基为载体蛋白构建的重组疟疾疫苗具有良好的免疫原性,对食蟹疟攻击具有良好的交叉免疫保护作用。     

伤寒沙门氏菌Ty21α-霍乱弧菌杂交株口服菌苗的霍乱弧菌O-抗原在人体内的免疫迹象

<正>伤寒沙门氏菌Ty21a——一种安全有效的口服伤寒活苗苗——已被键议作为公认的外源性保护性抗原的载体。这种杂交株的称之为EX645的衍生林可产生霍乱弧菌Inaba株的O-抗原,最近显示出对用霍乱弧菌攻击的人类志愿者诱导低水平的抗临床霍乱的保护作用。尽管在口服EX645菌苗后产生强的局部性刺激和系统的体液抗-伤寒脂多糖(LPS)抗体应答,它们对霍乱弧菌O-抗原的应答却是低水平的。所观察到的抗霍乱弧菌攻击的低水平保护则属于不充足的局部抗体应答。     

真核细胞表达单纯疱疹病毒Ⅰ型包膜糖蛋白B及其抗原性与免疫原性分析

为在真核细胞中表达并纯化I型单纯疱疹病毒(HSV I)包膜糖蛋白gB,并分析其抗原性和免疫原性,化学合成了包膜糖蛋白gB1胞外区基因片段,构建真核表达载体,并转染至HEK293细胞,表达的蛋白用羊抗HSV1+HSV2血清作为一抗,用ELISA检测其抗原性;用纯化的gB1蛋白免疫昆明小鼠,观察诱发抗体产生的时间及其效价,并用ELISA和Western blot检测小鼠抗gB1多克隆抗体特异性识别重组gB1抗原的能力,评价其免疫原性。结果显示在HEK293细胞中成功表达重组gB1蛋白,ELISA证实羊抗HSV1+HSV2多抗能够识别重组gB1蛋白;重组gB1蛋白免疫小鼠7周后,小鼠血清中多克隆抗体效价达到5×103,表明在真核细胞中高效表达并纯化的重组gB1蛋白具有良好的抗原性和免疫原性,为HSV检测试剂和疫苗研究提供了理论基础。     

A型塞内卡病毒的病毒样颗粒的制备及其免疫原性分析

为了研制A型塞内卡病毒 (Senecavirus A,SVA) 的病毒样颗粒 (Virus-like particles,VLPs) 疫苗,以SVA田间流行毒株CH-FJ-2017结构蛋白基因序列为研究对象,构建了能够同时表达SVA的3种结构蛋白VP0、VP1和VP3的单个原核重组表达质粒pET28a-SVA-VP031。通过大肠杆菌Escherichia coli表达、亲和层析纯化和体外自组装,获得SVA VLPs。透射电子显微镜鉴定显示,SVA的3种结构蛋白在体外能够自组装成直径约25–30 nm的VLPs,并且动物免疫试验结果表明,该VLPs能够有效刺激豚鼠产生高水平的抗原特异性中和抗体。上述研究结果为SVA VLPs疫苗的研制奠定了基础。     

不同年龄女性接种二价HPV疫苗(大肠杆菌)的免疫原性比较

正现已证实由大肠杆菌(E.coli)制备的二价HPV疫苗具有安全性和有效性。特异性抗体水平是评价疫苗接种效果的重要指标。作者研究比较了HPV16/18疫苗在不同年龄女性中的免疫原性。由三期临床试验和免疫桥接试验分析疫苗的免疫原性(PPS-I)。在第0个月和最后一剂免疫后1个月后(第7个月)收集血清样品,     

大肠杆菌热稳定肠毒素与霍乱毒素B亚单位融合蛋白免疫原性的评价

构建了霍乱毒素B亚单位(CTB)和大肠杆菌热稳定肠毒素(ST）的重组表达载体pMCST1、pMCST2。二的不同是,前为单拷贝ST,后为双拷贝ST。在大肠杆菌DH50α中融合蛋白高效表达。用这两种重组蛋白分别免疫小鼠,都诱导产生了高滴度的抗CTB和抗ST的血清。表明这两组融合蛋白具有良好的CTB和ST的免疫原性,为进一步构建抗CTB和抗ST的产毒性细菌腹泻疫苗打下了基础。     

人绒毛膜促性腺激素抗独特型抗体在小鼠中的免疫反应

我室制备了人绒毛膜促性腺激素(hCG)的抗独特型抗体,它们与hCG有相似的抗体和受体结合位点,因而认为它们可能具有hCG内镜像结构。如果这些抗独特型抗体也具有与hCG类似的免疫原性,可望利用它们来配合或代替hCG制备更好的免疫避孕疫苗。我们用一种hCG抗独特型抗体(Anti-BAH_1)免疫小鼠可得到抗hCG抗体,这些抗体占所产生的Anti-Anti-BAH_1抗体的1—2％,最高滴度可达1:2万左右。这个滴度可保持2个月左右,以后逐步下降,在停止免疫半年后抗体滴度降到最高滴度的15.6％。用Anti-BAH_1与hCG同时免疫,对hCG的免疫反应有一定抑制作用,但先用Anti-BAH_1免疫对随后的hCG免疫反应有一定增强作用。表明利用抗独特型抗体可能调控对hCG的免疫反应。这种调控作用与所采用的免疫方式及抗原剂量有关。     

