21例侵袭性肺曲霉病患者Th以及Treg细胞的检测

目的：分析侵袭性肺曲霉病患者辅助性T细胞（Th）以及调节性T细胞（Treg）在外周血中单个核细胞中的表达情况及其临床相关性,探讨Th和Treg细胞介导的免疫反应在侵袭性肺曲霉病中的作用。方法分离21例侵袭性肺曲霉病患者及19例健康人外周血的单个核细胞,采用流式细胞术分析Th1、Th2、Th17、Treg细胞群的表达情况,Real-timePCR方法检测相关转录因子T-bet、GATA-3、RORγt以及Foxp3的表达,ELISA法检测血清中相关细胞因子IFN-γ、IL-4、IL-17以及TGF-β的表达。结果与健康人对照组相比,侵袭性肺曲霉病患者Th1细胞以及Treg细胞占CD4＋T细胞的比例较之对照组明显降低;Th1、Th17、Treg细胞相关转录因子T-bet、RORγt、Foxp3以及相关细胞因子IFN-γ、IL-17A、TGF-β与对照组相比表达明显降低。结论IPA患者的Th1、Th17以及Treg细胞所介导的免疫反应受抑制。     

木犀草素调节SIRT3/AMPK/mTOR信号通路对溃疡性结肠炎小鼠Th17/Treg免疫平衡的影响CSCD

探究木犀草素对溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)小鼠模型中辅助性T细胞17(Th17)/调节性T细胞(Treg)免疫平衡的影响,并分析其潜在机制。60只BALB/c雄性小鼠随机分为正常组、模型组、阳性对照组、木犀草素组、木犀草素+3-TYP组,每组12只。采用葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导建立UC模型,观察并记录小鼠体重变化、大便稠度和大便潜血情况,计算疾病活动指数(DAI);HE染色观察结肠组织病理学变化;流式细胞术检测脾脏Th17、Treg细胞比例,计算Th17/Treg比值;ELISA检测结肠组织中IL-6、IL-10、IL-17和IL-23含量;RT-qPCR检测结肠组织RORγt和Foxp3的mRNA表达;Western blot检测结肠组织SIRT3、AMPK、p-AMPK、mTOR、p-mTOR蛋白表达。与正常组相比,模型组小鼠DAI评分、组织病理学评分、脾脏Th17/Treg比值、结肠组织IL-6、IL-17、IL-23、RORγt mRNA水平和p-mTOR/mTOR比值升高,IL-10、Foxp3 mRNA和SIRT3蛋白水平以及p-AMPK/AMPK比值降低(P<0.05)。经药物干预后,小鼠DAI评分、组织病理学评分、脾脏Th17/Treg比值、结肠组织IL-6、IL-17、IL-23、RORγt mRNA水平和p-mTOR/mTOR比值降低,IL-10、Foxp3 mRNA和SIRT3蛋白水平以及p-AMPK/AMPK比值升高(P<0.05);3-TYP可减弱木犀草素对UC小鼠Th17/Treg细胞分化平衡的影响(P<0.05)。木犀草素可改善DSS诱导的UC小鼠模型中Th17/Treg失衡,其机制可能与激活SIRT3/AMPK/mTOR通路有关。     

