丹参的冠瘿组织培养和丹参酮的产生

用根癌农杆菌感染丹参无菌苗获得冠瘿组织,除菌后的冠瘿组织在无激素的Ms培养基上生长良好。经高压纸电泳检查,冠瘿组织中含有冠痿碱,证实根癌农杆菌的Ti质粒转化成功。冠瘿组织的生长和丹参酮的积累与基本培养基有关,B5和Ms培养基有利于生长．月增殖倍数分别达到102倍和90倍,而67-V和WP培养基则有利于丹参酮的合成,在培养过程中丹参酮能分泌到培养液中。研究表明用冠瘿组织作为培养系统,生产药用植物有效成分具有良好的开发前景。     

蜜环菌诱导子对丹参冠瘿组织积累丹参酮的影响

以 6 7_V液体培养基为基本培养基 ,利用计算机软件“均匀设计、回归分析及优化系统” ,研究了蜜环菌(ArmillariamelleaKarst)诱导子浓度、诱导子的加入时间与处理的收获时间对丹参 (SalviamiltiorrhizaBunge)冠瘿组织积累丹参酮的影响。结果表明 ,蜜环菌诱导子浓度为 119mL/L、第 0天加入诱导子、第 2 9天收获培养物与培养液时可获得最高的丹参酮生产量 (147mg/L ,P <0 .0 5 ) ,蜜环菌诱导子浓度为 113mL/L、第 0天加入诱导子、第 2 6天收获培养液时可获得最高的丹参酮生产量 (6 2mg/L ,P <0 .0 5 ) ,蜜环菌诱导子浓度为 87mL/L、第 0天加入诱导子、第2 8天收获培养物时可获得最高的丹参酮生产量 (94mg/L ,P <0 .0 5 )。结果证实 ,计算机软件“均匀设计、回归分析及优化系统”对于观察值受多因素影响的研究非常有效和方便。     

HPLC法测定丹参饮片中丹参酮ⅡA的含量

目的:采用高效液相色谱法测定市售八批丹参饮片中丹参酮ⅡA的含量.方法:高效液相色谱法,Inertsill ODS-SP(4.6× 150mm,5 μm),流动相:甲醇-水(75∶25),检测波长:270 nm,流速:1.0 ml/min.结果:丹参酮ⅡA在(1.43～68.35)μg/ml范围内有良好的线性关系,r=0.9999 (n=6).丹参饮片中丹参酮ⅡA的含量普遍偏低,只有山东饮片中的两个批次含量较高.结论:考察分析丹参饮片中丹参酮ⅡA的含量,可为临床使用提供依据.     

丹参分析样品中丹参酮的超声波辅助提取

为了提取丹参分析样品中隐丹参酮、丹参酮Ⅰ及丹参酮ⅡA等有效成分,建立了以CH3OH-CH2Cl2为提取溶剂的超声波辅助提取法。优化的提取条件是,液／固比：133．3mL／g,提取溶剂组成：φ（CH2Cl2）=0．2,提取时间：8min。与几种常规提取法（如甲醇回流法、CH3OH—CH2Cl2室温浸取法）相比较,超声波辅助提取法具有提取时间短、丹参酮提取量高等优点,适用于丹参中隐丹参酮、丹参酮Ⅰ及丹参酮ⅡA同时测定的样品前处理。     

西洋参冠瘿组织悬浮培养及其人参皂苷类成分的分离

对西洋参冠瘿组织悬浮培养生长特征进行了考察,并对其悬浮培养物中的人参皂苷类成分进行了提取、分离和鉴定。研究得到了培养物最大生物量收获时间［18.62 g/L(dry weight)］及其中最高人参皂苷累积时间（620.4 mg/L on the 27thday）。培养基中碳源、磷、氨基氮、硝基氮的利用率分别为91.8%, 100%, 81% 和97%。利用现代分离纯化方法从培养物中分离得到了4种人参皂苷类成分,利用理化及谱学技术分别鉴定为假人参皂苷F11（pseudoginsenoside F₁₁,Ⅰ）, 人参皂苷Rd（ginsenoside Rd,Ⅱ）, 人参皂苷Rb1（ginsenoside Rb1 ,Ⅲ）和人参皂苷Rb3（ginsenoside Rb3,Ⅳ）。     