口服轮状病毒活疫苗安全性和免疫原性观察

为了观察口服轮状病毒活疫苗在儿童服用后的安全性和免疫原性效果。于惠州市选择63名6月龄~3岁的儿童为观察对象。所用疫苗由兰州生物制品研究所生产,服苗前和服苗后4~5周采末梢血,以中和试验检测抗轮状病毒(G1、G2、G3、G4)型抗体及疫苗株(LLR型)的抗体水平。63名儿童服苗前、后采集的血清样本双份配对均有效者为37人。37人服苗后各型抗体阳转率为47.06%~72.72%;≥4倍增长率为43.40%~66.04%;各型中和抗体免疫前后平均增长2.67~3.01倍。63名服苗儿童中的不良反应为低热3例(24.67%)、中热1例(1.59%)、无高热反应。观察结果表明,轮状病毒具有良好的免疫原性和安全性。     

甲型H1N1流感病毒裂解疫苗的免疫原性和安全性

目的评价甲型H1N1流感病毒裂解疫苗(简称甲型H1N1流感疫苗)的免疫原性和安全性。方法按照随机、双盲、安慰剂对照的原则,采用0、21天免疫程序,选择3岁及3岁以上健康者1 202人。分组为3~11岁、12~17岁、≥60岁组,按照人数基本为1∶1的比例随机分别接种7.5μg和15.0μg甲型H1N1流感疫苗;18~59岁组按照人数基本为1∶1∶1的比例随机分别接种7.5μg、15.0μg甲型H1N1流感疫苗和安慰剂对照。观察各组接种后的不良反应率以及免疫前后血凝抑制(HI)抗体阳转率、保护率、GMT水平和平均增长倍数。结果受试对象的安全性结果显示7.5μg和15.0μg组不良反应发生率分别为8.74%(48/549)和13.88%(74/533),其中Ⅱ级反应率分别为0.36%(2/549)和1.13%(6/533),未观察到Ⅲ级及以上不良反应和其他异常反应及严重不良事件。2剂接种未见不良反应叠加现象。7.5μg或15.0μg试验疫苗首剂免疫后,血清抗体阳性率分别为85.13%(395/464)和90.77%(413/455),保护率分别为85.56%(397/464)和91.43%(416/455),抗体GMT较免疫前分别增长36.1倍和52.6倍。2剂免疫后,血清抗体阳性率分别是97.84%(454/464)和99.12%(451/455),保护率分别是98.06%(455/464)和9 9.56%(453/455),抗体GMT较免疫前分别增长63.3倍和96.0倍。4个年龄组(3~11岁、12~17岁、18~59岁及≥60岁年龄组)7.5μg和15.0μg组HI抗体阳性率和保护率均大于70%,GMT较免疫前均增长2.5倍以上,结果显示7.5μg和15.0μg甲型H1N1流感疫苗接种1剂后抗体水平已达到研究方案中设定的预期标准,免疫2剂后抗体阳性率和抗体水平明显提高。结论临床试验表明甲型H1N1流感疫苗具有良好的安全性和免疫原性,且接种1剂15.0μg甲型H1N1流感疫苗,即可在3岁和3岁以上人群中产生良好的免疫效果。     

ACYW135群脑膜炎球菌多糖疫苗的免疫原性评价

目的评价ACYW135群脑膜炎球菌多糖疫苗在昆明健康人群接种的免疫原性,为流脑防治策略提供依据。方法 2010年对昆明市2岁!3、岁!、4岁!、5岁!、6岁!、10岁!、≥15岁共7个年龄组分层随机抽取筛选出654名健康人,分别采集免前和免后1个月血清。用微量杀菌力试验(TTC法)分别检测血清中抗A、C、Y和W135群脑膜炎球菌杀菌抗体的水平。结果免后1个月抗A、C、Y和W135群脑膜炎球菌的杀菌抗体阳转率分别为96.99%、96.37%、88.43%和87.07%,抗A、C、Y和W135群膜炎球菌血清的杀菌抗体几何平均滴度(GMT)分别为1∶297.991、∶195.80、1∶72.74和1∶45.95。结论 ACYW135群脑膜炎球菌多糖疫苗在≥2岁以上的健康人群中有较好的免疫原性。     