乳杆菌肽聚糖对β-乳球蛋白致敏小鼠脾细胞Th1/Th2及Treg/Th17失衡的体外影响

【目的】观察嗜酸乳杆菌完整肽聚糖(Whole peptidoglycan,WPG)对致敏脾淋巴细胞Th1/Th2及Treg/Th17平衡的体外调节作用。【方法】通过腹腔注射β-乳球蛋白(β-Lg)建立BALB/c小鼠牛乳过敏模型。造模成功后,分离致敏小鼠的脾淋巴细胞并分别与不同剂量的WPG共同孵育,酶联免疫法检测细胞上清液中抗体(总IgE和特异性IgE),Th1/Th2及Treg/Th17相关细胞因子(IFN-γ,IL-4,TGF-β,IL-17)水平,流式细胞术检测脾淋巴细胞中CD3+、CD4+和CD8+的百分含量,荧光定量PCR法检测过敏小鼠脾细胞中Th1/Th2及Treg/Th17相关转录因子T-bet、GATA-3、Foxp3和RORγt mRNA的表达量。【结果】WPG体外刺激致敏脾细胞后可显著抑制IgE的产生,上调CD3+、CD4+细胞数及CD4+/CD8+比值,下调Th2型因子(IL-4,GATA-3mRNA)和Th17型因子(IL-17,RORγt mRNA)的表达,且与过敏组相比,中、高剂量WPG的作用效果显著(P0.05);另外,WPG体外作用还上调了Th1型因子(IFN-γ,T-bet mRNA)及Treg型因子(TGF-β,Foxp3 mRNA)的表达,且具有剂量依赖性。【结论】嗜酸乳杆菌WPG体外刺激可有效纠正致敏脾淋巴细胞的Th1/Th2及Treg/Th17失衡。     

Cell metabolism:新发现,调节淋巴样细胞发育的RORγ天然配体

近日,著名国际代谢类杂志cell metabolism刊登了纽约大学医学院研究人员的一项最新研究成果,他们通过实验证实了核激素受体RORγt的天然配体是胆固醇合成过程中的中间产物,并且发现了RORγt配体影响淋巴细胞发育的具体机制。研究人员指出,核激素受体RORγt缺失小鼠会出现胸腺细胞,淋巴器官,Th17和ILC3细胞发育缺陷,之前研究发现RORγt能够结合胆固醇代谢产物羟固醇,但这些是否是RORγt的天然配体仍不清楚。研究人员利用过表达,RNAi,以及对代谢酶进行基因敲除等方法对RORγt依赖性     

科研快讯

<正>Cell metabolism:新发现,调节淋巴样细胞发育的RORγ天然配体近日,著名国际代谢类杂志cell metabolism刊登了纽约大学医学院研究人员的一项最新研究成果,他们通过实验证实了核激素受体RORγt的天然配体是胆固醇合成过程中的中间产物,并且发现了RORγt配体影响淋巴细胞发育的具体机制。研究人员指出,核激素受体RORγt缺失小鼠会出现胸腺细胞,淋巴器官,Th17和ILC3细胞发育缺陷,之前研究发现RORγt能够结合胆固醇代谢产物羟固醇,但这些是否是RORγt的天然配体仍不清楚。研究人员利用过表达,RNAi,以及对代谢酶进行基因敲除等方法对RORγt依赖性转录进行了分析,发现甾醇脂对驱动RORγt依赖性转录是非常必     

雷公藤甲素致小鼠肝损伤的机制研究

本文研究雷公藤甲素致肝损伤作用机制。将雌性C57BL/6小鼠20只随机分为2组,并以雷公藤甲素造模,通过检测血清中谷丙转氨酶(ALT)水平变化,以及观察小鼠肝脏组织切片HE染色结果,了解肝脏损伤情况;RT-PCR法检测小鼠肝脏中白细胞介素(IL)-17、IL-6、维甲酸孤儿核受体(ROR-γt)mRNA表达水平,ELISA法检测IL-17、IL-6蛋白表达水平,Western blot法检测小鼠肝脏中TLR4蛋白表达水平。与对照组比较,雷公藤甲素模型组小鼠血清ALT水平显著升高(P0.005),HE染色切片显示较多的肝细胞坏死和炎症细胞浸润,IL-17、IL-6、ROR-γt mRNA表达水平和IL-17、IL-6蛋白表达水平显著升高(P0.005),此外,TLR4蛋白表达水平显著升高(P0.005)。结果表明,雷公藤甲素所导致的肝损伤可能通过激活TLR4信号,增加IL-17、IL-6的表达,影响Th17特异性转录因子ROR-γt,进而促进Th17细胞活化,增强其致炎功能。     

