疱疹病毒gN基因及其编码蛋白的研究进展

gN蛋白是疱疹病毒gN基因编码的一种糖蛋白,其氨基酸组成的种类及数量在不同疱疹病毒中略有差异。目前已有研究表明gN蛋白定位于宿主细胞细胞质,主要分布于内质网区域。该蛋白在宿主细胞中与疱疹病毒gM蛋白形成复合物,参与病毒复制和细胞间感染过程,并对宿主细胞有免疫逃避作用。对疱疹病毒gN基因及其编码蛋白的特点和功能的总结,为进一步开展对疱疹病毒gN基因的深入研究提供一定的理论依据。     

脂筏在人类疱疹病毒6型装配中的作用

为了探讨脂筏在人类疱疹病毒6型(HHV-6)装配中的作用,用HHV-6 GS株感染HSB2细胞,用非离子去污剂Triton X-100提取脂筏成分,利用Western blot分析HHV-6包膜糖蛋白与脂筏的相关性.并用免疫荧光双标记的方法,从分子共定位的角度研究HHV-6糖蛋白B(gB)与GPI(glycosyl-phosphatidyl inosital)锚固蛋白CD59分子以及神经节苷脂GMI(monosialotetrahexosyl ganglioside)分子之间的表达与分布关系.结果发现HHV-6包膜糖蛋白B、H、L、Q1和Q2(gB、gH、gL、gQ1和gQ2)分布在脂筏部位.激光共聚焦显微镜可观察到CD59分子及GM1均与HHV-6包膜糖蛋白B有着相同的分布,即脂筏提供HHV-6装配的平台.关于脂筏在人类疱疹病毒6型装配中的作用,这是第一次报道.     

单纯疱疹病毒包膜糖蛋白的结构与功能研究进展

单纯疱疹病毒共有11种包膜糖蛋白,它们以不同形式在病毒进入宿主后发挥不同功能,本文对已发现的11种包膜糖蛋白结构与功能的研究进展进行了概述。     

疱疹病毒膜融合的分子机制

囊膜病毒与宿主细胞的膜融合是病毒入侵宿主细胞的重要过程,这一过程涉及到病毒囊膜表面糖蛋白与宿主细胞表面受体之间的相互作用和构象变化．疱疹病毒有多个糖蛋白及不同类型的细胞作用受体,相应的受体-糖蛋白复合体构成方式也有多种,其引致的膜融合机制被认为是目前病毒融合机制研究中最复杂的,近年来被广泛研究并取得突破性进展．从病毒糖蛋白与相应受体的结构与功能、受体-糖蛋白复合体的形成与入侵途径,以及膜融合模式几个方面,全面综述疱疹病毒膜融合的分子机制,并展望了未来研究趋势．     

疫苗

951642重组杆病毒表达的牛疱疹病毒一1糖蛋白g,的结构,功能和免疫学特性[英]/Van Dr’unen Lntel—van den Hurk,S.…,Virology.一1992,190【1).一378～392["译自DBA,1992,11(23),92·12976"] 用重组苜蓿银纹夜蛾核多角体病毒载体质粒pVLg B在草地夜蛾Sf 9细胞中高水平表达(36pg/10。细胞,感染后48～72小时)牛疱疹病毒一1(BHV一1)的主要糖蛋白复合物gI。重组gI的分子量为116,000,部分切割后,得到63kDa(glb)和52kDa(glc)亚基。在Sf 9细胞中加工步骤不如在MDBK细胞中充分,寡糖连接主要是内切糖苷酶一H敏感的连接,而在真正的gI中,则…     

激光佐剂辅助的肽疫苗促进皮肤树突细胞的转移并加强抵御疱疹病毒感染及疾病的保护性CD8+ TEM以及TRM细胞应答

针对诸如单纯疱疹病毒2(HSV-2)这类分布广泛并可感染全球大部分人口的病毒类病原体,人们一直迫切地需要无化学及生物成分的安全佐剂以加强疫苗的免疫原性。在此研究中,研究者考察了在生殖器疱疹B6小鼠模型中激光佐剂辅助肽(LAP)疫苗的安全性、免疫原性和保护性效力。LAP疫苗及其无激光肽(LFP)疫苗类似物均含有与各种糖蛋白D CD4^+辅助T细胞表位(HSV-gD 49-89 )共价连接的免疫显性HSV-2糖蛋白B CD8^+T细胞表位(HSV-gB 498-505)。在用LAP进行皮内投递之前,下部被剃的B6或CD11c/eYFP转基因小鼠首先接受5%咪喹莫特乳膏的局部处理,然后将其暴露于采用FDA认可的非烧蚀二极管的激光中持续60秒。     

