丹参DNA提取方法比较

为从富含多糖、酚类物质的丹参幼叶中提取高质量的核总DNA,比较了4种DNA提取方法对丹参叶片的提取效果,结果表明改良CTAB法提取的DNA溶液颜色为无色透明、A260/A230为2.137、A260/A280为1.816值最好,是提取丹参基因组DNA的有效方法.     

一种改良的转基因甘蔗基因组DNA提取方法

用改良的转基因甘蔗基因组DNA提取方法可从少量的转基因甘蔗叶片中简便快速地提取高质量的DNA,有效地去除甘蔗叶片中的多糖、多酚类和RNA等物质。经核酸蛋白测定仪及凝胶电泳分析表明,该改良方法提取的DNA具有典型的DNA分子标准紫外吸收光谱特点,其A260/A280为1．7-1．9,A260/A230为1．8-2．0,叶片的DNA产量为45-60μg(100mg)^-1,适用于对转基因甘蔗进行PCR、酶切和Southern杂交检测分析。     

华中五味子干燥材料DNA提取方法的研究

目的：建立一套适合从华中五味子硅胶干燥的幼芽中提取高质量DNA的方法,为进一步开展分子生物学研究奠定基础。方法：比较SDS法、SIX-CTAB法、SDS-CTAB法以及经过作者改进的CTAB法,运用紫外光谱和电泳分析方法测定所得DNA样品的纯度与完整性。结果：四种方法中改进CTAB法所得DNA纯度最高,完整性好,其A260/A280值为1．81,A260/A230值为2．13,经稳定性试验证明该方法稳定。结论：改进CTAB法是一套适合从华中五味子硅胶干燥的幼芽中提取高质量DNA的方法。     

香蕉枯萎菌基因组DNA提取方法的研究

以香蕉枯萎菌菌株为试验材料,在SDS～CTAB法和高盐沉淀法等基础上加以改进,对两种提纯香蕉枯萎菌基因组DNA的方法进行了比较研究。结果表明：高盐沉淀法是适合于香蕉枯萎菌基因组DNA提取的方法。该方法提取的DNA OD260／OD280的比值为1．841,DNA产量为0．81mgDNA／g菌丝体。基因组DNA经琼脂糖凝胶电泳得到一条带型较宽且清晰的DNA谱带,基本无DNA碎带;将提取的DNA直接用于PCR扩增,得到带多而且清晰、整齐、基本无拖尾的RAPD图谱。     

一种适于微生物多样性分析的青贮饲料总DNA的提取方法

目的:提出一种适于微生物多样性分析的青贮饲料中微生物总DNA的提取方法,并评价其效果.方法:间接法抽提样本的总DNA,通过琼脂糖电泳、紫外吸收及PCR分析DNA质量,DGGE评价提取效果,用PCR扩增目的菌株的特定片段来检测提取方法的灵敏度.结果:两个样本DNA的A260/A280值分别为1.99和1.93,A260/,A230值分别为2.19和1.90,提取的DNA不需纯化便可直接用于16S rRNA基因的扩增,提取方法灵敏度为3cfu/g,DGGE结果表明提取方法可以涵盖样品中的所有微生物.结论:提取的DNA纯度较高,可直接用于下游分子操作,提取方法灵敏度较高,能全面反映样品中的微生物原貌,可用于免培养法研究青贮饲料中的微生物菌群组成.     

用于微生物多样性分析的棉田土壤总DNA的提取

目的：探讨适用于微生物多样性研究的棉田土壤微生物总DNA提取方法。方法：采用4种方法提取不同连作和轮作处理的棉田土壤微生物总DNA,比较其纯度、产率、片段大小,并应用ARDRA技术验证其质量。结果：其中3种方法均可获得23kb的DNA片段,但不同方法提取的DNA的产率和纯度上有明显差异。改良CTAB-SDS法提取的DNA完整性好,得率为24.20μg.g-1干土,纯化后A260/A280和A260/A230为分别为1.80和1.70,纯化回收率可达70.1%,完全适用于后续的PCR分析。结论：采用该法提取棉田土壤总DNA简便而高效。对该法提取获得的棉田土壤微生物总DNA进行ARDRA和DGGE分析,所得图谱能较全面地反映不同处理间微生物多样性及群落结构的差别,为不同栽培体系下棉田土壤微生物的分子生态学研究提供了基础。     

