抗生素和干扰素

941049胶原水解物作为产黄青霉合成青霉紊的复合氮源〔英]/Leonhartsberger,5.…了J.Bioteeh-nol一1993,30(8)一299一313〔译自DBA-1993,12(22),93一12663〕 利用胶原水解物(Gelita一Bio一Tec)作为氮源测定了通过产黄青霉PS生产苯氧基甲基青霉素和生物量形成的最适条件。利用一计划的实验方案 (命名为Graeco一Latin平方技术)在振荡瓶培养物中进行。初步研究结果表明,达30%的普通复合氮源如棉籽粉能被胶原水解物替代,且青霉素产量未降低(0 .015/小时)。在中试规模试验中,利用30升振荡式发酵罐,相对空气饱和度50%、瓶压0.3巴及4个Interm…     

一种产黄青霉突变体库的简单快速构建方法

产黄青霉(Pennicillium chrysogenum)是重要的工业丝状真菌,为更好地提高青霉素产量,了解青霉素合成的调控途径及相关基因的功能,突变体库的构建是一种有效途径。本研究以PCR扩增得到的T-DNA片段为外源DNA,通过PEG介导转化至产黄青霉原生质体中,成功地将含有外源博来霉素抗性基因(ble)和绿色荧光蛋白基因(gfp)的T-DNA插入到产黄青霉基因组中,构建了产黄青霉突变体库,并实现了ble基因和gfp基因在产黄青霉中的表达。该方法不依赖于农杆菌介导,无需构建二元表达载体,只需一步PCR即可实现外源基因的制备,简单快速,也为研究其它真菌基因功能和突变体库构建提供参考。     

抗生素和干扰素

950112 由产黄,I『一生产青霉素的生物化学和分子遗传学[会,英2/Martin,J.F.I Ann.N.Y.Acad.s01.-1991,646.-132~201[译自DBA,1992,儿(13),92-07338_'] 将产黄青霉AS-P-78酰基辅酶A;6一氨基青霉烷酸一酰基转移酶纯化至均质并鉴定之。用含粗糙脉孢菌(Neurospora crassa)PY r4基因和产贝菏霉pyrG基因的质粒载体作选择标记,可获得产黄青霉的高频转化。克隆、表达并测序了产黄青霉AS-P-78的异青霉素-N-合酶基因,还克隆及测序了该菌的酰基辅酶A t 6一氨基青霉烷酸一酰基转移酶和ACV-合成酶基因。产黄青霉DNA的噬菌体EMBL3基因文库…     

医药上的应用

抗生素和干扰素952102产黄青霉高产菌株的线性筛选[俄]/Rusill0V,S.F.∥Prikl.Biokhim.Mikrobi01.一1994,30(6).一884～888[:译自DBA,1995,14(2),95—00780] 研究了利用一些特点线性筛选产黄青霉的几种简单方法的效能。筛选出一种新的青霉素高产菌株产黄青霉。该菌具有低的发酵液牯滞性和高的氨解活性,并能在机械能输入1.3kW/cum培养97hr的发酵罐中产生32600U,/m1苯氟基甲基青露素。培养液的高氨解活性和低牯滞性决定了可以用玉米粉进行发酵。 (陶冶)9521 05通过批式添加底物生物合成林可霉素[俄]/Sere e—nova,L.E.…∥Antibiot.Khi…     

磷酸甘油氧化酶的菌种选育及发酵条件

利用含甘油的斜面培养基连续传代、诱导筛选的方法,从大量链球菌中选育到一株产磷酸甘油氧化酶(L-α-Glycerophosphate Oxidase EC 1.1.3.21)活性较高的粪链球菌(Streptococcus faecalis) GPO 605。培养及产酶最佳条件表明,最适培养基组成(％):酪蛋白胨1,酵母提取物1.5,甘油0.2,葡萄糖0.1,K_2HPO_40.5,无机盐0.25ml,pH7.5。最适培养条件:250ml三角瓶中装100ml培养基,30℃,200r/min旋转摇床振荡培养8h。在最适培养及产酶条件下,每毫升发酵液的酶活力提高10倍以上。     

阿舒多囊霉和棉阿舒囊霉生产核黄素的比较研究

考查了用阿舒多囊霉(Eremotheci um ashbyii)和棉阿舒囊霉(Ashbya gossypii)经过酵把各种底物转化为核黄素。确定两种微生物的最适培养温度和培养基的最适初始pH分别为30℃和6.5。为考查不同底物及其初始浓度的影响,在试验中采用了葡萄糖、甘油、葵籽油、乳清和它们的各种组合。在以葡萄糖和葵籽油共同作为底物的培养基中获得了最大的生长速率和核黄素产量。     