人类疱疹病毒7型糖蛋白gB、gH、gL、gO介导细胞融合

人类疱疹病毒 7 型(HHV-7)的感染依赖于包膜糖蛋白在病毒生命周期的多个阶段发挥功能. 这些蛋白质可以介导病毒吸附,病毒包膜和宿主细胞膜融合以及病毒在细胞间的接触传播. 将表达 HHV-7 糖蛋白的 293T 细胞与 HHV-7 易感的SupT1 细胞共培养,检测虫荧光素酶报告基因的表达,以鉴定介导膜融合的 HHV-7 糖蛋白. 研究发现,HHV-7 糖蛋白 gB、gH、gL、gO 能介导 293T 细胞与 SupT1 细胞的融合,且融合可被抗 CD4 单抗所抑制. 结果表明,糖蛋白 gB、gH、gL、gO对于 HHV-7 引发的膜融合是必需的,其中某个蛋白质或所形成的蛋白质复合物可能是 CD4 的配体.     

单纯疱疹病毒包膜糖蛋白的结构及功能研究

包膜糖蛋白是病毒毒粒表面的抗原决定簇,是有包膜病毒表面脂质双层膜的重要成分。目前,已发现并正式命名的单纯疱疹病毒包膜糖蛋白共有12个,大部分具有重要功能。本文就单纯疱疹病毒I型包膜糖蛋白的结构和功能进行综述。     

疱疹病毒糖蛋白介导的与宿主细胞膜融合的分子机制

疱疹病毒是一种由双链DNA病毒组成的大家族,包括α-、β-和γ-三个亚科,其糖蛋白gB、gH和gL形成细胞融合的"核心融合机制"。有些疱疹病毒还需要其他糖蛋白(HSV的gD、EBV的gp42和HCMV的gO、UL128-131)的调节作用,促进细胞融合。而糖蛋白gM或gM/gN却对细胞融合具有抑制作用。本文对疱疹病毒糖蛋白介导的细胞融合机制进行阐述,为进一步研究病毒致病机理提供一定的理论依据。     

EB病毒侵入宿主细胞机制的研究进展

EB病毒(Epstein-barr virus,EBV),与多种人类疾病尤其是恶性肿瘤相关,包括单核细胞增多症、伯基特淋巴瘤和鼻咽癌等,其进入宿主细胞的机制仍是研究的热点。经过多年的研究,已经确定了EBV侵入宿主细胞时的部分关键蛋白以及不同的模式。病毒包膜糖蛋白gp350/220(EBV glycoprotein 350/220)与B淋巴细胞表面受体CR2(Complement Receptor type 2)的相互作用以及其他病毒糖蛋白如gp42(EBV glycoprotein 42)、gB(EBV glycoprotein B)、gH(EBV glycoprotein H)和gL(EBV glycoprotein L)的相互作用,使得EBV能够有效侵入B淋巴细胞。由于绝大多数上皮细胞缺少CR2受体,病毒侵入上皮细胞的机制要比侵入B淋巴细胞复杂得多。主要有三种EBV进入上皮细胞的模式:①EBV通过感染的B淋巴细胞或郎罕氏细胞直接接触上皮细胞,"转移感染"进入上皮细胞;②EBV利用自身的相关蛋白与宿主相应的受体蛋白相结合后,通过膜的融合或内吞作用,感染上皮细胞;③感染EBV的上皮细胞经基底膜将病毒颗粒传递给邻近的细胞。本篇综述将介绍近年来在EBV进入B淋巴细胞与上皮细胞的相关机制的研究进展。     