重楼属植物DNA提取的方法研究

为了获得重楼属植物高质量的DNA,以研磨、冻融和细胞溶胀破膜的原理设计了一种DNA提取的方法并与CTAB法和高盐法比较。结果显示该方法提取的重楼属植物DNA纯度（A260/A280=1.792-1.852;A260/A230=2.052-2.267）,产率（6.12-12.84mg/g）较其他两种方法高,降解少,节省药品。所提出的DNA能用于RAPD分析和ITS测序。     

一种基于PCR分析多样性的小鼠肠道微生物宏基因组提取方法

目的建立一种基于PCR分析分子多样性的小鼠肠道菌群宏基因组提取方法。方法比较、综合国内外小鼠肠道菌群宏基因组的提取方法后建立一种新方法,小鼠肠道内容物经丙酮洗涤,差速离心,溶菌酶、SDS裂解,CTAB处理,酚／氯仿抽提后可得到高质量的DNA,通过紫外分光光度计、琼脂糖凝胶电泳、细菌通用引物PCR和扩增核糖体限制性酶切片段分析（ARDRA）等检测该方法的实用性。结果该方法获得的小鼠肠道菌群宏基因组DNA大小在23kb左右,A260／A280在1．8—2．0,经细菌通用引物PCR后能得到适用于ARDRA的目的产物。结论该方法经济适用性较强,具备一定的应用价值。     

旱生植物梭梭幼苗cDNA的合成

利用RNeasy Plant Mini Kit提取梭梭幼苗的总RNA,所得总RNA样品的浓度为654ug/mL.其A260／A280值在1．8－2．1之间,样品纯度高;把mRNA反转录成cDNA,该样品可被各种限制内切酶解,适合于DNA标签法,作图克隆法,克除交法、DDRT－PCR、RDA和SSH等各种下游应用。     

番茄灰霉病生防融合子基因组DNA提取方法的研究

以番茄灰霉病生防菌株木霉T-23和链霉菌A的融合子为实验材料,在SDS-CrAB法、改进CTAB法和氯化苄法的基础上加以改进,比较和研究了真菌融合子基因组DNA的提取,找到了一种快速、高效的基因组DNA提取方法,为进一步对融合子进行生防机制和分子生物学水平的研究提供基础。结果表明SDS-CTAB法提取的基因组DNA OD_(260)/OD_(280)为1．909,DNA浓度约为42．0ng/μL,可以满足分子生物学实验的需要。并将提取的基因组DNA直接用于PCR扩增,得到了多态性的RAPD图谱。     

刚毛柽柳基因组DNA提取和RAPD反应条件探索

沙漠植物由于含有多糖、多酚、单宁等次生物质,要提取出质量高、纯度好的DNA比较困难。本研究以刚毛柽柳（Tamarix hispida）为材料,用高盐低pH法成功地提取出了基因组DNA,所得到的DNA片段均大于23kb ,DNA得率为225μg/g干重,A260／A280的比值在1．7－1．9之间,说明高盐低pH法对于含多糖、酚类、单要等化学物质较多的沙漠是行之有效的,研究了RAPD（随机扩增DNA多态性）技术的影响因素,摸索出适合刚毛柽柳的反应体系与扩增条件,可用于刚毛柽柳居群内、居群间遗传多样性及柽柳科其它属种分子生物学的研究。     

一种适用于RAPD分析的微量山茶DNA提取方法的建立

为建立一种满足RAPD-PCR分析的简便且高产率微量山茶基因组DNA提取方法,探索了在无液氮条件下,采用简化试验步骤的改良CTAB、SDS和Triton X-100方法分别提取山茶新鲜和干燥叶片DNA,通过光谱扫描和测定DNA在波长230 nm,260 nm和280 nm时的吸光度,比较不同DNA提取方法、材料保存方法以及材料用量对DNA提取效率的影响。结果表明,干燥叶片比新鲜叶片更适合作为DNA提取材料,改良CTAB法在提取干燥山茶DNA时纯度和产率较理想,其A260/A280值为1.595-1.736,每克叶片可得到230-295μg DNA,高质量DNA经RAPD-PCR扩增可获得清晰扩增条带。100 mg干燥山茶叶片适合获得高纯度和高产率的DNA,增加材料用量可增大DNA总量,但也增加了DNA中杂质含量。     