氮、磷对丹参根系生长及总丹参酮累积的影响

通过盆栽和大田试验,对丹参生育期、器官发生与生长、干物质积累、养分含量及总丹参酮累积等进行了研究。结果表明,氮磷养分施入量为1：1时产量最高,对试验盆栽该配比处理的产量是对照的1．8倍,对大田试验该配比高肥区产量高出低肥区2．5倍,高出中肥区2．25倍。移栽时用做基肥的氮肥不能过多,否则会影响产量。氮磷养分施入量最佳配比为1：1。     

丹参多倍体性状和药材质量的关系

以通过组织培养诱导和选育的10个丹参（SalviamiltiorrhizaBge．）多倍体品系为材料,于1993年进行了田间品比试验,评价了药材产量和质量。结果表明：选出的10个品系均表现出典型的多倍体性状,药材（根）质量均较大幅度提高。10个品系中有2个品系的有效化学成分──丹参酮含量高于对照种,其中61－2-22品系为最优品系,不仅丹参酮含量比对照种高79％,而且药材产量也比对照高71．1％,因此平均每个小区生产丹参酮的数量比对照高206％,这一品系已经加速繁殖,供生产上示范推广。     

蜜环菌诱导子对丹参冠瘿组织积累丹参酮的影响

Using a computer software `uniform design, regression analysis and optimization system' (UROS), the effects of Armillaria mellea Karst elicitor, with respect to its concentration, time of supplement and harvest time, on the accumulation of tanshinones in the crown gall cultures of Salvia miltiorrhiza Bunge in 67-V liquid medium were studied. The result showed that the maximum tanshinone yield was 147 mg/L (P＜0.05）, 62 mg/L (P＜0.05）, 94 mg/L (P＜0.05） in the liquid medium and the cultures 29 day after addition of A. mellea (119 mL/L) at day 0, in the medium 26 day after the addition of 113 mL/L of A. mellea, 28 day after addition of 87 mL/L of A. mellea, respectively. The results confirmed that the computer software UROS was a good tool in the multi-factor study.     

西洋参冠瘿组织培养及其人参皂苷Re和人参皂苷Rg1的产生

考察了培养基组成、培养时间、接种量、pH值、肌醇浓度等对冠瘿组织生长及其人参皂苷含量的影响 ;用HPLC检测了冠瘿组织中人参皂苷Re和人参皂苷Rg1 的含量。高压纸层析电泳证实 ,根癌农杆菌Ti质粒上的T DNA片段已整合进入植物细胞核基因组中。在考察的 6种培养基中 ,White培养基最适合人参皂苷Rg1 的累积(0 0 95 % ) ,MS培养基最适合人参皂苷Re的累积 (0 194 % )。以MS为基本培养基培养 36d、32d时人参皂苷Re和人参皂苷Rg1 累积含量最高 (分别为 0 14 7%和 0 0 6 1% ) ;接种量为 4g、2g (FW flask) ,有利于人参皂苷Re和人参皂苷Rg1的累积 ;培养基pH 5 8时人参皂苷Re含量最高 (0 184 % ) ,培养基pH 5 6时人参皂苷Rg1 累积量最高 (0 0 5 4 % ) ;肌醇浓度为 0 0 5g L时 ,能促进人参皂苷Re合成 (0 182 % ) ,浓度为 0 30g L时 ,有利于人参皂苷Rg1 累积 (0 0 5 5 % )。     

远端霉素高产菌株的选育

目的：选育远端霉素高产菌株。方法：以远端霉素产生菌（Streptomyces distallicus）D32为出发菌株,经铜蒸汽激光和5-氟尿嘧啶（5-fu）及其复合处理。结果：在复合诱变组中获得一株远端霉素高产稳产突变株DZ-206,经发酵罐应用后,其产率较出发菌株提高1．38倍。结论：该方法诱变谱广,突变率高,能够快速有效获得抗生素高产菌株。     