当归挥发油对哮喘BALB/c小鼠的平喘作用及对Th17免疫活性的影响

目的：探讨当归挥发油对哮喘BALB/c小鼠的平喘作用及对IL-17A、RORγt等Th17细胞活性因子的影响。方法：取雌性小鼠随机分为7组（n=12）：正常对照组、模型对照组、地塞米松组、当归挥发油高中低剂量组及当归油中+地米组,通过注射卵清白蛋白（OVA）致敏、吸入OVA激发的方法来复制哮喘动物模型,在当归挥发油的防治下,考察当归挥发油对哮喘行为学、肺功能、肺组织病理学、血清IL-17A及肺组织RORγt表达的影响。结果：60、120、240 mg/kg当归挥发油可维持哮喘小鼠体重的正常增长,改善哮喘行为学、肺功能及肺组织病理学变化,抑制IL-17A与RORγt的过度表达（P<0.05, 0.01）。同时,当归挥发油与地塞米松配伍后对维持体重的正常增长、缓解IL-17A与RORγt的过度表达具有一定的协同作用。结论：当归挥发油具有明显的防治哮喘作用,抑制IL-17、RORγt过度表达而抑制Th17细胞免疫活性是其作用机制之一;而当归挥发油与糖皮质激素配伍后有一定的协同作用。     

自身免疫性心肌炎中Th17/Treg细胞及其相关因子的动态变化

目的研究Th17与Treg细胞相关因子在实验性自身免疫性心肌炎(EAM)中的动态变化,探讨EAM发病机制。方法注射心肌肌球蛋白免疫Balb/C小鼠构建EAM模型(EAM组,n=18),随机分成7d、21d、56d不同时间段3个亚组;正常对照组18只,用PBS代替心肌肌球蛋白皮下注射。取各组心肌组织行HE染色观察病理变化,RT-PCR法检测心肌组织RORγt、Foxp3、IL-17和TGF-β的mRNA表达水平,ELISA方法检测血清IL-17和TGF-β的变化。结果 EAM各组小鼠出现不同程度心肌炎症改变;EAM 21d组心肌组织RORγt、Foxp3、IL-17和TGF-βmRNA表达水平较正常对照组明显升高(P0.01),血清IL-17和TGF-β水平也显著高于正常对照组(P0.05);EAM 56d组血清IL-17和TGF-β含量比21d组有所降低,但仍高于正常对照组(P0.05)。结论 Th17与Treg细胞及其相关因子参与自身免疫性心肌炎的发生与发展。     

IL-17、IL-6和IL-10因子在急性冠状动脉综合征的作用机制

为了探讨IL-17、IL-6和IL-10因子在急性冠状动脉综合征的作用机制,本研究采取了78例接受诊断性导管插入术的患者的血样,并将样品分为AMI、UA和SA 3组,通过ELISA实验检测3组患者中IL-10、IL-6和IL-17细胞因子的表达,通过流式细胞术检测Th17和Treg细胞的百分比,最后用RT-PCR的方法检测转录因子Foxp3和RORγt的表达。研究结果表明ACS患者IL-10、IL-6和IL-17细胞因子表达异常,且Th17和Treg细胞百分比失衡,转录因子Foxp3和RORγt的mRNA水平也出现异常。ACS患者存在IL-10、IL-6和IL-17细胞因子表达异常,而细胞因子的异常表达是由Th17/Treg细胞失衡引起的,Th17/Treg细胞失衡同时影响多个重要转录因子的表达,因此在ACS发病中具有重要调控作用。     

退变腰椎间盘中IL-17表达的变化及其意义

目的:研究退变的椎间盘组织中IL-17表达的变化及其与椎间盘退变严重程度之间的关系。方法:收集退变椎间盘标本23例,正常椎间盘标本12例,通过免疫组织化学染色、免疫荧光染色、实时-定量PCR(RT-PCR)和酶联免疫吸附实验(ELISA)从细胞、蛋白和基因水平检测椎间盘组织中IL-17和孤独受体(retinoid-related orphan receptor,RORγt)的表达。结果:免疫组化染色显示退变椎间盘组织中IL-17阳性细胞比例较对照组明显增高,有统计学差异(P<0.05);免疫荧光染色显示退变椎间盘组织中Th17细胞含量明显增多(P<0.05);退变的椎间盘组织中IL-17和RORγt m RNA的相对表达量较对照组增加,有统计学差异(P<0.001),且两者之间呈显著正相关(r=0.6919,P<0.001);退变的椎间盘组织中IL-17的含量较对照组明显增加(P<0.01),且与椎间盘退变的严重程度呈正显著相关(r=0.4714,P<0.01)。结论:IL-17含量增加参与了腰椎间盘退变的病理过程,并且可能对椎间盘退变起促进作用。     

