浅析高效液相色谱在药物分析中的应用

当前,随着药品检测的发展,高效液相色谱技术是常用的定性和定量分析的技术,我们可以使用此技术同时检测多种防腐剂,不仅省时省力,还具有精确科学的优势。但同时,我们也发现,在使用高效相色谱进行药物分析检测时,难点在于确定高效液相色谱的流动相的配置比例、要素组成、流速以及检测时的波长;高效液相色谱在确定方案之后,就需要进行样品的前处理、样品的检测、检测方法的精确性和稳定性。本文就主要分析高效液相色谱技术的发展现状,对高效液相色谱检测存在的问题进行分析,并提出了一些合理化的建议,希望有所帮助。     

二维液相色谱在中药分析的应用

中药的物质体系复杂,对其组分的分离、鉴定和制备需要更高的分离度,二维液相色谱能将分离机理不同而又相互独立的两支 色谱柱串联构成分离系统,应用于复杂基质的中药材及中药复方制剂的分析,可显著提高峰容量和色谱峰鉴定的可靠性,降低色谱峰重叠, 使分离效率与分析通量大为提高。综述二维液相色谱基本原理及其在中药分析中的应用研究新进展。     

均匀设计在候选内参基因RT—qPCR实验条件优化中的应用

目的探讨均匀设计在候选内参基因RT—qPCR实验条件优化中的应用,有助于后期实验筛选不同状态下THP～1细胞的稳定内参基因。方法以THP-1细胞cDNA为模板,eDNA模板量、引物浓度和退火温度3个因素为影响因素,应用均匀设计3因素8水平,探索影响候选内参基因RT-qPCR的扩增条件,检测不同实验条件下的扩增效果,在最优扩增条件下建立候选内参基因定量扩增的相对标准曲线,并检测扩增效率。结果通过均匀设计,完成对eDNA模板量、引物浓度和退火温度3因素8水平的实验条件优化,建立候选内参基因RT—qPCR检测的最佳组合为eDNA模板量0．5big、引物浓度200μmol／L、退火温度55℃。结论本实验选用均匀设计优化RT—qPCR实验条件,筛选出THP-1细胞候选内参基因RT—qPCR的最优实验条件。均匀设计适合于本实验研究多因素多水平试验条件的配比。     

抑氨菌筛选鉴定、培养条件优化及在鸡粪除臭中的应用

目的筛选能抑制鸡粪中恶臭气体NH3释放的亚硝化、硝化细菌菌株。方法以亚硝化、硝化细菌培养基为筛选培养基筛选菌株,然后将菌株分别以10%(v/m,下同)的接种量接种到鸡粪中,测定其对鸡粪中NH3释放量的影响,从中筛选出可减少NH3释放的菌株。根据菌株的形态特征和16S rDNA序列分析对其进行鉴定。通过自动发酵系统对菌株培养温度、pH、通气量及转速四个因素进行正交优化。结果通过筛选得到两株细菌YF1和YS2,经鉴定分别为假单胞菌属(Pseudomonas sp.)和中华根瘤菌属(Sinorhizobium sp.)。菌株YF1最适培养条件为温度28℃,pH 7.0,通气量5 L/min,转速200 r/min;菌株YS2最适培养条件为温度30℃,pH6.5,通气量5 L/min,转速300 r/min。温度、pH、接种量和通气量对YF1、YS2影响均极显著(P0.01)。YF1和YS2单独按10%剂量接种分别使鸡粪中NH3的释放量降低26.0%和28.4%,而两菌1∶1混合接种可使NH3释放量降低75.6%。结论 YF1和YS2是抑制鸡粪中NH3释放的优良菌株。     

液相色谱/光谱(紫外、质谱及核磁共振)联用技术在中草药有效成分研究中的应用

本文综述了液相色谱／光谱(紫外、质谱及核磁共振)联用技术的最新进展及其在中草药有效成分研究中的应用。并对这一新技术在实际应用中的优缺点及应用前景进行了分析和展望。     

亡的执行者——半胱天冬酶在疾病防治中的应用前景

近年来,研究人员逐渐认识到,一类被称为Ｃａｓｐａｓｅ（ｃｙｓｔｅｉｎｃｏｎｔａｉｎｉｎｇａｓｐａｒｔａｔｅｓｐｅｃｉｆｉｃｐｒｏｔｅａｓｅ,半胱天冬酶）的蛋白酶在细胞的凋亡过程中起了重要作用。半胱天冬酶是一类对天冬氨酸特异的半胱氨酸蛋白酶,在其活...     