小球藻摄入干预对抗阻运动诱发的肌肉损伤的影响

为探究小球藻摄入干预对抗阻运动诱发的肌肉损伤的影响,本研究招募32名排球运动员为受试者,进行随机对照双盲实验设计,分别随机分为安慰剂组(n=16)与小球藻组(n=16),每位受试者以4.5 g/d的剂量连续服食小球藻或安慰剂35 d,进行单次抗阻运动以诱发肌肉损伤,损伤模式以85%最大肌力为负荷进行大腿蹬卧推、大腿曲屈、卧推3个动作各进行4组,每组动作重复8次。在摄入小球藻或安慰剂前,运动后24 h,运动后48 h分别测量血清肌酸激酶和乳酸脱氢酶活性,以量表评估肌肉疼痛程度,并在运动后第3天、第4天、第5天测量最大肌力表现。研究发现,抗阻运动造成血液肌酸激酶活性与肌肉酸痛感增加,肌肉力量降低;小球藻组运动后第24 h和第48 h血液肌酸激酶活性与肌肉酸痛感显著低于安慰剂组;小球藻组运动后3～4 d大腿推蹬力量显著高于安慰剂组,运动后4～5 d大腿曲屈与卧推力量显著高于安慰剂组。研究表明,小球藻摄入干预可以改善抗阻运动诱发的肌肉损伤,避免运动后的肌肉疲劳,同时降低恢复期的肌肉损伤。     

猪塞内卡病毒A型间接ELISA抗体检测方法的建立

为了建立一种基于固相合成多肽技术的猪塞内卡病毒A型抗体血清学检测方法。本研究对猪塞内卡病毒A型VP1、VP2和VP3三种重要结构蛋白的B细胞表位进行设计并筛选到SVA1601、SVA1602、SVA1603和SVA1605共四条表位多肽,进而建立了一种用于检测猪塞内卡病毒A型抗体的间接ELISA方法,并验证该方法的检测敏感性、特异性、重复性以及与血清中和试验的符合率。试验结果显示,建立的间接ELISA方法对6份感染血清的最高稀释倍数为1:640,特异性为99.1%,批内和批间变异系数分别为2.4%～6.5%和4.4%～10.3%。与血清中和试验比较,符合率为97.7%。结果显示采用SVA1601、SVA1602、SVA1603和SVA1605建立的间接ELISA方法的敏感性较高,且重复性较好,可用于临床血清中猪塞内卡病毒A型特异性抗体的检测。     

重组SARS-CoV-2刺突S1-Fc融合蛋白在非人灵长类动物中诱导高水平的中和反应

正COVID-19疫情已经在全球大流行,全球确诊病例超过200万,死亡人数超过12.6万人。在本研究中,作者检测了CHO表达的重组SARS-CoV-2 S1-Fc融合蛋白作为潜在COVID-19候选疫苗成分在小鼠、兔和猴中的免疫原性。作者证明了S1-Fc融合蛋白具有极强的免疫原性,第7天观察到的强抗体滴度结果证明了这一点。使用假病毒中和试验检测S1-Fc融合蛋白免疫家兔后,第14天观察到强的病毒中和活性。最重要的是,在不到20天的时间里,     

SEA为载体蛋白的A/C群脑膜炎奈瑟菌结合物初步免疫效果评价

目的对以金黄色葡萄球菌肠毒素A(staphylococcal enterotoxin A,SEA)为载体蛋白的A/C群脑膜炎奈瑟菌结合物的免疫效果进行初步评价。方法采用1-氰基-4-二甲氨基-砒啶四氟硼酸(1-cyano-dimethylamino pyridiniumtetrafluoroborate,CDAP)活化法,将SEA、破伤风类毒素(tetanus toxin,TT)分别与A群脑膜炎奈瑟菌荚膜多糖(group A N.meningitidis capsular polysaccharide,GAMP)、C群脑膜炎奈瑟菌荚膜多糖(group C N.meningitidis cap-sular polysaccharide,GCMP)结合制备结合物;将结合物分别免疫BALB/c小鼠,腹部皮下免疫3次,于第1针免后第9天、第19天、第27天眼眶采血,分离血清备用;检测体液免疫及细胞免疫反应水平。结果 SEA与GAMP结合后能增强抗-GAMP Ig G抗体水平,第3次免后GAMP-SEA组多糖抗体水平达到1∶12 800,高于GAMP组1∶400,但GCMP-SEA组结果不理想。SEA与GAMP结合后均能激发细胞免疫反应,IFN-γ和IL-4的SFC与GAMP组比较均升高,且IFN-γ高于IL-4。SEA与GAMP、GCMP结合后Th1/Th2细胞亚群比值分别达到23.48和22.19,高于GAMP组(14.09)和GCMP组(16.73),差异有统计学意义(P0.05),提示SEA与GAMP、GCMP结合后可激发细胞免疫。结论 SEA与GAMP、GCMP结合后既能增强GAMP、GCMP的免疫原性,提高体液免疫反应,又能激发细胞免疫反应,提示SEA具备作为A/C群脑膜炎奈瑟菌结合疫苗载体蛋白的可行性。