胆碱摄取及磷酯酰胆碱合成的调节研究

本文研究了多种氨基酸、乙醇胺和甲基醇胺对细胞摄取胆碱和合成磷脂酰胆碱的影响,发现多种氨基酸非竞争性抑制细胞摄取胆碱。含胆碱代谢物的分析显示胆碱转变成ＣＤＰ－胆碱,随之形成ＰＣ均不受氨基酸影响。乙醇胺竞争性的抑制胆碱摄取,且存在剂量依赖关系。乙醇胺能明显抑制胆碱激酶活,但细胞内胆碱和磷酸胆碱的代谢池并不改变,提示乙醇胺不影响胆碱转变成磷酸胆碱,根据ＣＤＰ－胆碱和ＰＣ的比放射性分布,乙醇胺也不影响ＰＣ     

酿酒酵母生物合成胞磷胆碱的条件优化

通过优化胞磷胆碱底物浓度的发酵条件,提高酿酒酵母发酵菌浓及胞磷胆碱转化率.分别以胞苷酸、磷酸胆碱、硫酸镁和乙醇等底物和反应关联物质诱导酿酒酵母,采用单因素变量实验优化发酵条件.优化后,酿酒酵母C401菌株摇瓶培养的菌浓为70 g/L,胞磷胆碱转化率为53.3％,比诱导前提高了33.5％.30 L发酵中菌浓可达90.5 g/L,胞磷胆碱转化率为59％.     

土壤假单胞菌593使用Pcs途径合成磷酯酰胆碱

【目的】原核生物有两条代谢途径N-甲基化途径(Pmt途径)和磷脂酰胆碱合酶途径(Pcs途径)合成磷脂酰胆碱(PC)。本文对土壤细菌Pseudomonas sp.593的磷脂酰胆碱合成进行了研究,试图弄清楚假单胞菌的磷脂酰胆碱的合成途径。【方法】通过氨基酸序列比较,获得已报道的磷脂酰胆碱合酶(Pcs)的氨基酸保守序列,并设计简并引物,从Pseudomonas sp.593总DNA中PCR扩增出磷脂酰胆碱合酶基因(pcs)的片段,然后用扩增的DNA片段作探针,对Pseudomonas sp.593基因组DNA亚克隆文库进行菌落原位杂交,获得pcs全基因序列;利用同源重组原理进行活体突变,获得Pseudomonas sp.593 pcs-突变体;采用薄层层析(TLC)法分析细菌总磷脂,检测PC含量以及pcs基因活性。【结果】TLC分析显示Pseudomonas sp.593细菌仅在添加外源胆碱的M9或LB培养基中生长时才合成PC;从Pseudomonas sp.593细菌中克隆出894 bp的DNA序列,编码的蛋白具有磷脂酰胆碱合酶活性;活体缺失pcs基因后,Pseudomonas sp.593 pcs-突变体在添加或不添加胆碱的条件下都不能合成PC。【结论】Pcs途径是土壤Pseudomonas sp.593乃至其它假单胞菌合成磷脂酰胆碱的唯一途径。     

胆碱摄取及磷脂酰胆碱合成的调节研究

木文研究了多种氨基酸、乙醇胺和甲基乙醇胺对细胞摄取胆碱和合成磷脂酰胆碱（ＰＣ）的影响,发现多种氨基酸非竞争性地抑制细胞摄取胆碱。含胆碱代谢物的分析显示胆碱转变成ＣＤＰ－胆碱,随之形成ＰＣ均不受氨基酸影响。乙醇胺竞争性地抑制胆碱摄取,且存在剂量依赖关系。乙醇胺能明显抑制胆碱激酶活性,但细胞内胆碱和磷酸胆碱的代谢池并不改变,提示乙醇胺不影响胆碱转变成磷酸胆碱。根据ＣＤＰ－胆碱和ＰＣ的比放射性分布,乙醇胺也不影响ＰＣ的生物合成。甲基乙醇胺抑制胆碱摄入的程度强于乙醇胺,并抑制胆碱激酶和ＣＴＰ：磷酸胆碱胞苷转移酶活性,含胆碱代谢物以ＣＤＰ－胆碱下降最显著;提示甲基乙醇胺不仅抑制胆碱摄入而且还干扰了ＣＤＰ－胆碱通路。     