樱桃砧木实生苗对根癌菌侵染的抗性及生理响应

以贵州樱桃的6个砧木实生苗为材料,采用人工接种根癌菌的方法,探讨它们对根癌菌侵染的抗性及生理响应特征,评价其抗病性能力。结果显示:(1)接种根癌菌120d后,青岩樱桃实生苗发病率较低(6.67%),冠瘿瘤直径较小(1.76mm),感病系数也较低(6.67),属高抗砧木;沿河樱桃实生苗发病率高达50.0%,冠瘿瘤直径达6.43mm,感病系数达33.76,属高感砧木。(2)感染根癌菌后,各樱桃砧木幼苗的生理特性受到一定影响,其叶片游离脯氨酸含量增加,根系过氧化物酶(POD)和超氧化物歧化酶(SOD)活性增强,而过氧化氢酶(CAT)活性降低,其中,青岩樱桃的游离脯氨酸含量升高幅度最大,沿河樱桃的保护酶活性变化幅度明显较大。(3)樱桃砧木幼苗的发病率与感病系数呈显著正相关(0.98*);发病率与SOD活性、感病系数与POD活性和SOD活性均呈显著正相关,相关系数分别为0.86、0.82、0.83;其余指标间相关性不显著。研究表明,6个樱桃砧木实生苗对根癌菌的抗性有明显差异,并以青岩樱桃最强,且其抗性强弱与其感病后叶片脯氨酸含量和根系的POD、SOD活性增加幅度有密切关系。     

高产细菌素菌株WJ K84-1的诱变筛选及其对植物病原菌抑菌机理的研究

以发根土壤杆菌K84为供试菌株,对其进行紫外诱变,采用定向竞争选择技术,筛选出高产细菌素的目的菌株WJK84-1,并对根癌农杆菌的抑菌作用及其抑菌机理进行了研究。通过琼脂扩散法和液体培养法测试表明,WJK84-1菌株和其产生的P-2001细菌素均对C58病原菌有明显的抑制作用。蛋白电泳谱带分析示出,细菌素对C58病原菌的作用是抑制蛋白合成,使其蛋白总量表达水平呈下降趋势,尤其是大分子量蛋白含量下降显著,有的蛋白谱带(R1、R4)缺失,且随细菌素浓度的增加,抑制作用更加强烈。扫描电镜观察,细菌素作用后的菌体不同部位出现缢痕,直至缢缩成颗粒状残体而死亡。透射电镜观察进一步证明,C58菌细胞膜被裂解,细胞结构被破坏而致死。樱桃接瘤实验表明,WJK84-1菌株和其产生细菌素均可抑制根瘤发生,抑瘤率达到83．4％左右。     

Cell Culture and Selection of High Flavonoids- producing Cell Lines in Saussurea medusa

Explants of stems and leaves of Saussurea medusa Maxim. were cultured on MS medium supplemented with 0.5 mg/L BA, 2 mg/L NAA, and from which factors, such as the media, plant hormones and culture temperature, as well as the addition of phenylalanine to the medium, that affect the callus growth, were investigated. The results showed that cells grew appropriately in MS medium supplemented with 2 mg/L NAA at 25 ℃. Phenylalanine was not suitable for cell growth in solid culture but it increased flavonoid production. The calli could be distinguished by colour with naked eyes into two cell lines, a faint yellow (A) and a red coloured (B), representing respectively the different colour of metabolite accumulations. A sensitive and rapid high-performance liquid chromatographic as well as a UV spectrophotometric method have been developed for detecting the flavonoids in cultured cells. It revealed that the A line contained 1.9% flavonoids and 0.42% jaceosidin, which was 2.5 times and 3.9 times more than B line; 2.6 and 4.2 times more than the initial callus cells respectively.     

假蜜环菌发酵工艺的优化研究

目前,国内普遍采用亮菌固体发酵工艺生产亮菌制剂。采用小型发酵罐液体深层发酵和液体静置发酵对亮菌发酵工艺进行优化研究。液体深层发酵采用28℃,200 r/min,通气量1∶1 v/v·m,培养7 d,亮菌干重为16.55g/L,其中菌丝体中多糖含量为5.42%,蛋白含量为1.75%;液体静置发酵采用500 mL三角瓶,28℃,150 r/min,摇瓶3 d后静置发酵14 d,亮菌干重可达10.69 g/L,发酵液中多糖含量为1.016 g/L,蛋白含量为0.320 g/L。对液体静置发酵进一步研究发现其发酵液中亮菌甲素含量可达3.118 mg/L。由此可见,两种发酵方式在保证生物量和活性成分的前提下,缩短了发酵周期,均优于传统的固体发酵工艺,值得工业生产借鉴。