三种卷柏属植物对人单核细胞白血病U937细胞的增殖抑制作用

为了观察中华卷柏、鹿角卷柏、卷柏等三种卷柏属植物的甲醇总提物、乙酸乙酯部位、石油醚部位样品对体外培养的人单核细胞白血病细胞U937细胞的增殖抑制作用。通过常规传代培养人单核白血病U937细胞,再用噻唑兰比色法(MTT)检测不同浓度样品作用于U937细胞12、24 h和48 h后的细胞增殖情况。中华卷柏和卷柏对U937细胞的增值抑制呈时间和剂量依赖性。鹿角卷柏对U937细胞的增值抑制呈剂量依赖性。药物作用24 h时,三种卷柏属植物对U937细胞均有显著抑制作用,其半数抑制浓度(IC50)分别为中华卷柏甲醇总提物102.54μg/m L、乙酸乙酯部位87.95μg/m L、石油醚部位91.63μg/m L;鹿角卷柏甲醇总提物118.69μg/m L、乙酸乙酯部位126.03μg/m L、石油醚部位135.8μg/m L;卷柏甲醇总提物103.92μg/m L、乙酸乙酯174.75μg/m L、石油醚102.64μg/m L。证明了三种卷柏均能有效抑制U937细胞的增殖,为后续对卷柏属植物抗癌机制的研究提供了方向。     

Rab23对乳腺癌细胞生长增殖的抑制作用

目的：研究Rab23分子对乳腺癌细胞生长增殖的作用,探讨这种作用是否与乳腺癌ER＋/ER-依赖性相关。方法：选取ER＋乳腺癌细胞系Bcap-37、MCF-7和ER-乳腺癌细胞系MDA-MB-231为研究对象,采用质粒转染提高细胞中Rab23基因的表达和RNA干涉技术减少其表达,运用克隆形成实验、BrdU掺入实验、MTT实验等技术检测Rab23分子对乳腺癌细胞生长、增殖的影响。结果：克隆形成实验提示,三种乳腺癌细胞系Rab23质粒转染组的集落形成数量明显少于对照组,而Gli1质粒转染组集落形成数量较对照组明显增加;BrdU掺入实验提示,Rab23转染组的三种乳腺癌细胞BrdU掺入率与对照组有明显减少（P＆lt;0.05）,而Rab23干涉组的BrdU掺入率较对照组升高（P＆lt;0.05）;MTT实验显示Rab23转染组A490值最低,其次为对照组,而Rab23干涉组A490值最高（P＆lt;0.05）。结论：Rab23分子对乳腺癌细胞生长增殖有抑制作用,这种抑制作用可能与乳腺癌ER＋/ER-依赖性无相关性。     

不同冷冻条件对骨髓造血细胞的CFU－GM形成能力及DNA活性的影响

本文对不同冷冻条件下人骨髓造血细胞的粒单系集落（ＣＦＵ－ＧＭ）形成能力及ＤＮＡ活性变化进行测定。结果证明：室温下低温保护剂二甲基亚砜（ＤＭＳＯ）使骨髓造血细胞形成ＣＦＵ－ＧＭ的能力下降;程序降温至－８０℃与降至－８０℃后与在液氮内冻存７天骨髓造血细胞相比较,二者形成ＣＦＵ－ＧＭ的能力以及ＤＮＡ活性均无明显变化;在程序降温过程中,消除融合热释放组骨髓造血细胞形成ＣＦＵ－ＧＭ的能力明显高于来消除融合热释放组。     

大蒜油对人CFu－L与CFu－GM集落形成能力的影响

本研究用体外细胞培养技术观察了大蒜油对人白血病细胞集落（ＣＦｕ－Ｌ）及骨髓粒单细胞集落（ＣＦｕ－ＧＭ）形成能力的影响。结果证明大蒜油对白血病细胞集落生长有明显的抑制作用,而相同浓度的大蒜油对正常人骨髓（ＢＭ）粒单细胞集落的形成能力亦有一定程度的抑制作用,但抑制作用较弱。     