肿瘤标记物的分类、筛选及其在肿瘤病理诊断中的应用

随着免疫组织化学研究的进展,各种新的肿瘤标记物的发现对肿瘤的来源和罕见肿瘤的诊断、以及转移瘤原发部位的确定,提供了客观而可靠的依据。但是免疫组化还面临不少问题。越来越多的肿瘤标记物的相对特异性和交叉反应,未分化或低分化肿瘤不表达有关抗原,给诊断带来困难。尤其是软组织肿瘤,由于组织起源的多样性和多向分化的潜能,瘤细     

基于均匀设计的主成分分析-支持向量机模型及其在几丁质酶最适pH建模中的应用

采用主成分分析法对样本数据集进行预处理,将得到的新样本数据集输入支持向量机,籍均匀设计,构建了几丁质酶氨基酸组成和最适pH的数学模型。当惩罚系数C为10,epsilon值为0.7,Gamma值为0.5,模型对pH值拟合的平均绝对百分比误差为3.76%,同时具有良好的预测效果,预测的平均绝对误差为0.42个pH单位。该方法比用BP神经网络方法效果更佳。     

液相质谱联用的代谢组方法优化及其在蓝细菌分析中的应用

为了准确鉴定光合蓝细菌中的各种代谢物,需要对基于液相色谱–质谱联用仪(LC-MS)的代谢组学分析方法进行有针对性的优化。本研究选取了24种涉及中心碳代谢和能量代谢的代谢物作为LC-MS的检测目标,获得了每个代谢物的最适色谱分离条件和质谱参数;同时以光合蓝细菌Synechocystis sp.PCC6803为主要对象,针对性地优化了样品前处理条件,结果显示适当延长梯度洗脱顺序表的时间并将流速设为0.2 m L/min可以得到最佳的分离效果,同时选择80%(V/V)甲醇(-80?C)作为代谢物萃取剂。分析结果证明这一代谢组分析技术可以成功地应用到光合蓝细菌的研究中。     

高聚物型色谱柱在高效液相色谱法中一步分析制备葛根素及大豆苷元的应用

建立了使用以聚苯乙烯-二乙烯基苯(PS-DVB)为基质的高聚物型色谱柱一步分离制备葛根提取液中的葛根素和大豆苷元的方法。采用MKF-RP-HH色谱柱(300 mm×7.8 mm,8μm),葛根提取液经70%乙醇溶解稀释,以水(A)和甲醇(B)为流动相进行梯度洗脱,流速1.0 m L/min,检测波长250 nm,柱温30℃。结果表明:葛根提取液中的2种有效成分葛根素和大豆苷元均与杂质达到了较好的分离效果,且柱效大于2 100 N/m,优于常规的C-18硅胶色谱柱(柱效:1 000 N/m)。该高聚物型色谱柱不仅可用于上述分析,还可用作半制备柱制备得葛根素和大豆苷元纯品,葛根素在2~50μg/m L范围内线性关系良好,回归方程为y葛根=1.342 2x-1.018 4,线性相关系数为0.999;大豆苷元在2~20μg/m L范围内线性关系良好,回归方程为y大豆=2.275x+0.869 5,线性相关系数为0.999;葛根素和大豆苷元的纯化得率分别可达95.9%和78.5%。     

结直肠癌血清肿瘤标记物液相芯片制备条件的优化及在CEA抗原检测中的初步应用

液相芯片技术由于其高通量,灵敏度高,信噪比高,液相条件下反应,操作简便,耗时短等优点,已被美国FDA批准成为临床的检测手段。本文主要介绍了结直肠癌血清肿瘤标记物液相芯片制备条件的优化及其在CEA抗原检测中的初步应用。本研究首先将CEA抗原的捕获抗体与微球载体进行偶联,制备液相芯片,然后对影响反应的微球与抗原的反应时间,生物素化检测抗体的浓度及avidin-PE荧光染料的反应浓度等因素进行正交设计,确定出最优的反应条件;用该液相芯片反应体系检测55例临床样本,与ELISA试剂盒检测结果相比：在同样的样本浓度范围内,两者的检测结果基本一致,但液相芯片检测的浓度范围更大而且液相芯片可将多种肿瘤标记物在一个反应进行检测,节省检测的时间和人力。     