雪腐格氏霉选择性培养基研究

以尿素作氮源,甘油作碳源,对雪腐格氏霉(Gerlachia nivalis)有较强的选择加富作用,Fe-Na-EDTA和生物素对其分生孢子萌发和菌落生长有促进作用,五氯硝基苯、敌克松、瑞毒霉是较好的选择抑制剂。据此,提出了雪腐格氏霉选择性培养基配方:KH_2PO_4 1.0g,MgSO_4·7H_2O 0.5g,Fe-Na-EDTA 0.01g,尿素0.5g,甘油2.0g,生物素0.005mg,五氯硝基苯20ppm,敌克松14PPm瑞毒霉5PPm,硫酸链霉素100单位/ml,氨苄青霉素50μg/ml,琼脂18g,蒸馏水1000ml。该培养基可促进雪腐格氏霉孢子萌发和菌落生长,可抑制多种常见土壤真菌生长。     

氯过氧化物酶发酵相关指标及其关联性分析

通过考察氯过氧化物酶(CPO)发酵相关参数的动力学特征,探究酶产量与参数之间的关联性。结果表明:CPO发酵过程中慢速C源麦芽糖比葡萄糖更有利于调控CPO的稳定合成,前者CPO最高比酶活(179.50 U/m L)比后者(135 U/m L)高出44.5 U/m L,而且产酶高峰期延迟1~2 d;发酵过程p H波动与C源消耗速率密切相关,且对CPO合成具有明显的指标性作用。通过生物量曲线及糖消耗曲线与产酶特征对比判断,菌株合成CPO为中期合成类型。副产物黑色素是菌体成熟时期的一种次生代谢物质,与酶的生物合成存在时间上的同步性。控制C源基质和p H对提高CPO稳定化生产具有一定成效。     

产黄青霉工业生产菌种基因报告系统的构建及启动子效率的评价

本研究以四种不同物种来源,不同代谢途径功能基因的启动子为材料,分别构建了以产黄青霉异青霉素N合成酶(IPNS)基因pcbC的启动子Pipns、构巢曲霉3-磷酸甘油醛脱氢酶基因gpdA的启动子PgpdA、构巢曲霉色氨酸合成基因trpC的启动子PtrpC、粗糙脉胞霉氨基酸合成交叉途径控制基因cpc的启动子Pcpc为启动子,腐草霉素(phleomycin)抗性基因为报告基因,构巢曲霉色氨酸合成基因trpC的终止子TtrpC为终止信号的丝状真菌转基因质粒,建立了产黄青霉工业生产菌种启动子筛选、评价体系,调查了这四种启动子的强弱。结果表明选择性标记基因受强启动子驱动可以提高产黄青霉工业生产菌种的转基因效率。研究也显示这四种启动子的强弱的顺序为PgpdA、Pcpc、Pipns和PtrpC。     

动物细胞培养及单克隆抗体

920533以柠檬酸铁替代转铁蛋白的无蛋白培养基培养鼠-鼠杂交瘤〔英〕/Eto,N一了Agric.Biol.Chem一1901,55(3)一563一865〔译自DBA,1991,10(12),91一07039〕 于37“C、通入湿润5%CO:/95%空气条件下,将鼠杂交瘤IA一4细胞保存在补加10产g/ml胰岛素(I)、35拜g/ml人转铁蛋白(T)、10拼M乙醇胺(E)和2.snM硒(S)(ITES)的DF培养基中。试验了各种低分子量含铁化合物对培养于ES一DF培养基中的IA一4细胞的生长刺激作用。柠檬酸铁的作用最大,与转铁蛋白相当。柠檬酸铁钱的作用也很大;硫酸亚铁和硫酸高铁的作用较小。硫酸铁钱几乎无作用,氯化…     

一种适合PCR反应的产黄青霉基因组简易提取方法

为同时高效地对大量产黄青霉(Penicillium chrysogenum)突变株进行分子鉴定,本实验探索了一种适合PCR反应的简易产黄青霉基因组提取方法。该方法首先将产黄青霉菌丝转移至0.7 mol/L Na Cl为等渗剂的蜗牛酶(6 mg/m L)和纤维素酶(4 000 U/m L)酶解液中,超声波处理10 min,然后于28℃酶解14 h,最后95℃加热处理10 min。结果表明,应用该方法获得的裂解液上清稀释后可直接作为PCR反应模板,且扩增条带清晰。该方法操作简便,用样量小,可在96孔板一个孔中完成DNA模版的制备过程,并且可同时并行多个样品,适于大规模产黄青霉基因工程突变株的检测,并为其它真菌基因组的提取提供了参考。     