曲可芦丁联合胞磷胆碱对脑梗死患者认知功能的改善作用及机制

为了探讨曲克芦丁联合胞磷胆碱对脑梗死的治疗效果及机制,本研究将100例急性脑梗死患者分为对照组和观察组(n=50),对照组患者采用常规治疗,观察组在对照组治疗基础上加用曲克芦丁和胞磷胆碱。采用简易精神状态检查表(MMSE)对脑梗死患者的认知功能进行评价。将60只SD大鼠随机分为3组(n=20):假手术组、模型组和曲克芦丁+胞磷胆碱组。通过Morris水迷宫实验评价大鼠的认知功能。TTC染色评价大鼠脑梗死体积。Nissl染色评价大鼠海马区的组织形态。TUNEL染色评价大鼠海马细胞凋亡。Western blotting检查海马组织中TGF-β2、VEGF-A和CD34的蛋白表达。研究显示,治疗后观察组的MMSE总评分显著高于对照组(p0.05)。与模型组比较,曲克芦丁+胞磷胆碱组大鼠的逃避潜伏期显著降低,而穿越平台次数显著升高(p0.05)。与模型组相比,曲克芦丁+胞磷胆碱组大鼠的梗塞体积明显减少(p0.05)。与模型组相比,曲克芦丁+胞磷胆碱组的海马CA1区细胞凋亡率显著降低(p0.05)。与模型组相比,曲克芦丁+胞磷胆碱组的TGF-β2、VEGF-A和CD34的表达水平显著上调(p0.05)。本研究表明,曲克芦丁联合胞磷胆碱可有效改善脑梗死患者和动物模型的认知功能。2种药物组合的脑保护作用可能与减弱脑组织损伤、抑制神经元凋亡、促进血管生成有关。     

酵母生物合成胞苷二磷酸胆碱III．异常汉逊酵母SVI 311生物合成CDP胆碱的条件

对异常汉逊酵母(H．Anomala)SVI 311静息细胞由CMP和磷酸胆碱合成CDP-胆减的条件,包括反应物浓度、膜活性剂、温度和pH等进行了研究。考察了这些条件对CDP-胆碱生物合成各主要步骤的影响。     

酵母生物合成胞苷二磷酸胆碱 Ⅲ.异常汉逊酵母SVI 311生物合成CDP胆碱的条件

对异常汉逊酵母(H.anomala)SVI 311静息细胞由 CMP和磷酸胆碱合成 CDP- 胆碱的条件,包括反应物浓度、膜活性剂、温度和pH等进行了研究。考察了这些条件对CDP- 胆碱生物合成各主要步骤的影响。     

假单胞菌合成聚合物和复杂化合物的种类及机理研究进展

假单胞菌合成的代谢产物种类繁多。本文对假单胞菌合成的具有产业化前景或已实现产业化的藻酸盐、维生素B12、环状脂肽、吩嗪、单乙酰基间苯三酚、2,4-二乙酰基间苯三酚、鼠李糖脂以及聚羟基脂肪酸酯等六类复杂化合物或聚合物以及它们合成机制的研究进展进行综述,并就上述物质合成研究的发展方向进行展望。     

吡拉西坦联合胞磷胆碱对急性脑梗死认知功能和神经功能的影响

目的:研究吡拉西坦联合胞磷胆碱对急性脑梗死认知功能和神经功能的影响。方法:选择2014年1月～2018年1月我院的150例急性脑梗死患者,随机分为两组。对照组采用吡拉西坦治疗,观察组采用吡拉西坦联合胞磷胆碱治疗。采用神经功能缺损程度(National Institutes of Health Stroke Scale,NIHSS)、析蒙特利尔认知评估量表(Montreal cognitive assessment scale,Mo CA)和日常生活能力(Activities of daily living,ADL)评分量表,比较两组治疗前后神经功能、认识功能和日常生活能力变化。结果:观察组基本治愈15例,显效30例,有效26例,无效4例,恶化1例,总有效率为94.67%,明显高于对照组(P0.05);治疗后,两组的ADL和Mo CA评分明显升高,神经功能缺损量表(National Institutes of Health Stroke Scale,NHISS)评分明显降低,且观察组的ADL、Mo CA和NHISS评分明显优于对照组(均P0.05);治疗后,两组的血清细胞凋亡蛋白酶-3(cysteinyl aspartate specific proteinase-3,Caspase-3)和低氧诱导因子-1α(Hypoxia-inducible factor 1α,HIF-1α)水平均明显降低,且观察组明显低于对照组(均P0.05);对照组发生干呕1例(1.33%),恶心2例(2.67%),头痛1例(1.33%),头晕1例(1.33%);观察组发生干呕1例(1.33%),恶心1例(1.33%),头痛1例(1.33%),出血1例(1.33%);两组无明显差异(P0.05)。结论:吡拉西坦联合胞磷胆碱能改善急性脑梗死的认知功能和神经功能,其机制可能与调节细胞诱导因子Caspase-3和HIF-1α的表达水平相关。     