生长素的发现——科学史在探究式教学设计中的应用

生长素的发现过程前后历时数10年,由几代科学家通过一系列试验完成,这些试验集中了科学研究的一般方法,也体现了科学家发现问题、解决问题的清晰思路,是高中生物学教学中科学史教学的良好材料。本案例中选择了能体现科学研究过程的4个经典实验,经过合并加工,既完整地体现了科学研究过程与特点,又有助于课堂教学的开展和深入。在教学方法上,利用二手资料探究和教师讲授相结合的形式,引导学生经历科学探究的过程,领悟科学家研究的思路与方法。     

人蛋白酶体亚基PSMB1的重组表达、纯化及在蛋白酶体抑制剂体外筛选中的应用

蛋白酶体是真核细胞中的一类多亚基蛋白酶复合物,它在胞内蛋白质降解的泛素-蛋白酶体通路中起关键作用。重组表达蛋白酶体的活性亚基可以用于在体外筛选、寻找具有蛋白酶体抑制剂作用的化合物。将人蛋白酶体催化亚基(PSMB1)cDNA的编码区(全长726 bp)克隆至原核表达载体pET28a(+),构建重组质粒pET28a-PSMB1,转化大肠杆菌BL21(DE3),通过1 mmol/L IPTG,20℃过夜诱导,获得相对分子量约为27 kDa的重组蛋白,采用IMAC亲和层析柱纯化重组蛋白,纯化后的重组蛋白纯度超过95%。重组蛋白酶解后经NanoLC-MS/MS鉴定表明所表达的融合蛋白氨基酸序列完全正确。在体外BIAcore分析中,重组蛋白表现出对不同化合物的选择性结合能力,其中与蛋白酶体抑制剂雷公藤红素的结合较强,10μmol/L的雷公藤红素与重组蛋白的结合达到27 RU,并且具有良好的浓度依赖型。本研究建立了表达、纯化人蛋白酶体催化亚基PSMB1的方法,并应用于具有蛋白酶体抑制活性化合物的体外筛选。     

离子交换高效液体色谱法在氨基酸类药物分析中的应用——(一)前列腺肥大症治疗药prostall胶囊的分离测定

本文报导了采用离子交换高效液体色谱仪分离测定混合氨基酸制剂中单一氨基酸的方法,方法操作简便、快速、准确度高,较采用茚三酮比色法,萤光胺法灵敏度约高十倍。在计算含量上采用了外标法和内标法两种方法,实验证明,内标法操作简便,结果误差小,可用于常规分析。     

三种摇蚊幼虫RAPD扩增条件的优化及在昆虫系统发育分析中的应用

为了研究摇蚊科昆虫种群遗传的多样性,以促进对其资源的合理保护,以萨摩亚摇蚊Chironomus samoensisEdwards基因组DNA为模板,对摇蚊幼虫的RAPD扩增条件进行优化,建立了摇蚊幼虫RAPD扩增反应的最佳体系:按照利用优化的RAPD扩增条件进行研究,实验有着良好的重现性。用16个随机引物对3种摇蚊幼虫类群各10个个体进行RAPD扩增,其中萨摩亚摇蚊共扩增出78个条带,多态座位率为41.03%,Shannon遗传多样性指数为0.2570,群体内相似度为0.8730;红裸须摇蚊Propsilocerus akamusi(Tokunaga)共75个条带,多态座位率为44.0%,Shannon遗传多样性指数为0.2472,群体内相似度为0.8731;刺铗长足摇蚊Tanypus punctipennis(Fabricius)共67个条带,多态座位率为41.79%,Shannon遗传多样性指数为0.1943,群体内相似度为0.9066。聚类分析结果表明,刺铗长足摇蚊与红裸须摇蚊的亲缘关系较近。     

基因表达系列分析的原理、进展及在肿瘤研究中的应用

基因表达系列分析(SAGE)技术不仅能够全面地分析特定组织或细胞内表达的基因,还可以比较不同组织在不同时间、空间条件下基因表达的差异,从而发现新基因.SAGE技术在肿瘤研究中的应用发展很快.本文综述了SAGE技术的原理、应用及其近年来的发近几年展与演变.     