煮沸裂解法和试剂盒法提取浸矿菌基因组DNA的比较

目的：在生物浸出中,微生物群落结构分析有着重要意义,而群落分析的基础是提取纯度高、损失少的基因组DNA。为了解决这一问题,本实验通过比较两种较常用的DNA提取方法,煮沸裂解法和试剂盒法,寻找一种灵敏、快速、经济实用的制备浸矿细菌基因组DNA的方法。方法：分别用煮沸裂解法和试剂盒法提取6种浸矿菌的基因组DNA,从所提取的基因组DNA浓度、纯度、回收率和对PCR扩增反应的影响方面比较了两种方法的提取效果;用两种方法来处理不同浓度梯度的一种菌,通过实时定量PCR来比较两种方法的灵敏性。结果：相同处理量（108个）的革兰氏阳性菌（1株）、革兰氏阴性菌（4株）、古菌（1株）经两种方法提取的基因组DNA差异较大,煮沸裂解法所得的6组基因组DNA更纯,其OD260／OD280的值更接近1．8-2．0（纯DNA的OD260／OD280在1．8—2．0之间）,前者所提DNA回收率最大可达后者的16．7倍;煮沸裂解法只需较少菌（102个）便能让实时定量PCR检测到所提DNA模板浓度,比试剂盒法灵敏。结论：两种方法提取的基因组DNA均可用于后续的PCR扩增,此外,前者提取的DNA浓度随细菌浓度增加而呈线性增大,而后者随茵浓度增大,所提DNA量增加有限,因此,在生物浸出中微生物基因组DNA的提取可直接采用简单快速的煮沸提取法,为实验节约成本和时间。     

一种从鱼类肌肉组织中提取基因组DNA的简易方法

以泰山螭霖鱼、黄河鲤鱼、东平湖鲫鱼为材料,采用改进的酚-氯仿抽提法和蛋白酶K消化法提取基因组DNA,并对其进行紫外分光光度、琼脂糖凝胶电泳、聚丙烯酰胺凝胶电泳、微卫星PCR扩增等方法的鉴定。结果表明,本方法提取的鱼类基因组DNA浓度为0．9-3．25μg／μL,D260nm/D280nm值为1．79-1．87,电泳条带整齐明亮,适合微卫星PCR扩增。因此,本方法能够从鱼类肌肉组织中获得较为纯净的基因组DNA,适于进一步的分子生物学研究之用。     

牛肉干中牛基因组DNA提取方法的比较研究

为得到一种快速、稳定、准确、优质的牛肉干DNA的提取方法,本研究比较了SDS法、改良CTAB法、酚-氯仿抽提法以及4种试剂盒提取法的提取效果。通过比较DNA的提取质量、提取效率,并对提取的DNA进行PCR扩增分析。DNA提取结果表明,7种提取方法均能从牛肉干中提取出DNA,其中采用SDS法、酚-氯仿法、试剂盒1法和试剂盒4法所提取的DNA质量较高,A260/A280比值在1.7~1.9之间。试剂盒3法提取所花的时间最少,DNA得率最高,但DNA的纯度最低。PCR扩增结果表明,7种方法所提取的DNA均能满足后续PCR扩增实验的要求。实验室可根据具体的实际情况选择使用DNA提取方法。     

花生DNA提取方法比较

目的:旨在筛选优化花生DNA提取方法。方法:采用SDS法、改进SDS法;CTAB法、改进CTAB法四种方法对花生叶DNA进行提取,并从电泳结果、纯度、得率、等方面对其进行比较研究,从而确定花生DNA提取适用流程;结果:CTAB法DNA平均得率为55.0μg/g.Fw,略小于SDS的60.3,但其A260/A280平均值为1.81,比SDS的1.55更接近标准要求。结论:综合考虑CTAB法是提取花生DNA的最佳方法,可提取到较高质量的DNA,符合分子检测要求;虽然改良CTAB法也相对好于SDS法,但由于步骤增加反而加剧DNA降解。     

