DNA疫苗的研究进展与前景

ＤＮＡ疫苗能够诱发体液和细胞介导的免疫应答。ＤＮＡ疫苗的出现或许是疫苗发展史上的一次革命。本文对ＤＮＡ疫苗的由来、优越性和安全性进行了较为详细的介绍。虽然ＤＮＡ疫苗的免疫机制有待探讨,然而ＤＮＡ疫苗的应用前景看好     

基因免疫研究进展

基因免疫的研究已成为免疫治疗研究的热点之一。其产生的机制目前认为主要是注射的ＤＮＡ直接转专职递呈细胞,它可激活ＣＤ４Ｔ细胞、Ｂ细胞和ＣＤ８Ｔ细胞。但也有证据表明ＤＮＡ转染的肌细胞或角质细胞生产抗原后,转送给浸润在附近递呈细胞,激活相应的细胞。ＤＮＡ免疫刺激序列的发现,使人们在基因免疫时应用或设计特殊ＤＮＡ的结构成为可能。细胞因子和共刺激分子是基因免疫中最有前任的生物佐剂。     

应用反义技术研究DNA聚合酶ε在HeLa细胞DNA复制中的功能

我们应用以义技术,结合Ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ导入和ＧＰＴ筛选方法,研究了ＤＮＡ聚合酶ε在ＨｅＬａ细胞ＤＮＡ复制过程中的功能,针对ＤＮＡ聚合酶ε和α的反义寡核苷酸都能够专一地抑制ＨｅＬａ细胞的ＤＮＡ合成。首镒直接证明了ＤＮＡ聚合酶ε在哺乳动物细胞的ＤＮＡ复制过程中具有重要作用。．     

DNA免疫

用编码抗原蛋白的质粒ＤＮＡ进行免疫可诱导抗体免疫应答和细胞倡导的免疫应答。人们称之为ＤＮＡ免疫。这种方法可使宿主细胞直接产生想要的蛋白抗原,并且抗原具有适宜的三维结构。该方法已使多种动物模型产生了有效的保护性免疫力。ＤＮＡ免疫有可能保护人类抵抗疾病,同时避免目前采用疫苗技术的缺点。     

生物芯片技术及其应用

生物芯片是指包被在固相载体上的高密度ＤＮＡ、抗原、抗体、细胞或组织的微点阵,它是微电子学和分子生物学结合产生的新技术。该技术被评为１９９８年度世界十大科技进展之一。本文讨论了生物芯片技术的发展、技术参数、相关仪器的发展和在ＤＮＡ序列测定、基因表达分析、基因分型、基因多态性分析、疾病的诊断、突变分析、药物筛选和微生物的鉴定等方面的应用。     

枸杞体细胞胚发生中DNA代谢动态的立体计量

本文以宁夏枸杞无菌苗叶片为材料,离体培养,并诱导体细胞胚胎发生。根据细胞形态计量学原理,应用数学图像处理软件计量由光学底片经Ａ／Ｄ转换成的数学图像中的ＤＮＡ大分子,对枸杞体细胞胚发生过程中ＤＮＡ分子的代谢动态进行量化分析。结果表明：在整个体细胞胚发和过程中ＤＮＡ代谢呈现动态变化。非胚性细胞与胚性细胞期的量化值分别为１．８２％和１．９１％;在二细胞胚、四细胞胚、多细胞胚时期ＤＮＡ缓慢增长,随着胚性愈     

前列腺素F2α对大鼠肾小球系膜细胞DNA合成的影响

本实验应用（＾３Ｈ）胸腺嘧啶核苷（＾３Ｈ－ＴｄＲ）掺入法测定前列腺素Ｆ２α（ＰＧＦ２α）对大鼠肾小球系膜细胞ＤＮＡ合成的作用,测定系膜细胞合成的二脂酰甘油（ＤＡＧ）及磷酸肌醇（ＩＰ）。结果表明,ＰＧＦ２α促进系膜细胞的ＤＮＡ合成、ＤＡＧ及ＩＰ的生成。提示ＰＧＦ２α使系膜细胞的磷脂酶Ｃ活化,产生ＩＰ及ＤＡＧ,激活蛋白激酶Ｃ,从而促进ＤＮＡ合成及细胞增殖。     