低温乳酸菌复合系的构建、培养条件优化及在玉米干秸杆微贮中的应用

[目的]研究筛选得到的低温乳酸菌复合菌系(LAC-1)的最佳培养条件及应用于玉米干秸杆微贮的效果.[方法]通过连续限制性培养的方法,以pH为指标进行低温乳酸菌复合系的筛选;利用单因素试验、Box-Benhnken试验设计和响应面的分析方法对低温乳酸菌复合系的培养条件进行优化.[结果]筛选获得培养液pH下降迅速、变化稳定及接种干玉米秸杆后可降低发酵体系pH、提高发酵饲料感官品质的低温乳酸菌复合菌系LAC-1.培养时间对LAC-1的pH降低速度影响最大,温度次之,接种量影响最小;响应面分析LAC-1最佳的培养条件为培养温度9.5℃、接种量3.3％和培养时间139 h.经过优化,LAC-1培养过程中pH下降到4.0的时间比优化前缩短48 h,乳酸菌数提高了20.5％.LAC-1接种于干玉米秸秆发酵5d时,秸秆发酵体系pH降至4.1;与对照相比,秸秆发酵饲料可散发出甜酸香味,外观质地松散、色泽鲜亮,可溶性碳水化合物含量降低了46.3％,霉菌、恶臭醋酸杆菌和酵母菌数量显著降低,乳酸菌数量提高了33.3％.[结论]接种LAC-1可促进干玉米秸秆低温微贮进程,提高饲料品质.     

混合氨基酸稀土配合物的研究(Ⅲ)——MAR在防治柑桔、棉花和蔬菜病害上的应用

MAR是多种氨基酸和混合稀土合成的、新的混合氨基酸稀土配合物。本文简要报导了它的急性毒性的初步试验结果及作为农药在防治柑桔、棉花、蔬菜等农作物病害,促进农作物生产、增加产量,改善品质方面的效果。MAR生产工艺简单,原料来源广泛,成本低,易形成工业化产品,有很好的经济效益。     

可移植性小鼠白血病(L615)的实验研究——Ⅴ.L615在筛选抗癌药物中的应用

L615小鼠白血病对各类抗肿瘤药物都有不同程度的敏感性,尤其对抗代谢类及烷化剂类药物更为敏感。对L1210自血病没有明显作用的马利兰,也有一定的疗效。因此,L615白血病模型为探索新的抗癌药物提供了一个有用的实验工具。 用L615筛选抗癌药物,除生存时间可作治疗指标外,脾脏大小、末梢血液中白细胞分类及白细胞总数也能作为疗效作用的指标。     

放线菌模块型聚酮合酶的系统发育组学分析及其在聚酮类化合物筛选中的应用

【目的】通过分析模块型聚酮合酶(polyketide synthase,PKS)的系统进化关系,阐明酮基合成酶(ketosynthase,KS)和酰基转移酶(acyltransferase,AT)序列与聚酮产物之间的关系,为放线菌天然产物的筛选提供指导。【方法】从PKSDB数据库的20个模块型PKS基因簇中调取所有KS(190个)和AT(195个)氨基酸序列,利用MEGA 4.0软件分别构建KS、AT、KS+AT 3种序列模式的系统发育树,并计算KS序列的簇内和簇间平均进化距离。设计了一对KS结构域的引物,通过PCR方法对20株活性放线菌分离菌株进行了筛选,测定了阳性菌株的KS序列,和已知的相关KS序列构建系统发育树,并对阳性菌株进行了发酵培养和代谢产物分析。【结果】放线菌来源的同一PKS的KS序列倾向于聚成一个进化枝,且按照其产物结构聚类;同一PKS的KS簇内平均进化距离小于0.300,不同PKS的KS簇间平均进化距离一般大于0.300。AT系统发育树按照其底物特异性聚成两个大的分枝;同一PKS的部分AT分别处于两个分枝,其余AT散在分布。KS+AT系统发育树则综合了KS树和AT树的拓扑结构特点。获得13株KS阳性分离菌株,它们的多数KS序列按照菌株分别聚类,其中4株菌的大部分KS各自聚成独特的簇,5株菌的大部分KS分别处在已知PKS进化枝内。从3株阳性菌中分离到预期的聚酮类产物。【结论】放线菌中KS的进化方式以垂直进化为主,而AT则以水平进化为主;KS序列与产物结构相关,且KS簇间平均进化距离可作为不同PKS的判定标准;相对于AT和KS+AT,KS系统发育组学分析更适用于指导放线菌聚酮类产物的筛选。