一株猪肠道Lactobacillus animalis LGM对结肠炎小鼠Th细胞分化转录因子基因表达的影响

【目的】从体外和体内研究Lactobacillus animalis LGM对Th细胞分化转录因子T-bet、GATA-3、ROR-γt和Foxp3的调节作用,以及探究L. animalis LGM对小鼠结肠炎的影响。【方法】本试验采用改良型的Hungate滚管技术从猪结肠内容物中分离一株L. animalis LGM,根据其16S rRNA序列进行鉴定。收集L. animalis LGM培养液上清,与细菌脂多糖(LPS,2μg/mL)同时孵育Caco-2细胞24 h,体外研究L. animalis LGM对Caco-2细胞内Th细胞分化转录因子(T-bet,GATA3,ROR-γt和Foxp3) mRNA表达的影响;配制L. animalis LGM细菌悬液,研究L. animalis LGM灌胃对DSS诱导结肠炎小鼠症状及结肠Th细胞分化转录因子和细胞因子(IFN-γ,IL-4,IL-17和IL-10) mRNA表达的影响,表达结果采用荧光定量PCR法检测。【结果】与对照组相比,L.animalisLGM培养液上清显著上调Caco-2细胞内ROR-γt与Foxp3 mRNA表达(P0.05),显著下调GATA3、IL-4、IL-17和TGF-βmRNA表达(P0.05)。L. animalis LGM灌胃显著上调小鼠结肠内ROR-γt和Foxp3的表达(P0.05),显著降低了促炎因子IL-4和IL-17的表达(P0.05),阻止了小鼠结肠长度缩短(P0.05)。【结论】猪肠道分离L. animalis LGM表现出对Th细胞分化转录因子的选择性调节,显著上调Caco-2细胞及结肠炎小鼠ROR-γt与Foxp3mRNA表达。降低DSS诱导结肠炎小鼠炎症水平,对DSS诱导结肠炎起保护作用,有助于维护肠道环境稳态。     

不同条件下建立自身免疫性甲状腺炎小鼠模型的比较研究

目的 观察和比较不同性别、抗原剂量、注射频次结合造模时长对猪甲状腺球蛋白(porcine thyroglobulin, pTg)诱导的小鼠实验性自身免疫性甲状腺炎(experimental autoimmune thyroiditis, EAT)模型建立的影响。方法 SPF级80只CBA/J小鼠,在不同性别(雌性60只,雄性20只),不同抗原剂量(pTg 50、100、200μg),不同注射频次结合造模时长(28 d内注射2次,28 d内注射3次及35 d内注射3次)条件下构建EAT小鼠模型。通过甲状腺病理评分、血清抗甲状腺球蛋白抗体TgAb滴度、血清总甲状腺素TT4水平、脾Treg及Th17细胞比例及相关转录因子水平比较造模的效果。结果 (1)相同造模条件下雄性小鼠甲状腺淋巴细胞浸润程度及EAT评分均低于雌鼠,TgAb滴度、Th17细胞比例及IL-17A表达水平均较雌鼠显著降低;(2)50μg造模组TgAb滴度、TT4水平、Th17细胞比例、转录因子RORγt及IL-17A的表达量均显著低于100μg造模组;200μg造模组Foxp3表达量显著高于100μg造模组;(3)28 d 3...     