双歧杆菌总DNA对小鼠IL—2,NK活性影响的研究

目的 从双歧杆菌、大肠杆菌提取ＤＮＡ,用ＤＮＡ免疫小鼠,观察免疫功能的变化,探讨双歧杆菌ＤＮＡ对小鼠免疫功能的影响,并作对比研究。方法 肌肉注射提取的双歧杆菌ＤＮＡ、大肠杆菌ＤＮＡ,颈椎处死后,检测脾细胞的免疫功能,同时提取ＩＥＬ细胞与ＤＮＡ共孵育,检测它对ＩＥＬ细胞的激活情况及细胞因子产生情况,以自然杀伤细胞（ＮＫ）活性,白细胞介素２（ＩＬ－２）产生能力为指标,测定小鼠上述各项指标变化。结果 双歧杆菌ＤＮＡ、大肠杆菌ＤＮＡ肌肉注射后,小鼠以上两项指标与相应对照组相比较均明显提高（Ｐ〈０．０５）。双歧杆菌ＤＮＡ提高小鼠ＮＫ活性与ＩＬ－２水平程度大于大肠杆菌ＤＮＡ的作用（Ｐ〈０．０１）。结论 双歧杆菌ＤＮＡ可快速激活ＮＫ活性,提高体内ＩＬ－２水平。其效能优于大肠杆菌ＤＮＡ。     

CpG特征结构与树突状细胞

近年来的研究表明 :ＣｐＧ特征结构是脊椎动物免疫系统识别微生物ＤＮＡ并产生针对抗原的保护性免疫反应的主要机制 ,它在体内及体外均能诱导以Ｔｈ1细胞为主的高水平、高特异性的细胞免疫应答 ;是质粒ＤＮＡ疫苗及裸ＤＮＡ疫苗诱导机体免疫应答的原因之一 ,在临床实验中ＣｐＧ ＯＤＮ已被用作抗原疫苗、ＤＮＡ疫苗治疗肿瘤、变态反应性疾病的强有力佐剂。ＣｐＧ特征结构能够诱导机体产生以Ｔｈ1细胞为主的细胞免疫应答是因为它能够作用于Ｔ细胞、Ｂ细胞、ＮＫ细胞、巨噬细胞及树突状细胞等免疫细胞。树突状细胞是机体最主要的专职抗原呈递…     

SA脂质体介导DNA转染细胞的进一步研究

ＳＡ脂质体可高效介导ＤＮＡ转染ＣＶ－１细胞,本文进步研究表明,ＳＡ脂质体还可介导ＤＮＡ高效瞬时和稳定地转染ＣＨＯ和ＣＯＳ细胞。ＳＡ脂质体和ＤＮＡ形成复合物可保护ＤＡＮ不被核酸内切酶和ＤＮａｓｅＩ降解。荧光标记和细胞松驰素Ｂ抑制实验分别表明,ＳＡ脂质体易被细胞吸附,主要通过内吞传送ＤＮＡ进入细胞,而Ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ主要通过融合传送ＤＮＡ进细胞。     

电离辐射诱导的DNA双链断裂

利用γ射线和不同ＬＥＴ的碳离子幅照小鼠Ｂ１６黑色素瘤细胞、Ｈｅｌａ细胞、Ｖ７９中国仓鼠肺细胞和人肝癌ＳＭＭＣ－７７２１细胞的ＤＮＡ,采用脉冲场凝电泳结合荧光扫描技术研究了ＤＮＡ双链断裂（ＤＳＢ）片段的分布。结果发现ＤＳＢ片段是非随机分布的,而且这种分布与ＤＮＡ序列有关。原因可能在于沉积的能量直接或间接沿ＤＮＡ链迁移,链上相对较弱的化学键优先产生反应,并最终导致链的断裂,从而引起断裂的不均匀分布。     

地噻咪松诱导乳鼠胸腺细胞凋亡的研究

本文用透射电镜的方法,研究了地噻咪松诱导乳鼠胸腺细胞的凋亡,并确立了乳腺胸腺细胞中凋亡细胞学形态的特征;含溴化乙锭的琼脂多糖电泳检测乳鼠胸腺细胞中凋亡细胞的断裂ＤＮＡ;末端标记法直接,持异的标记乳鼠胸腺细胞中凋亡细胞断裂ＤＮＡ。     