芽胞杆菌中重组蛋白分泌表达的优化策略及研究进展

芽胞杆菌属具有良好的蛋白表达和分泌能力,在工业酶的生产中被广泛应用,是理想的工业宿主菌,但实现蛋白分泌表达的普遍高效性还存在许多瓶颈。本文综述了芽胞杆菌的蛋白分泌表达策略,从启动子、信号肽、分泌途径、宿主和培养条件这5个方面总结了提高芽胞杆菌中分泌表达重组蛋白的方法,对芽胞杆菌高效生产工业酶有一定的参考价值,最后展望了优化芽胞杆菌分泌表达的研究方向,各种新型生物技术的发展必将推进芽胞杆菌在分泌表达领域有更深入的应用。     

固定化酵母生物合成胞二磷酸胆碱(CDPC)

对固定化酵母生物合成胞二磷酸胆碱反应液浓度进行了研究。通过几组实验,找到了反应液中底物的最佳浓度;磷酸胆碱75μmol/mL,胞苷酸（CMP）10μmol/mL,葡萄糖400μmol/mL,硫酸镁和硫酸锰分别为10μmol/mL和1μmol/mL。可以不使用还原剂。     

假单胞菌合成环脂肽转录调控的研究进展

假单胞菌所合成的环脂肽是一类由环状的寡肽连接一个脂肪酸链组成的两亲性分子,利用巯基化模块由非核糖体肽合成酶合成。环脂肽的生物合成受到严格、复杂的调控,GacS/GacA双组分系统和群体感应系统是其中两类重要的调控系统。本文总结假单胞菌合成环脂肽的调控机制及相关调控因子;对基于PCR的高通量分子筛选方法获取特定环脂肽进行分析,同时对基于调控机制的遗传改造提高假单胞菌产环脂肽的能力和获取更多新型环脂肽等方面的应用进行 展望。     

支链氨基酸合成调控机制及菌种选育策略研究进展

提高国内支链氨基酸产生菌的高产菌株选育水平有助于缩短与国外生产之间的差距,满足国内市场需求。根据支链氨基酸生物合成途径及代谢调节,重点阐述了合成过程中关键酶的代谢调控,介绍了诱变育种、代谢工程、基因组改组及全局转录机器工程四种育种策略的研究进展。在支链氨基酸选育方面,全局转录机器工程育种目前虽无成功实例,但具有很大的潜力,而其他育种策略在氨基酸的选育中均发挥重要作用,可供国内相关育种工作者参考使用。     

解淀粉芽孢杆菌高效合成胞苷的代谢调控机制及育种策略

胞苷是合成抗病毒、抗肿瘤药物的良好中间体,也是核苷酸类保健食品和功能性食品的重要原料。主要论述了解淀粉芽孢杆菌高效合成胞苷的代谢调控机制和构建胞苷高产菌株的育种策略。重点阐述了通过提高解淀粉芽孢杆菌嘧啶操纵子转录水平,增强胞苷合成代谢途径、阻断胞苷降解途径、增大磷酸戊糖途径向胞苷合成途径的分流量、提高胞苷合成前端代谢物PRPP的合成量、增强中心碳代谢流向胞苷合成途径、减少旁路代谢途径及促进胞苷的分泌等方法,选育出胞苷高产菌株,不仅为胞苷高产菌株的选育提供参考,也为解决目前胞苷工业化生产中存在的问题提供思路。     

渗透压对产甘油假丝酵母甘油合成与胞内磷积累的影响

研究了不同磷浓度时渗透压对产甘油假丝酵母甘油合成与胞内磷积累的影响。结果表明,不同磷含量时,产甘油假丝酵母甘油合成越多,分泌至胞外和积累于胞内的甘油也越多,其最大甘油合成量存在一个最适渗透压。同样;在相同渗透压下,其最大甘油合成量也存在一个最适磷浓度。在相同磷含量时,渗透压增高能够促进胞内聚磷酸盐积累;当渗透压相同时,培养基中磷含量增加,胞内游离磷和聚磷酸盐均增加。在生长稳定期后期,富磷可以促进胞内游离磷和聚磷酸盐积累显著增加。经分析发现,产甘油假丝酵母胞内积累甘油与聚磷酸盐,可能对克服对数生长期细胞数量少而渗透压胁迫大的困境发挥了极其重要的作用,从而能维持其生长稳定期较高的生物量、细胞存活率和甘油产量。     