疱疹病毒α-亚科部份成员gC等同膜糖蛋白的同源性及进化

马疱疹病毒Ⅰ型属疱疹病毒α—亚科。本文分析了其膜糖蛋白g13基因的碱基序列,并由此推导其相应的氨基酸序列。同时利用电子计算机程序将g13与α—亚科的其它成员如伪狂犬病毒、水痘带状疱疹病毒和单纯疱疹病毒的相应膜糖蛋白进行比较,揭示了g13与伪狂犬病毒的g3、水痘带状疱疹病毒的gV和单纯疱疹病毒的gC同源,称为gC等同膜糖蛋白。这组膜糖蛋白都含有前导序列、跨膜疏水区域和天冬氨酸相关的糖基连结区。同时,这四种糖蛋白羟基端那一半的氨基酸序列高度保留,说明这一端具有重要的生物学功能;而氨基端那一半,除前导序列外,几乎找不出相似性。亚科中各病毒的寄主不同,各种糖蛋白在基因中的相应位置也不尽相同。同时,氨基酸序列的相似性较强,而碱基序列的相似性较弱。这一切表明,此亚科的病毒属同一起源而又经高度分化。     

溶瘤疱疹病毒表达的病毒融膜糖蛋白抗食管癌的实验研究

为了探讨溶瘤疱疹病毒表达病毒融膜糖蛋白对食管癌细胞的杀伤效果,采用基因酶切技术构建携带GALV．fus基因的致融性溶瘤疱疹病毒Synco-l和Synco-2以及非致融性溶瘤疱疹病毒Baco－1,通过体内外实验观察三种病毒对食管癌细胞Eca－109的杀伤效果。结果发现,Synco－1和Synco－2能引起食管癌细胞融合,有效地杀灭食管癌细胞。体外实验Synco－1和Synco－2能分别使Eca-109细胞存活率降低至28％和25％,体内实验能使实体肿瘤体积明显缩小,接种4周后,均能使小鼠70％的癌细胞完全消失,其杀伤食管癌细胞的效果明显强于非致融性溶瘤疱疹病毒Baco－1。实验结果提示,溶瘤疱疹病毒通过表达病毒融膜糖蛋白能显著增强其抗肿瘤效果,Synco－1和Synco－2有可能成为治疗食管癌的有效工具。     

II型单纯疱疹病毒糖蛋白D的晶体结构解析

II型单纯疱疹病毒 (HSV-2) 糖蛋白D (Glycoprotein D,gD) 在介导该病毒入侵到宿主细胞中起着关键作用。为了更好地研究gD在病毒侵入过程中的作用机制,利用杆状病毒表达系统表达了gD胞外部分区域 (1~285 aa),通过Ni-NTA亲和层析以及分子排阻层析纯化后,得到的带His标签的分泌型可溶蛋白,用悬滴法对该蛋白进行了晶体筛选,获得了高质量的晶体。晶体生长条件为0.1 mol/L Hepes缓冲液 (pH 7.2),5％ (V/V) 2-甲基-2,4-戊二醇 (MPD),10％     

我国单纯疱疹病毒I型168株糖蛋白D基因的克隆及其在痘苗病毒天坛…

将我国单纯疱疹病毒Ｉ型１６８株基因组ＤＮＡ中扩增出的糖蛋白Ｄ基因,插入痘苗病毒ｐ７．５启动子下游,使其在痘苗病毒天坛株表达,免疫荧光分析表明,产生的重组病毒糖蛋白Ｄ能被运到被重且病毒感染的１４３细胞表面表达,表达的产物经Ｗｅｓｔｅｎｂｌｏｔ鉴定为分子量约５０ｋＤ的多肽,Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ证明重组病毒基因组中整合有ＨＳＶ－１１６８株糖蛋白基因片段,重组病毒免疫家兔后,产生了高滴度的ＨＳＶ特异性     