天然抗氧化剂丹参酮Ⅱ—A对肝细胞脂质过氧化产物与DNA相互作用的影响

［＾３Ｈ］花生四烯酸标记的肝细胞,经ＦｅＣｌ２－ＤＴＰＡ启动脂质过氧化后,细胞ＤＮＡ出现放射性,并随保温时间增加而逐渐增高,表明在细胞内脂质过氧化产物与ＤＮＡ发生相互作用,生成了一种ＤＮＡ加成物,经测定它具有特征荧光光谱,显示较低的增色效应和Ｔｍ值。用高度敏度荧光图象显微镜直接观察发现丹参酮Ⅱ－Ａ经细胞摄取后主要滞留在细胞膜与胞浆中。它能有效地抑制细胞脂质过氧化,减少脂质－ＤＮＡ加成物的产生,并阻     

无核的细胞会凋亡吗？

无核的细胞会凋亡吗？潘华珍（中国医学科学院基础医学研究所,北京１００００５）关键词凋亡细胞凋亡有几个特征：染色质密集、核膜皱缩、细胞体积缩小、ＤＮＡ酶活化而出现ＤＮＡ降解、产生梯形特征的电泳条带。在细胞凋亡中需要有蛋白质的合成。这些特征都表明,细胞核...     

天然抗氧化剂丹参酮Ⅱ—A对肝细胞脂质过氧化产物与DNA相互作用的影响

［３Ｈ］花生四烯酸标记的肝细胞,经ＦｅＣｌ２－ＤＴＰＡ启动脂质过氧化后,细胞ＤＮＡ出现放射性,并随保温时间增加而逐渐增高,表明在细胞内脂质过氧化产物与ＤＮＡ发生相互作用,生成了一种ＤＮＡ加成物,经测定它具有特征荧光光谱,显示较低的增色效应和Ｔｍ值。用高度敏度荧光图象显微镜直接观察发现丹参酮Ⅱ－Ａ经细胞摄取后主要滞留在细胞膜与胞浆中。它能有效地抑制细胞脂质过氧化,减少脂质－ＤＮＡ加成物的产生,并阻止了细胞存活率和Ｏ６甲基鸟嘌呤转移酶活性的降低,其抑制率与ＶｉｔＥ,ＢＨＴ相近,但显著高于ＮａＮ３,甘露醇和ＳＯＤ。上述结果提示丹参酮Ⅱ－Ａ是一种新的有效的细胞内脂质过氧化产物与ＤＮＡ相互作用的抑制剂。它对ＤＮＡ的保护作用可能是通过清除脂类自由基而阻断脂质过氧化的链式反应,抑制ＤＮＡ加成物的生成,从而减少了细胞毒性。     

AT细胞DNA双链断裂重接修复效率及其忠实性

用脉冲电场凝胶电泳和双标记基因质粒ＤＮＡ转染技术研究辐射敏感的毛细血管扩张性共济失调症患者皮肤成纤维细胞（ＡＴ５ＢＩＶＡ）和正常辐射抗性的人宫颈癌细胞（ＨｅＬａＳ３）ＤＮＡ双链断裂重接修复率及其忠实性。结果表明γ射线照射诱发ＤＮＡ双链断裂的产额和重接修复率,在两株细胞间无差别．而ＡＴ细胞对导入的限制性内切酶ＥｃｏＲＶ产生双链断裂质粒ＤＮＡ的重接修复忠实性显著低于ＨｅｌａＳ３ｔｅ胞,表明ＡＴ细胞易发生ＤＮＡ错误修复,这很可能就是ＡＴ细胞高度辐射敏感性的主要原因。     