软骨多糖对L1210白血病小鼠生长抑制作用的研究

目的:研究软骨多糖对L1210白血病小鼠的生长抑制作用,并探讨其抑瘤作用机理。方法:建立DBA/2小鼠L1210腹水瘤模型,将小鼠分为对照组、低剂量组、中剂量组和高剂量组进行实验,通过腹腔注射软骨多糖治疗,每天称重并记录小鼠的生存时间,计算生命延长率。于0h、24h、48h、72h抽取治疗组小鼠的腹水瘤细胞进行细胞周期的分析;采用常规HE染色观察细胞形态学变化;应用免疫荧光方法检测BCL-2和BAD蛋白表达变化,以进一步探讨软骨多糖的抑瘤机制。结果:软骨多糖可以明显提高DBA/2小鼠的生存率;细胞形态学观察可见细胞出现细胞浆浓缩、核固缩及凋亡小体等现象;软骨多糖作用后的L1210细胞,其细胞周期被阻遏于Go/G1期,24h-48h凋亡率迅速上升;Bad蛋白的表达水平于给药24h-72h后升高,抗凋亡基因Bcl-2表达下降。结论:软骨多糖可能通过影响肿瘤细胞周期和Bad、Bcl-2蛋白的表达来诱导L1210细胞凋亡,并显著抑制肿瘤细胞的生长,延长DBA/2小鼠的生存时间,是一种新型的抑癌活性物质。     

氟苯达唑对人急性髓系白血病HL-60细胞的增殖抑制作用研究

目的:研究氟苯达唑对人急性髓系白血病HL-60细胞增殖的抑制作用,明确氟苯达唑对HL-60细胞周期,凋亡发生的作用机制。方法:噻唑蓝法(MTT)检测氟苯达唑对人急性髓系白血病HL-60细胞的生长抑制作用,流式细胞术检测氟苯达唑对HL-60细胞周期,DNA片段化的影响,免疫印迹法检测Caspase, Raf, Bcl-2家族蛋白表达。结果:氟苯达唑抑制人急性髓系白血病HL-60细胞生长,HL-60细胞G2/M期增加,与阴性对照组相比,在一定的剂量和时间内,差别具有显著统计学意义;DNA片段化上升,0.25,0.5,1μM组与对照组相比差别具有显著统计学意义,促使Cleaved PARP,Cleaved-caspase 3,Cleaved-caspase 9蛋白表达量趋势增加;Bag-1和Bcl-2蛋白表达量降低;b-raf,c-raf磷酸化蛋白表达水平逐渐降低。结论:氟苯达唑通过诱导HL-60细胞阻滞于G2/M期,增加DNA片段化水平,激活Caspase, Raf, Bcl-2家族介导的凋亡相关通路抑制人急性髓系白血病HL-60细胞增殖,诱导人急性髓系白血病HL-60细胞发生凋亡而发挥抗肿瘤作用。     

小鼠骨髓内皮细胞条件培养液复合FL及TPO对HPP—CFC及CFU—GM增殖的影响

通过传代培养小鼠骨髓内皮细胞,收集无血清条件培养液（ECM）,并经超滤得到大于10kD的浓缩液,分别观察ECM和大于10kD的浓缩液复合flt3ligand(FL)及thrombopoietin(TPO)对体外培养HPP-CFC、CFU-GM的影响,结果表明：ECM或大于10kD的浓缩液对HPP-CFC、CFU-GM的生长均有支持作用;FL或/和TPO与ECM或大于10kD的浓缩液合用能加强对HPP-CFC、CFU-GM生长的刺激作用;FL加TPO与ECM或大于10kD的浓缩液合用对HPP-CFC、CFU-GM生长的刺激作用更加明显;选择FL和TPO特异性的引物,用RT-PCR技术未能检测到小鼠骨髓内皮细胞有FL和TPOmRNA的表达。     