根霉植酸酶的研究──Ⅰ.菌株的分离筛选及发酵条件研究

从21个土样和15株产酶菌株中筛选到1株产酶能力较强的菌株——根霉（Rhizopussp.）MR020。其优化培养基组成（％）：大米粉2.0,干酪素0．05,（NH4）2SO41.0,MgSO4·7H2O0.05,FeSO4·7H2O0.01,pH5.0。其振荡培养条件：培养基装最25ml／250ml三角瓶,用培养8天、浓度为1×107个／ml的孢子悬液接种1ml,于30℃,150r／min振荡培养108h产酶量最高达4000u/ml。     

医药上的应用

抗生素和干扰素931958在始旋链,菌中诱导产生原始.案〔英万Paquet,V.…/Bioteehnol.Lett一1992,14(11)。-1065~1070〔译自DBA,1903,12(i),。3-00090] 利用若干内酩检测了始旋链霉菌非生产突变株 (C16/4)和高产突几变株(Prn)中原始霉素 (PM)生产的调节作用。将Prn置于含复合培养基(pHe.s)的21发酵罐内,于27℃、450~1000rpm搅拌和41/min通气条件下培养。再于含合成培养基的201发酵罐内搅拌(5。。印m)培养Prll (pH6.s、27℃、通气51/min),以生产诱导因子。温育48小时后PM产生达最大。具长侧链的内醋(0 .25产g/ml诱导浓度)均对PM生产有…     

产黄青霉菌响应苯氧乙酸的Ca2+信号转导机制

【目的】研究青霉素V生产过程中—Ca~(2+)信号转导途径参与产黄青霉菌对外源侧链前体苯氧乙酸的应答机制。【方法】考察4种不同机制的Ca~(2+)信号干扰剂[利心平、乙二醇双(2-氨基乙基醚)四乙酸、苏拉明和硫酸新霉素]对青霉素V产量和产黄青霉菌生物量的影响。运用Fluo-3/AM荧光染料对细胞进行染色,通过荧光显微镜成像和酶标仪定量检测两种方法监测胞内Ca~(2+)浓度的变化。【结果】苯氧乙酸添加后胞内Ca~(2+)相对含量高于对照组49.86%,而1 mmol/L磷酸酯酶C底物抑制剂硫酸新霉素的添加使得胞内Ca~(2+)相对含量降低了53.31%,同时青霉素V产量降低78.71%,表明产黄青霉菌可通过肌醇1,4,5-三磷酸信号途径调节胞内Ca~(2+)浓度来响应苯氧乙酸的胁迫。【结论】首次探究了Ca~(2+)信号转导途径在产黄青霉菌对苯氧乙酸应答中的作用,为丝状真菌中Ins(1,4,5)P3-Ca~(2+)信号转导途径的研究提供理论依据。     

柱霉属一新种——蝙蝠蛾柱霉

从青海省化隆地区采集冬虫夏草新鲜标本,经分离培养获一纯种,并经鉴定是隶属暗色孢科Dematiaceae的柱霉属Scytalidium Pesante,其形态特征与近似种——黄棕柱霉Scytalidium fulvum进行了比较,由于分生孢子量度及生活习性与黄棕柱霉有着明显差别,故定为一新种,命名为蝙蝠蛾柱霉Scytalidium hepiali C.L.Li sp.nov.该新种在PDA培养基上生长迅速,25℃,培养10天菌落直径2.5cm。菌丝相互平排列成菌丝束。产孢细胞裂殖产孢,节孢子2型:(1)无色,透明,薄壁,圆柱形,桶形。(2)淡褐色,厚壁,椭圆形,桶形,亚球形。蝙蝠蛾柱霉在蛋白胨、葡萄糖液体培养基中进行深层培养,26℃,20天。发酵液用乙醇抽提,减压蒸馏,甲醇溶解,过滤,减压浓缩,蒸馏水溶解,冷冻干燥。从1升发酵液中获虫草菌素制品50～70mg。从拮抗试验表明虫草菌素能抑制枯草芽孢杆菌的生长。     