重金属污染土壤总DNA提取方法的研究——土壤预处理和硫酸铵铝在DNA提取中的应用

【目的】从土壤中获得高纯度、高得率和完整性好的总DNA,为重金属污染土壤微生物群落多样性的分析奠定基础。【方法】将一定浓度的硫酸铵铝增补入DNA提取液中,分别联合不同方式的土壤预处理,对所提取的土壤总DNA进行完整性、纯度和得率分析。【结果】TENP-AlNH4(SO4)2法、ABG-AlNH4(SO4)2法、Wash-AlNH4(SO4)2法和试剂盒4种提取方法获得的DNA片段均在23 kb左右,总DNA完整;Wash-AlNH4(SO4)2法提取的DNA纯度较高,A260/A230达到2.00,A260/A280达到1.62;ABG-AlNH4(SO4)2法的DNA得率最高,达到1 010μg/g土壤;这两种方法提取的DNA在纯度和浓度上均达到后续PCR等分子实验要求。通过扩增提取的土壤总DNA中16S rRNA基因,表明合适浓度的硫酸铵铝能有效去除土壤中的PCR干扰因子。【结论】本研究将土壤的预处理和一定浓度的硫酸铵铝联合使用,获得理想的重金属污染土壤的总DNA。     

丹参分析样品中丹参酮的超声波辅助提取

为了提取丹参分析样品中隐丹参酮、丹参酮Ⅰ及丹参酮ⅡA等有效成分,建立了以CH3OH-CH2Cl2为提取溶剂的超声波辅助提取法。优化的提取条件是,液／固比：133．3mL／g,提取溶剂组成：φ（CH2Cl2）=0．2,提取时间：8min。与几种常规提取法（如甲醇回流法、CH3OH—CH2Cl2室温浸取法）相比较,超声波辅助提取法具有提取时间短、丹参酮提取量高等优点,适用于丹参中隐丹参酮、丹参酮Ⅰ及丹参酮ⅡA同时测定的样品前处理。     

堆肥中微生物总DNA的高效提取

采用化学裂解和酶解相结合的方法,选择加入PVPP的高盐缓冲液作为细胞裂解的反应体系,并以PEG-8000进行DNA沉淀,从高有机含量的堆肥样品中进行微生物总DNA的提取。结果表明,从4种性质不同的堆肥中均获得了高质量的微生物总DNA,所得的DNA分子片段在23kb左右;每克干重堆肥的总DNA提取量为63.54±12.08μg~106.50±28.36μg,A260/A280大于1.6,A260/A230大于1.8,不用经过纯化可以直接进行PCR扩增和限制性酶切;以该DNA为模板进行微生物区系的DGGE分析,显示了丰富的微生物多样性。该方法减少了通常环境样品DNA提取过程中的纯化步骤,减少了DNA的损失,为从事微生物分子生态学,尤其是那些针对高有机含量以及获取极为不易的环境样品的研究而言是十分有益的。     

线粒体DNA提取方法的比较

目的：将提取线粒体DNA的碱变性法、Triton法、改进高盐沉淀法加以比较,以得到最方便快速提取线粒体DNA的方法。方法：分离Wistar大鼠小肠上皮细胞,用3种方法提取线粒体DNA,紫外分光光度法定量。用琼脂糖凝胶电泳和线粒体ATPase 8亚基基因PCR扩增产物鉴定所提取的线粒体DNA。结果：改进高盐沉淀法线粒体DNA量最多,Triton法最少。OD260／OD280均在1．78-l.85间。将改进高盐沉淀法提取线粒体DNA用于PCR扩增,测定出了线粒体DNA ATPase 8亚基基因序列。结论：改进高盐沉淀法提取线粒体DNA具有操作简单,产量多的优点,该法所提取mtDNA可用于mtDNA测序。