内皮素－1对缺氧肺动脉平滑肌细胞的增殖作用

内皮素（ＥＴ）是至今所发现的最强的内源性血管收缩肽,近年来发现ＥＴ－１能促进血管平滑肌细胞增殖。本研究表明ＥＴ－１对缺氧培养的肺动脉平滑肌细胞（ＰＡＳＭＣ）有剂量依赖的增殖作用,缺氧可促进ＰＡＳＭＣ的ＤＮＡ合成且增加ＥＴ－１的丝裂原作用。ＥＴ－１的丝裂原作用主要由其Ａ型受体（ＥＴＲ＿Ａ）所介导,ＥＴＲ＿Ａ的特异拮抗剂ＢＱ１２３可显著抑制缺氧以及缺氧与ＥＴ－１协同所产生的增殖作用,而且发现ＥＴＲ＿Ａ在缺氧培养的ＰＡＳＭＣ中的表达显著高于常氧对照组ＰＡＳＭＣ。本研究表明ＥＴ－１参与了缺氧性肺动脉结构重组,而缺氧可增强ＰＡＳＭＣ对ＥＴ－１的增殖反应性。     

小鼠胎肝造血基质细胞系对CFU—GM生长的调控作用

利用本实验室建立的小鼠胎肝造血基质细胞系(MFLSC)研究了造血基质细胞对粒-巨噬系造血祖细胞(CFU-GM)生长的影响。实验结果表明,MFLSC对CFUGM集落的生成有双向调控作用,即既有刺激性作用,又有抑制性影响。这种调控有体液因子之中介,亦有细胞与细胞间近距离的效应。文中讨论了MFLSC双向调控CFUGM生长的意义及其机理。     

双氢青蒿素对人白血病细胞K562增殖及凋亡的影响

目的:研究双氢青蒿素对人白血病细胞增殖及凋亡的作用,探讨其对白血病的作用机制,为进一步研究提供依据。方法:体外培养K562细胞,用细胞计数法绘制生长曲线;流式细胞仪及荧光显微镜检测药物作用前后细胞凋亡作用;Western-blot测定药物作用前后线粒体、细胞浆细胞色素c的表达。结果:双氢青蒿素的浓度为1×10~(-4),1×10~(-5),1×10~(-6)l/L时,细胞生长受到显著抑制,并呈剂量依赖性;流式细胞仪检测出凋亡峰;Hoechst33342/PI双荧光染色可观察到明显的核浓缩、凝集等细胞凋亡表现;Western-blot检测1×10~(-5)mol/L药物处理细胞后线粒体细胞色素c表达水平下调1,细胞浆出现明显细胞色素c蛋白奈带。结论:双氢青蒿素能显著抑制人白血病细胞K562的生长,并诱导其凋亡,可能与线粒体途径有关。     

特异寡聚核苷酸对猪瘟病毒在细胞中增殖抑制作用的研究

本实验探讨了寡聚核苷酸对CSFV复制的影响以及作为抗CSFV新型药物的可行性。实验结果表明针对CSFV5'um端非编码区NS3蛋白丝氨酸蛋白酶功能区的寡聚核酸对CSFV复制均有显著的抑制作用,而针对CSFV3' 端非编码区寡聚核苷酸仅有轻微抑制作用,5'端寡聚核苷酸具有最佳抑制作用,同时发现相应序列中正义聚核苷酸的作用要优于反义寡聚核苷酸;脂质体介导转染能显著提高寡聚核苷酸对CSF复制的抑制作用。这些初步结果也提示,CSFV5'端和3'端非编码区对CSFV复制的重要性和作用有所不同。     

LPLUNC1基因对鼻咽癌细胞HNE1生长增殖的抑制作用研究

LPLUNC1在正常的鼻咽组织及人胚鼻咽组织中高表达,而在71%的鼻咽癌中表达下调或缺失,是与鼻咽癌的发生发展密切相关的新基因.通过研究LPLUNC1基因对鼻咽癌细胞系HNE1的影响,进一步确定其与鼻咽癌发生发展的关系.将LPLUNC1基因全长cDNA克隆入pcDNA3.1( )真核表达载体中,通过脂质体介导稳定转染入LPLUNC1低表达鼻咽癌细胞系HNE1中,通过RT-PCR及RNA印迹筛选LPLUNC1高表达的细胞株,并利用细胞生长曲线、MTT、BrdU掺入、流式细胞仪检测、软琼脂集落形成实验及裸鼠成瘤等实验,研究了LPLUNC1对鼻咽癌细胞系HNE1细胞生长、增殖的影响.结果发现,稳定转染LPLUNC1的HNE1细胞的生长速度明显减慢,在MTT与BrdU掺入实验发现LPLUNC1可明显地抑制鼻咽癌细胞的增殖,并且通过流式细胞仪检测也发现,LPLUNC1基因可明显延缓HNE1细胞的细胞周期进程,使G0/G1期细胞增多而S期细胞相对减少.进一步通过软琼脂集落形成及裸鼠成瘤实验发现,LPLUNC1稳定转染后的HNE1细胞集落形成率与集落的大小均小于空白载体细胞,同时能明显地抑制HNE1细胞的体外成瘤.结果表明,LPLUNC1基因能明显抑制鼻咽癌细胞HNE1的生长增殖,是鼻咽癌发生发展中的重要候选抑瘤基因之一.     