用荧光影像系统研究莲子叶细胞中核酸和蛋白质的含量

用酶解法解离受精后５ ｄ 和２０ ｄ 的红莲（ Ｎｅｌｕｍｂｏ ｓｐ．） 子叶细胞,应用冷却型科学级电荷偶联装置（ＣＣＤ） 摄像式显微荧光影像系统对单个５ ｄ 细胞和２０ ｄ 细胞的ＤＮＡ、ＲＮＡ和总蛋白相对含量进行了相关测量。实验结果表明：２０ ｄ 细胞ＤＮＡ成为多倍化,为４Ｃ～８Ｃ水平。视窗分析表明：同一４ＣＤＮＡ 视窗中,２０ ｄ 细胞比５ ｄ 细胞的ＲＮＡ和总蛋白含量增加１１ 倍以上。２０ ｄ 细胞的两个ＤＮＡ视窗（４Ｃ和８Ｃ） 中,随着ＤＮＡ倍性的增高,ＲＮＡ 和总蛋白含量也以大致上相应的倍数增高。这些数据表明：红莲子叶贮存蛋白的大量积累既与ＤＮＡ 倍性有关,又与发育过程中贮存蛋白亚基基因选择性的表达有关     

药物诱导的玉米根尖细胞凋亡

同时应用ＤＮＡ Ｌａｄｄｅｒｉｎｇ、ＤＮＡ Ｇｅｌ Ｂｌｏｔ以及基于染色体涂片 原位末端标记技术,从染色体、细胞核和ＤＮＡ不同水平对细胞毒素类药和的放线菌Ｄ、放线菌酮和秋水仙碱诱导的玉米（Ｚｅａ ｍａｙｓ Ｌ．）根尖分生组织细胞死亡作了检测。结果表明：同动物中一样,这些药物诱导的玉米根尖分生组织细胞死亡也具有ＤＮＡ Ｌａｄｄｅｒ、染色质和细胞核浓缩等典型的调亡特征,说明这些细胞毒素类药物能够诱导植     

牵牛属生殖细胞和精细胞中细胞器DNA的研究

用ＤＡＰＩ荧光技术观察了大花牵牛（ Ｐｈａｒｂｉｔｉｓ ｌｉｍ ｂａｔａ Ｌｉｎｄｌ．）和圆叶牵牛（Ｐ． ｐｕｒｐｕｒｅａ（Ｌ．） Ｖｏｉｇｈｔ）生殖细胞的细胞质ＤＮＡ及其在精细胞形成过程中的动态。牵牛属这两个种的生殖细胞均为细长形,具有大量细胞器ＤＮＡ。刚形成的一对精细胞大多数一端钝,另一端呈尾状。较后期的精细胞多呈凸透镜状。生殖细胞分裂形成的一对精细胞多是同型的,也有的表现为异型。精细胞的核多偏于细胞的一端。在细胞质中有大量细胞器ＤＮＡ分布。精细胞中的细胞器ＤＮＡ 荧光点在大小及荧光强度上有所不同,可能代表线粒体和质体这两种不同的细胞器ＤＮＡ。大花牵牛与圆叶牵牛之间,无论是生殖细胞或精细胞在细胞形状和细胞质ＤＮＡ 分布状况上基本相似。一个明显的差异是,后者的细胞质ＤＮＡ 荧光点体积较小和荧光弱。研究表明,精细胞存在具有ＤＮＡ 的细胞器,为牵牛花细胞质具有双亲遗传或父系遗传的潜能提供了细胞学证据。本文还对研究的两个种的精细胞存在同型和异型的现象,以及精细胞在核质比率上的特点与质体双亲遗传的关系进行了讨论     

r射线诱发大鼠胚胎细胞转化与N—ras的激活

以ｒ射线诱发转化的大鼠胚胎细胞（ＲＥＣ：ｃｙｃ：ｒ３３）的ＤＮＡ构建粘粒基因库,用总基因库ＤＮＡ转染ＮＩＨ／３Ｔ３细胞,产生转化灶的ＤＮＡ作二轮转染,二轮转化的ＮＩＨ３／Ｔ３细胞内有大鼠ＲＥＣ：ｍｙｃ：ｒ３３ＤＮＡ中具转化活性的Ｎ－ｒａｓ基因,用不对称ＰＣＲ和ＤＮＡ序列分析法证明,ＲＥＣ：ｍｙｃ：ｒ３３细胞中鼠Ｎ－ｒａｓ的活化是由于第６１位密码子的Ａ→Ｇ点空为。ＮＩＨ／３Ｔ３转化灶中鼠Ｎ－ｒａｓ也