蛇毒的研究和利用 Ⅰ.我国几种常见毒蛇的蛇毒酶活力的测定

本文对我国几种常见的毒蛇,即五步蛇、蝮蛇、竹叶青蛇、金环蛇、银环蛇、眼镜王蛇以及4种不同产地的眼镜蛇的蛇毒的12种酶活力进行了测定,报告了各活力的数值并对这些结果进行了讨论。     

薄层凝胶等电聚焦电泳的快速简便制胶方法

在薄层凝胶等电聚焦电泳技术中,制胶可谓是关键的一步。如果制胶失败,将造成时间上的浪费和经济上的损失(凝胶中所用的两性电解质载体——安福林的价格较昂贵)。如果制成的凝胶薄厚不匀或无支撑物,将会直接影响实验结果或给实验操作带来麻烦。我们针对这种情况,结合实验教学,摸索出一种快速、简便而效果较好的制胶方法。现简要介绍如下     

一种简单、快速、微量聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦电泳方法

Bio-Rad公司的微量聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦电泳(ModelⅢ Mini IEF Cell),不需要使用电极缓冲液,聚焦电泳时间仅用1.5小时,效果甚佳,但要使用该公司专有的凝胶支持薄膜,难于推广应用,我们经过试验,建立了一种简单、快速的微量凝胶等电聚焦电泳方法,40min完成等电聚焦过程,采用快速染色、脱色和干燥,将电泳图谱制成透明的薄膜,整个过程可以     

聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦

等电聚焦也曾称为等电点分离、等电点划分、等电点分析、聚焦电泳等。1966年瑞典学者Vesterberg和Svernsson首先合成了两性载体电解质,并成功地用于肌红蛋白分离,使这方法具有实用价值。等电聚焦的先决条件就是要求有稳定的pH梯度。按照支持pH梯度的介质不同,可     

四种有尾两栖类眼晶状体蛋白薄层凝胶等电聚焦电泳的比较

本文用四种有尾两栖类眼晶状体蛋白质为实验材料,以等电聚焦电泳法在恒定功率和时间内作了分类的比较。材料巴鲵(Liiua shihi)5只,3♂,2♀,1986.4采自四川巫山;无斑山溪鲵(Batrac-hoperus karlschmidti)9只,5♂,4♀,1986.5采自四川康定;北方山溪鲵(B.tibet-anus)8只,6♂,2♀,1986.6采自陕西周至;盐源山溪鲵(B.yenyuanensis)6只,5♂,1♀,1986.6采自四川冕宁。方法薄层凝胶板按蒙义文等(1981)方法,作者根据有尾两栖类眼晶状体蛋白质酸碱度,作部份改动。活取眼晶状体,用滤纸吸净血污,称重,蒸馏水反复冲洗后,匀浆(4℃下),4000r/min,离心5min,…     

聚丙烯酰胺凝胶薄层等电聚焦

自Awdeh和Leaback等以聚丙烯酰胺凝胶作抗对流支持介质进行薄层等电聚焦以来,又出现过以Sephadex、Agarose、醋酸纤维素等作抗对流介质的报道。当前应用最多的是聚丙烯酰胺凝胶和Agarose凝胶,现以前者为例介绍方法的原理、操作和应用。     

一种改进的超薄聚丙烯酰胺等电聚焦电泳实验

目的:介绍一种自制、简易、高效的平板微型聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦电泳方法。方法:将载玻片黏合作为制胶模具,剪滤纸制成上样芯子进行等电聚焦电泳。结果:电泳条带清楚,样品容量大,电泳时间短,操作性强。结论:此方法简单、有效、实用,所需凝胶量少,节约成本,值得推广。     

利用等电聚焦电泳研究黄单胞菌分类

对黄单胞菌的4个种及29个致病变种的代表菌株进行了等电聚焦电泳研究,发现所测定的黄单胞菌种间、致病变种间蛋白质图谱差别很大。电泳结果经聚类分析表明,某些致病变种间的差别并不一定比种间的差别小,说明某些致病变种可以上升到种这一分类地位。引起细菌性黑颖病的黄单胞菌禾谷致病变种、小麦致病变种、大麦致病变种间差别很小,仅有6条蛋白质谱带的差别。因此这3个致病变种的分类地位需重新考虑,同时说明等电聚焦电泳对黄单胞菌种下分类具有一定指导意义。     

一种改良的醋酸纤维素膜血清蛋白等电聚焦电泳方法

目前在等电聚焦电泳技术中,应用最多的是聚丙烯酰胺凝胶平板薄层等电聚焦。该法具有分辨率高的优点,但需采用高纯度试剂,价格昂贵,而且超薄层制板(≤0.5mm)技术要求也较高,这些条件限制了它的推广应用。利用醋酸纤维素膜进行等电聚焦,则可弥补上述缺点。但众所周知,醋酸纤维素膜存在较强     

醋酸纤维素膜上的蛋白质等电聚焦电泳

等电聚焦电泳一般以聚丙烯酰胺作为支撑物。但凝胶配制麻烦,两性载体用量多,价格昂贵。利用醋酸纤维素膜进行等电聚焦电泳,则可能克服上述缺点。但是醋酸纤维素膜的强电渗作用,影响了等电聚焦。过去解决这一问题的方法,条件复杂,要求高,有些试剂国内无法得到。我们试用了甲基化方法来封闭醋酸纤维素膜上的解离基团,有效地消除了电渗作用,不需转移而直接进行了大鼠血浆凝血酶原的酶联免疫染色。     

等电聚焦

蛋白质分子是带有电荷的两性生物高分子,其正、负电荷的数量是随分子所在环境的酸碱度而变化的。在电场存在下的一定pH缓冲液中,带正电荷的蛋白质分子将向负极移动;带负电荷的蛋白质分子将向正极移动,这就是电泳过程。在某一pH下,蛋白质分子在电场中     

聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦电泳分离血红蛋白的研究

本文采用聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦电泳,借助圆盘电泳仪的简易装置,对正常血红蛋白及异常血红蛋白(Hb)等进行了分析,获得满意效果。一、方法 1.凝胶制备 40％聚丙烯酰胺液(丙烯酰胺38.4克及甲叉双丙烯酰胺1.6克溶于蒸馏水至100毫升)1份,20％两性载体(Ampholine,国产、pH4—10)0.5份,蒸馏水3份,0.25％过硫酸铵液(临用前配制)2份,混匀,立即分装于内径4毫米,长9厘米的玻管中,胶长6厘米,日光灯下聚胶(约2小时),待胶聚合后,加样     

我国蝮属蛇毒的聚丙烯酰胺凝胶电泳比较——兼论蛇毒电泳在毒蛇分类上的应用价值

蛙科、蝮亚科、蝮属Agkistrodon(sensu stricto)已知约12种,基本上分布于古北界。我国已知产6种,个别种的分布可向南跨及东洋界的华中区。我国产种类中,intermcdius曾作为halys的亚种;blomhoffii亦曾作为halys的亚种,因而原订Agkistrodon blomhoffiibrevicaudus Stejneger 1907与Agkistrodon blomhoffii ussuriensis Emelianov 1929就曾相应改隶为Agkistrodon halys(Pallas)1776的亚种。近年来,有主张将intermedius恢复为种级(赵尔宓,1978;Gloyd,1978),赵尔宓等在讨论我国蝮蛇的种下分类时,亦提出     

用银染色显示的rHuIFN-αD垂直板聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦电泳测定法

本文报道了用聚丙烯酰胺垂直凝胶板进行蛋白质等电聚焦的方法,用改进的银染法使测定灵敏度达到ng水平。通过分析蛋白质等电聚焦的影响因素,建立了稳定的电泳条件,并用该方法发现了重组人αD型干扰素(rHu IFN-αD)基因表达产物的带电荷不匀一性。     

梅花鹿茸组织中性激素受体的等电聚焦电泳测定

茸角是雄性梅花鹿(Cervus nippon hortulorum)的第二性征,具有脱落和再生的特征。这种现象在哺乳动物纲中是绝无仅有的。 茸角虽为第二性征,但其生长发育与性激素的关系似乎存在矛盾现象。因此,威斯洛克(Wislocki)提出茸角生长发育不受睾酮控制,而是腺垂体分泌的某种激素所调节的假说。但这种假说迄今未被证实。     

超薄平板微型聚丙烯酰胺凝胶的等电聚焦电泳方法--介绍一种高效、快速的生物同工酶分析方法

介绍了一种简易、高效、快速的生物同工酶分析方法——超薄平板微型聚丙烯酰胺凝胶的等电聚焦电泳方法。该方法与目前国内外市场销售的同种用途等电聚焦的产品 (如BIO- RAD公司的 model1 1 1 Mini IEF Cell)相比 ,具有以下优点 :实验操作灵活 ,用途更广 ;谱带清晰 ;每次可实验的样本量大 ;电泳所需时间短 ;实验费用低 ;适用于多种酶系统的同工酶和等位酶分析 ;凝胶干燥不需任何设备且能长期保存 ;样本用量少。     

超薄平板微型聚丙烯酰胺凝胶的等电聚焦电泳方法——介绍一种高效、快速的生物同工酶分析方法

介绍了一种简易、高效、快速的生物同工酶分析方法－－超薄平板微型聚丙烯酰胺凝胶的等电聚焦电泳 方法。该方法与目前国内外市场销售的同种用途等电聚焦产品（如ＢＩＯ－ＲＡＤ公司的ｍｏｄｅｌ１１Ｍｉｎｉ ＩＥＦ Ｃｅｌｌ）相比,具有以下优点：实验操作灵知,用途更广;谱带清晰;每次可实验的样本量大;电泳所需时间短;实验费用低;适用于多种酶系统的同工酶和等位酶分析;凝胶干燥不需任何设备且能长期保存;样本用量少。     

单克隆抗体的等电聚焦

本文采用聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦和Phast-system仪等电聚焦测定12份HBsAg McAb IgG的等电点,并对两种方法测定的误差和优缺点进行了讨论。     

目前最高分辨率的电泳──固相pH梯度等电聚焦

固相pH梯度等电聚焦是国际上80年代的新型电泳技术.利用一系列具有弱酸和弱碱性质的丙烯酰胺衍生物滴定时,在滴定终点附近形成的pH梯度并参与丙烯酰胺的共价聚合,从而形成固定的不随环境电场等条件变化的pH梯度,该方法具有比传统载体两性电解质等电聚焦更高的分辨率、更大的上样量.可用于分析和制备相近pI的蛋白质,多肽等.     

凝胶等电点聚焦电泳蛋白质的直接固定染色法

聚丙烯酰胺凝胶等电点聚焦电泳是一个分离蛋白质组分很有价值的方法。其优点是分辨率高、重演性好,且分离后的蛋白质区带的等电点亦大致可知,近年来该方法的应用越来越广。但等电点聚焦电泳后凝胶蛋白质区带的染色恰很费时而手续繁。由于两性电介质(Ampboline)也和染料牢固结合呈色,所以要花数天时间先把凝胶中的两性电介质脱净,方可染色。染色后又需进行长时间的背景脱色,才能得到区带清晰的蛋白质带谱。为此,一些研究者摸索了毋须预先脱去两性电介质的直接固定染色法。我们比较了Malik和Reisner的直染法,尤以Malik法效果最好。