丹参对非酒精性脂肪肝Th17细胞及相关细胞因子的影响*

目的:研究丹参对非酒精性脂肪肝(NAFLD)大鼠Th17细胞及相关细胞因子的影响,为临床上丹参治疗NAFLD提供实验依据。方法:SPF级别SD大鼠32只,随机分为模型组、空白对照组、葛根对照组、丹参组,每组8只。模型组给予高脂饲料喂养4周以建立NAFLD模型;丹参治疗组及葛根对照组大鼠给予6.25g·kg^-1·d^-1的浓缩液每日1次灌胃;除了空白对照组外,其余各组大鼠均给予高脂饲料喂饲4周。实验完全结束(第4周),各组大鼠禁食12～14 h,禁水2 h后,采血,收集肝脏组织,检测各组大鼠血脂(TC、TG、LDL-C、HDL-C)水平及肝功能(AST、ALT)、肝脏指数,观察肝组织病理学改变。流式细胞仪检测外周血Th17、Treg细胞含量。通过ELISA法检测血清IL-6、IL-17、TNF-α水平;RT-PCR法检测肝脏组织RORγt基因表达。结果:连续4周喂养高脂饮食后,模型组大鼠肝脏发生脂肪变性,有大量炎症细胞浸润。与模型组相比,丹参治疗组、葛根对照组大鼠TC、TG、LDL-C、ALT、AST水平及肝脏指数明显低于模型组(P＜0.05),HDL-C水平明显高于模型组(P＜0.05)成功复制NAFLD大鼠模型。丹参治疗组大鼠外周血Th17细胞含量、IL-6、IL-17水平、大鼠RORγt基因表达量显著低于模型组及葛根对照组(P＜0.05);TNF-α水平低于模型组及葛根对照组;Treg细胞含量高于模型组(P＜0.05)及葛根对照组(P＞ 0.05);Treg/ Th17显著高于模型组及葛根对照组 (P＜0.05)。结论:丹参通过降低血清中IL-6、IL-17、TNF-α水平,抑制RORγt基因表达,降低外周血Th17细胞含量,升高Treg细胞含量,调整Th17/Treg平衡,从而抑制NAFLD发生发展。     

异源反应性NK细胞对骨髓移植小鼠脾脏Th1/Th2细胞亚群的影响

目的:观察异源反应性自然杀伤细胞(NK细胞)对骨髓移植小鼠脾脏辅助性T细胞Th1/Th2亚群的影响。方法:以BALB/c和CB6F1小鼠为受体,在γ射线照射后通过尾静脉输入C57BL/6J小鼠的骨髓细胞和脾脏单个核细胞,建立移植物抗宿主病模型;然后输入供体的NK细胞,检测受体小鼠脾脏中Th1/Th2淋巴细胞亚群和外周血中γ干扰素(IFN-γ)、白细胞介素10(IL-10)的变化。结果:与单纯输入骨髓细胞和单个核细胞组小鼠相比,输入异源反应性NK细胞后,BALB/c和CB6F1小鼠脾脏中Th1细胞比例均下降,Th2细胞比例均上升,CB6F1小鼠脾脏中Th2虽有升高但没有统计学意义;外周血中IL-10水平显著升高,IFN-γ的水平显著下降。结论:异源反应性NK细胞可能通过降低脾脏中Th1细胞亚群比例和升高Th2细胞亚群比例减轻移植物抗宿主病。     

妊娠期肝内胆汁淤积症患者外周血中维生素D受体 与Th1/Th2 型细胞因子的变化

目的:研究妊娠期肝内胆汁淤积症患者外周血中维生素D受体的表达与Th1/Th2型细胞因子干扰素-γ/白细胞介素-4(IFN-γ/IL-4)的变化关系,探讨ICP发病机制。方法:选取ICP患者31例(ICP组),孕周相匹配的正常孕妇31例(正常对照组)。采用酶联免疫吸附试验(ELISA法),检测两组孕妇血清中Th1型细胞因子(IFN-γ)和Th2型细胞因子(IL-4)的水平;采用实时荧光定量逆转录-多聚酶链反应(qRT-PCR),检测两组孕妇外周血单个核细胞维生素D受体(VDR)mRNA的表达水平,采用3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)为内参,根据相对定量公式:2-△△CT分析VDR mRNA的表达水平。结果:(1)ICP组外周血清中IFN-γ的浓度[(230.93±36.04)pg/ml]明显高于正常对照组[(138.37±25.08)pg/ml],差异有统计学意义(P<0.01)。ICP组血清中IL-4浓度[(9.99±3.19)pg/ml]和正常对照组[(8.58±2.43)pg/ml]比较,差异无统计学意义(P>0.05)。ICP组IFN-γ/IL-4比值(24.56±6.91)高于正常对照组(17.13±4.84),差异有统计学意义(P<0.05)。(2)ICP组外周血单个核细胞维生素D受体mRNA的表达明显低于正常对照组(P<0.01),正常对照组VDR的表达定义为1.0,ICP组的表达量为0.4。(3)ICP组外周血中VDR的表达水平与IFN-γ浓度呈明显负相关(r=-0.833,P<0.01),与IL-4浓度无明显相关(r=-0.109,P>0.05),与IFN-γ/IL-4比值呈负相关,但相关性不强(r=-0.356,P=0.049<0.05)。结论:ICP患者外周血Th1/Th2型细胞因子平衡由Th2向Th1偏移,可能与ICP孕妇外周血单个核细胞VDR的表达减少有关。     