单纯疱疹病毒特异性糖蛋白抗原的原核表达及纯化

原核表达并纯化单纯疱疹病毒特异性糖蛋白抗原,用于建立单纯疱疹病毒的临床检测方法。选择单纯疱疹病毒特异性糖蛋白型共同抗原gD以及型特异性抗原gGl(Ⅰ型)、gG2(Ⅱ型),合成PCR引物,分别扩增其DNA片段,插入原核表达载体pQE30,转化大肠杆菌M15,筛选高表达菌株,进行初步纯化鉴定。结果获得了表达菌株,对高表达的gD初步进行了包涵体的复性及纯化,为建立单纯疱疹病毒临床检测方法奠定了基础。     

Ⅰ型单纯疱疹病毒糖蛋白G基因片段的克隆表达及初步鉴定

通过计算机分析Ⅰ型单纯疱疹病毒糖蛋白G的氨基酸序列,筛选出HSV1gG蛋白中优势抗原决定簇位点,用PCR技术扩增克隆含强抗原决定簇较集中的基因片段。将该段基因克隆至质粒表达载体pGEX4T2内,转化大肠杆菌TG1,构建成功了高效表达Ⅰ型单纯疱疹病毒糖蛋白G基因的工程菌。用纯化的表达蛋白HSV1gGGST作抗原ELISA分析证实有较好的抗原性和特异性,显示可应用于单纯疱疹病毒感染的诊断 。     

狂犬病病毒糖蛋白表达及纯化及其记忆性B细胞结合能力的分析

表达纯化不同标签、不同大小3个狂犬病病毒糖蛋白,分析其结合功能后,得到具备高亲和力的、可特异性结合记忆性B细胞的狂犬病病毒糖蛋白。本实验通过基因工程的方法,采用不同的原核表达系统分别表达带有不同标签的、全长和膜外区的RVG,纯化蛋白并分析比较其结合功能,荧光标记候选蛋白,结合CD19及CD27的抗体,流式细胞术检测狂犬疫苗免疫后PBMCs中抗狂犬病病毒特异性记忆性B细胞的情况,确认候选蛋白与抗狂犬病毒特异性记忆性B细胞的结合功能。本实验成功构建了3个表达载体pGEX-5X-1-RVG、pET28a-RVG和pET30a-G,优化表达纯化条件成功获得了糖蛋白GST-RVG、His-RVG和His-G。纯化后的GST-RVG、His-RVG和His-G经Western blotting和ELISA鉴定均有抗原特异性;由竞争ELISA法测得3个纯化后糖蛋白与抗狂犬病病毒抗体的亲和力。通过流式细胞术可以检测到狂犬疫苗免疫后阳性志愿者PBMCs中的抗狂犬病病毒特异性记忆性B细胞,从而获得了高亲和力、可用于分选抗原特异性的记忆性B细胞的狂犬病病毒糖蛋白。     

人类免疫球蛋白超家族一个新成员:α-1B糖蛋白前体基因的克隆和分析

应用RACE方法,从人肝Marathon cDNA中克隆一1694bp的cDNA,其中开放阅读框架在43～1530bp,编码495个氨基酸,1～17氨基酸为信号肽,有4个IGc2结构域,与从人血浆分离的α-1B糖蛋白高度同源,是一个尚未克隆的α-1B糖蛋白前体基因,属于免疫球蛋白超家族的一个新成员,可能在细胞识别和细胞行为的调节方面起作用.     

人类免疫球蛋白超家族一个新成员：a—1B糖蛋白前体基因的克隆和分析

应用RACE方法,从人肝Marathon cDNA中克隆一1694bp的cDNA,其中开放阅读框架在43-1530bp,编码495个氨基酸,1～17氨基酸为信号肽,有4个IGc2结构域,与从人血浆分离的a-1B糖蛋白高度同源,是一个尚未克隆的a-1B糖蛋白前体基因,属于免疫球蛋白超家族的一个新成员,可能在细胞识别和细胞行为的调节方面起作用。     

B病毒感染及防治

B病毒（B virus）,国际病毒分类委员会将其称为猕猴疱疹病毒1型（Cercopithecine herpesvirus 1,CeHV-1）,拉丁文名为猴疱疹病毒（Herpesvirus simiae）,属于疱疹病毒科、α疱疹病毒亚科、单纯疱疹病毒属.在35种非人灵长类疱疹病毒中,只有B病毒对人有致病性.