盾壳霉产生几丁质酶的条件研究

本实验采用摇瓶培养研究了盾壳霉(Coniothyrium minitans)产生几丁质酶的条件。改良的天然马铃薯葡萄糖培养基(mPDB)较合成培养基(SMCS)更适宜作为盾壳霉产生几丁质酶的基础培养基。添加9种不同碳源试验表明葡萄糖较适宜于盾壳霉产几丁质酶;氮源试验表明硝酸钾是产酶的较适宜氮源。盾壳霉形成几丁质酶的培养时间以15 d为佳,培养的适宜pH值为6.5。     

高山被孢霉产花生四烯酸发酵条件的研究

通过一株高山被孢霉M_(20)(Mortierella alpina)产花生四烯酸的摇瓶发酵研究,确定了其最佳发酵培养基组成及最适摇瓶发酵工艺条件。摇瓶实验确定的最佳培养基组成为(g/L):玉米粉水解液葡萄糖150,酵母粉15,KH_2PO_4 3.0,NaNO_3 3.0,MgSO_4·7H_2O 0.5。最佳发酵工艺条件为:初始pH6.5,装液量为50ml/500ml摇瓶,摇床转速150r/min,温度在菌体生长前三天控制在25℃培养,以后调至20℃培养。在此条件下,发酵培养被孢霉的生物量、菌体总油脂及花生四烯酸分别高达35.5g/L、13.2g/L及2.2g/L,在15L及1000L自动机械搅拌罐进行发酵试验,AA产量分别高达1.86g/L及1.70g/L。     

氨基苄青霉素酰化酶产生菌AS1.586产酶条件的研究

选出了一栋产氨基苄青霉素酰化酶的北京棒状杆菌(Corynebacteria pekinense) AS1.586,并对其产酶条件进行了研究。结果表明,最适培养基成份为(％)：L-谷氨酸钠0．2,酵母膏0.2,磷酸氢二钾0.3,氯化镁0.1,硫酸亚铁0.01,葡萄糖2,硫酸镉0.1,牛肉蛋白胨0.7,起始pH7.0,通气量在250ml 三角瓶中装30ml发酵培养基为最适,于28℃,180转／分的旋转摇床上振荡培养24小时,在此条件下最终酶活力可达5．4u／ml。     

产黄青霉谷胱甘肽S-转移酶基因PcgstA的克隆与鉴定

从青霉素工业生产菌产黄青霉(Penicilliumchrysogenum)中首次克隆了一个谷胱甘肽S-转移酶(GST)基因,定名为PcgstA.该基因的开放阅读框长840bp,含有两个内含子,编码一个238氨基酸残基的蛋白质.其推断的氨基酸序列与一些已经鉴定的丝状真菌GST具有50%左右的序列一致性.PcgstA的完整编码区经RT-PCR扩增、验证,插入原核表达载体pET11a,转化大肠杆菌BL21(DE3)-RP菌株,表达得到重组PcGSTA蛋白.酶活测定证实,重组PcGSTA具有GST活性,其对底物CDNB(1-chloro-2,4-dinitrobenzene)的比活为(0.159±0.031)μmol/(min·mg).利用TaqMan探针法,对PcgstA的表达情况进行了比较.结果表明,在添加了侧链前体苯乙酸的青霉素生产培养基中,PcgstA的表达水平和在不含苯乙酸培养基中的表达相比明显下调,显示了该基因与苯乙酸代谢的关系.     

林生地霉培养基形态学观察及生理学实验

目的观察林生地霉在5种不同培养基中的形态;通过一些常规的生理学实验,初步了解林生地霉的生理学特征。方法将林生地霉分别接种在沙堡培养基(SDA)、马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)、麦芽汁琼脂(MEA)、玉米粉琼脂(CMA)和察氏琼脂(CZA)平皿培养基上,置37℃和27℃温箱培养2周,每天观察菌落生长情况。通过芽管试验、厚壁孢子试验、硝酸盐同化试验、放线菌酮耐受试验、尿素酶试验、糖发酵试验及API20C酵母系统等初步了解林生地霉的生理学特性。结果菌落在PDA、SDA和MEA培养基上生长较快、较好,在其他培养基上生长较差。芽管试验、硝酸盐同化试验、糖发酵试验均阴性;厚壁孢子试验、放线菌酮耐受试验阳性;尿素酶试验弱阳性;API20C酵母系统鉴定中葡萄糖、甘油、木糖、山梨醇为阳性,余为阴性。结论PDA、SDA和MEA较适合林生地霉生长;尿素酶试验可作为地霉属属内鉴定的参考依据。API20C鉴定结果及厚壁孢子试验可为其与毛孢子菌属的属间鉴别提供依据。