几种MK－CSA活性物质对小鼠CFU－MK体外形成的影响

几种ＭＫＣＳＡ活性物质对小鼠ＣＦＵＭＫ体外形成的影响黄成龙王亦流１柳晓兰邱丽玲张卿西毛秉智（军事医学科学院放射医学研究所,北京１００８５０;１海军总医院）自从１９７５年Ｍｅｔｃａｌｆ及１９７９年Ｖａｉｎｃｈｅｎｋｅｒ等人分别建立起小鼠和人类骨髓巨...     

重组p16腺病毒的构建及其对人白血病细胞的抑制作用

为了探讨腺病毒载体用于基因治疗的可行性及野生型 p1 6基因的抗肿瘤特性 ,构建了复制缺陷型重组 p1 6腺病毒 .首先将 p1 6全长 c DNA插入穿梭质粒 p Ad CMV产生重组质粒 p Ad-CMV- p1 6,然后通过脂质体介导与 p JM1 7共转染 2 93细胞 ,经同源重组产生 E1区缺失的重组腺病毒空斑 .用纯化后的腺病毒感染人白血病细胞株 HL- 60后 ,PCR及 Western blot分析显示在感染细胞中有外源性 p1 6 c DNA存在和 p1 6蛋白表达 ;被感染的 HL- 60细胞的生长受到明显抑制 ,而未感染细胞及对照腺病毒感染的细胞没有受到抑制 .结果表明 ,腺病毒作为一种新型基因转移载体 ,可有效地介导肿瘤抑制基因 p1 6的表达 ,在肿瘤基因治疗方面具有很大的应用前景 .     

Ad.RGD-ING4-PTEN对MEG01人白血病细胞的抑制作用

目的:构建RGD修饰的ING4和PTEN双基因共表达重组腺病毒载体(Ad.RGD-ING4-PTEN),研究其对人白血病细胞MEG01的抑制作用。方法:采用AdEasyTM腺病毒重组系统,在本科室已成功构建的pAdTrack-CMV-ING4-polyA-promoter、pAdTrack-CMV-polyA-promoter腺病毒转移质粒的基础上,在多克隆酶切位点的Not I、Xho I间插入PTEN片段,得到pAdTrack-CMVING4-polyA-promoter-PTEN重组转移载体,与RGD-4C修饰的腺病毒骨架质粒pAdEasy-1(RGD)同源重组后,经包装和扩增获得ING4和PTEN双基因共表达重组腺病毒Ad.RGD-ING4-PTEN。将Ad.RGD-ING4-PTEN体外感染人白血病细胞MEG01,检测腺病毒对MEG01细胞的感染效率,Western blot法检测外源基因ING4和PTEN在MEG01细胞中的表达,CCK8法检测外源基因的导入对MEG01细胞的生长抑制作用,流式细胞仪检测外源基因导入对MEG01细胞的凋亡和周期的影响。结果:鉴定结果显示,成功构建了Ad.RGD-ING4-PTEN双基因共表达腺病毒,其能有效地感染MEG01细胞。Western blot检测到ING4和PTEN在MEG01细胞中的表达;ING4和PTEN基因能明显抑制MEG01细胞的生长,诱导其凋亡并产生G2/M期阻滞作用,且双基因联合作用较单基因作用更明显。结论:成功构建了RGD-4C修饰的ING4和PTEN双基因共表达腺病毒载体Ad.RGD-ING4-PTEN。收获的腺病毒能有效感染人白血病MEG01细胞。Ad.RGD-ING4-PTEN具有抑制MEG01细胞的生长、诱导其凋亡及G2/M期阻滞的作用。