不同RF型类风湿性关节炎患者Th17相关细胞因子表达研究

目的:探讨类风湿因子阳性与阴性类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)患者外周血中辅助T细胞(Th17)及相关细胞因子白介素17(interleukin,IL-17),白介素6(interleukin,IL-6)表达的差异。方法:收集RA患者51例,根据RF测定分为RF+、RF-组,健康查体者(对照组)20例,采用流式细胞术检测受检者外周血单个核细胞(PBMC)的Th17细胞的百分率;以酶联免疫吸附法(ELISA)检测受检者血浆中IL-17,IL-6的水平。结果:RA患者CD4+IL-17+T细胞,IL-17、IL-6水平均高于对照组,RF因子阳性与阴性RA患者之间CD4+IL-17+T细胞,IL-17、IL-6表达水平均存在差异有统计学意义。结论:在RA中不同RF型免疫反应和炎症表达的不同,可能与Th17及相关细胞因子表达差异有关。     

白细胞介素23在呼吸道合胞病毒感染致Th1、Th2及Th17细胞分化中的作用及机制

本研究旨在探讨白细胞介素23(interleukin 23,IL-23)在呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus,RSV)感染支气管上皮细胞BEAS-2B后对Th1、Th2和Th17细胞分化的影响及作用机制。将RSV感染BEAS-2B后的上清液与淋巴细胞共孵育,并分别阻断IL-23受体(IL-23 receptor,IL-23R)、IL-23p19亚基及p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 mitogen-activated protein kinase,p38 MAPK)信号通路。应用酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测上清液中细胞因子γ干扰素(interferon γ,IFN-γ)、IL-4、IL-17的浓度。同时,应用实时聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)检测相关转录因子(t-bet、gata3、rorγt)和信号转导子(stat4、stat6、stat3)的表达。结果显示,RSV感染后IFN-γ、IL-4和IL-17蛋白表达上调,转录因子及信号转导子的表达也有所增加。阻断IL-23和p38 MAPK信号通路后,Th1、Th2和Th7细胞分泌的细胞因子及转录因子表达均明显下降。结果提示,阻断IL-23后可在基因转导层面抑制RSV感染上皮细胞后诱导的Th1、Th2和Th17细胞分化,此过程可能与p38 MAPK信号通路有关。     

Th17及Th1相关细胞因子与支气管哮喘的关系研究

目的:分析外周血Th17、Th1及相关细胞因子表达水平和支气管哮喘(bronchial asthma,BA)发生、发展的相关性研究。方法:回顾选取我院收治的BA病例57份,称作BA组,另选取呼吸系统正常的病例55例为对照组,检测两组入选者的外周血IL-2、TNF-α、Th17、IL-6、Th1指标表达差异,并进行多因素回归分析。结果:BA组Th17(0.62±1.67)%、Th1(1.45±0.48)%及Th1/Th17(2.33±1.28)均显著低于对照组(P均0.05);BA组TNF-α(27.46±8.12)pg/mL、IL-6(11.69±2.14)pg/mL表达量显著高于对照组,IL-2(2.58±3.89)pg/mL、IFN-γ(3.74±6.15)pg/mL含量均显著低于对照组(P均0.05);经Logistic回归分析,TNF-α、IL-6、IFN-γ、Th1/Th17、IL-2均和BA有密切相关性(P均0.05)。结论:IL-2、IFN-γ、Th1/Th17、TNF-α、IL-6表达水平均与BA有密切关联,可能是参与BA发病的主要原因,及早进行Th17、Th1及相关细胞因子检查有助于明确病情。     