脱氮除磷假单胞菌的筛选及定量检测

【目的】筛选具有较强脱氮除磷能力的细菌,建立结合S1酶保护分析的分子探针技术,以分析该菌在发酵过程中的数量变化情况。【方法】采用缺磷培养基厌氧培养、富磷培养基好氧培养和硝酸盐还原产气实验进行脱氮除磷菌筛选。通过16S rRNA基因序列分析及同源性比对,结合菌株的生理生化鉴定试验,鉴定筛选株。设计相应的16S rRNA探针组,建立结合S1酶保护分析的分子探针技术。【结果】筛选的菌株被鉴定为假单胞菌Pseudomonas sp.,命名为LY10。菌株LY10在富磷培养基中好氧培养24 h,总磷去除率达90.01%。在反硝化聚磷培养基中培养48 h,总氮和总磷去除率分别为84.71%和89.37%。针对假单胞菌16S rRNA基因序列设计了一组用于结合S1酶保护分析的分子探针Probe-P.sp,该探针具有很高的甄别灵敏度,能够将LY10与丛毛单胞属(Commonas)等5种细菌区分开;分子探针定量分析假单胞菌LY10,其细胞量与吸光值呈线性关系,检测的线性范围为103~106 cells/mL,线性方程为:y=-0.967 87+0.372 99x(R2=0.996 7,n=5)。【结论】新筛的假单胞菌LY10的脱氮除磷能力较强,具有生物脱氮除磷的工业化应用潜质。所建立的结合S1酶保护分析的分子探针技术的特异性和灵敏度良好,有望应用于混菌体系中的假单胞菌的定性定量分析。     

肺炎链球菌磷壁酸胆碱成分介导细菌的侵袭

分析肺炎链球菌细胞壁胆碱成分在其侵袭宿主细胞的过程中的作用。通过肺炎链球菌对人脐静脉内皮细胞的侵袭实验 ,观察血小板活化因子受体 (PAF R)拮抗剂BN 5 2 0 2 1对肺炎链球菌侵袭率的变化 ,以及乙醇胺取代细胞壁胆碱后肺炎链球菌侵袭率的变化。研究发现受体拮抗剂BN 5 2 0 2 1处理活化血管内皮细胞后 ,肺炎链球菌的侵袭率显著降低 (P <0 0 1 ) ,乙醇胺取代肺炎链球菌细胞壁成份中的胆碱同样降低了细菌对活化内皮细胞的侵袭 (P<0 0 1 )。实验表明肺炎链球菌可能是通过脂磷壁酸和磷壁酸的胆碱成分与内皮细胞表面的血小板活化因子受体结合来介导侵袭作用的     

限磷对产甘油假丝酵母甘油合成与胞内磷积累的影响

研究了磷酸盐限量对产甘油假丝酵母甘油合成与胞内磷积累的影响。结果表明, 当酵母细胞从适磷或富磷培养基转接入低磷培养基时, 发酵过程中胞内积累的磷逐渐减少; 而当菌体从低磷培养基转接入适磷或富磷培养基时, 发酵过程中胞内聚磷酸盐的积累量迅速增加。当细胞在第14小时和第38小时从适磷培养基转接入低磷培养基时甘油得率分别高达60.9%和61.4%, 而甘油产率则分别为2.03 g/(L·h)和2.23 g/(L·h)。这些现象说明限制发酵培养基中的磷浓度是产甘油假丝酵母高产甘油的必要条件, 并为其反复分批发酵法生产甘油提供了重要依据。     

胞外DNA的研究进展

胞外DNA(extracellular occurring DNA,eoDNA)是一种独立于细胞外的DNA,广泛存在于体液中。研究发现,eoDNA的浓度水平及其特异基因的改变能很好地反映疾病的发生和发展。随着生物技术的发展,eoDNA易获得、微创伤、预测早等优点引起了许多学者的关注,使得eoDNA成为非入侵疾病检测生物标记中的一颗新星。相对于健康人,肿瘤患者体内eoDNA浓度明显升高,这一特征已被研究者广泛验证,同时,研究还发现肿瘤患者eoDNA部分起源于肿瘤组织细胞,且这些DNA与肿瘤组织基因组有着相似的分子特征。这些研究成果为eoDNA取代肿瘤组织早期微创诊断肿瘤发生提供了理论基础。此外,在产检方面,从母体血浆中获取胎儿eoDNA并用以观察胎儿健康情况也日益得到学者关注。该文从eoDNA研究背景出发就其作为肿瘤诊断、预后以及产检生物标记的可能性及应用作一简单综述,并展望了eoDNA在临床疾病诊断的应用前景。