调控Tim-3通路在免疫性肝损伤大鼠中对Th17细胞的影响

目的建立免疫性肝损伤模型,探讨Tim-3通路在阻断或激活时对Th17细胞的影响。方法大鼠尾静脉注射刀豆蛋白A(Con A)8周,建立免疫性肝损伤模型。无菌取脾脏制备脾淋巴细胞,取外周血分离血清后于-20℃保存,取肝脏组织放入4%的多聚甲醛中固定备用。在96孔板上将脾淋巴细胞平均分成5组,即阻断实验组、阻断对照组、激活实验组、激活对照组和Con A对照组。用Tim-3的单克隆抗体即Anti-Tim-3来阻断Tim-3通路;用Tim-3的重组配体galectin-9来激活Tim-3通路,37℃、5%CO2培养箱中培养72 h,收集细胞上清液于-20℃保存。生化分析法测血清中ALT、AST和ALB的表达;HE染色观察肝脏组织的病理变化;免疫组化法测肝脏组织中IL-17A和ROR-γt蛋白的表达;ELISA法测细胞上清液中IL-17A及IL-6的表达;实时定量PCR测各组脾淋巴细胞ROR-γt mRNA的表达。结果与对照组相比,模型组HE染色可见明显的炎性细胞浸润、肝脏组织损伤及较多的假小叶,免疫组化可见IL-17A和ROR-γt蛋白的表达明显升高;与阻断对照组相比,阻断实验组中IL-17A和IL-6的水平升高(P0.05);与激活对照组相比,激活实验组中IL-17A和IL-6的水平降低(P0.05);实时定量PCR显示与阻断对照组相比,阻断实验组中ROR-γt mRNA的表达明显增加(P0.05)。结论免疫性肝损伤的发病与Th17细胞密切相关,免疫调控Tim-3通路可通过影响Th17细胞效应,进而参与免疫性肝损伤的发病机制。     

细胞免疫功能及辅助型T细胞因子在口腔扁平苔藓中的作用

目的 探讨细胞免疫功能及辅助型T细胞（Th）细胞因子在口腔扁平苔藓（OLP）中的作用。方法 以35例糜烂型（糜烂组）及29例网纹型OLP（网纹组）患者为对象,选取同期20例健康人为对照组,流式细胞术检测外周血中T细胞、B细胞、NK细胞和调节性T细胞亚群表达百分率。ELISA法检测外周血中TNF-α和INF-γ（Th1型细胞因子）,IL-4和IL-10（Th2型细胞因子）,IL-17、IL-23（Th17型细胞因子）含量;分离外周血单个核细胞,qRT-PCR检测上述因子mRNA的表达。结果 与健康组相比,OLP患者CD3+、CD4+ T细胞亚群比例（F=3.211和3.565,P<0.05）及CD4+/CD8+降低（F=3.430,P<0.05）,CD4+Foxp3+调节性T细胞亚群比例（F=3.370,P<0.05）及外周血中TNF-α、INF-γ、IL-4、IL-10、IL-17、IL-23含量增高（F=0.923、0.820、1.043、1.132、0.745和0.802,P<0.05）。与网纹组相比,糜烂组CD8+ T细胞亚群比例较低（t=2.450,P<0.05）;IL-4、IL-10蛋白（t=22.780和25.112,P<0.05）及mRNA较低（t=3.781和6.710,P<0.05）,IL-17、IL-23蛋白（t=15.765和19.307,P<0.05）及mRNA较高（t=4.022和8.569,P<0.05）。结论 口腔扁平苔藓患者存在细胞免疫紊乱及Th细胞因子异常,其中CD8+及Th17型细胞与糜烂型OLP发病有关,Th2型细胞与网纹型OLP发病有关。