β-淀粉样蛋白对BV2小胶质细胞促炎作用的研究

目的探讨β-淀粉样蛋白(β-amyloid,Aβ)促进BV2小胶质细胞产生炎性因子IL-1β和TNFα的作用机制。方法体外培养BV2小胶质细胞,应用Aβ1-42作用于BV2小胶质细胞,或用吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(PDTC)预孵育再给予Aβ1-42刺激,实时荧光定量反转录聚合酶链反应法(RT–PCR)检测IL-1β和TNFαmRNA表达;免疫印迹法(Western blot)检测胞核中NF-κB p65及其抑制蛋白胞浆中IkBα的表达。结果 Aβ1-42作用于BV2小胶质细胞后,Westernblot显示胞浆内IkBα表达下降,胞核内NF-κB p65表达明显增加,RT-PCR测定IL-1β和TNFαmRNA的表达增加;给予NF-κB信号通路特异阻断剂PDTC后,胞浆IkBα的下降和胞核内NF-κB p65的增加均被抑制,同时IL-1β和TNFαmRNA的表达亦受到抑制,PDTC的抑制效果呈剂量依赖性。结论 Aβ可通过激活小胶质细胞NF-κB信号通路促进IL-1β和TNFα的表达。     

卵巢癌中HMGB1、BRCA1和p62蛋白的表达与其化疗敏感性的相关性

为了探讨卵巢癌中HMGB1、BRCA1和p62蛋白的表达与化疗敏感性的相关性,培养卵巢癌顺铂化疗耐药细胞ES-2和敏感细胞SKVO3,顺铂100 mg/m2环境培养5 d,分别采用Western blotting法和RT-PCR方法检测两种细胞中的HMGB1、BRCA1和p62蛋白表达情况,采用流式细胞术测算细胞凋亡率。敏感组细胞SKOV3和耐药组细胞ES-2中,BRCA1蛋白表达率分别为(38.08±22.56)%和(45.65±22.42)%,HMGB1蛋白表达率分别为(75.13±16.45)%和(83.08±24.22)%,p62蛋白表达率分别为(52.31±25.13)%和(37.26±21.09)%;顺铂处理后,敏感组SKOV3细胞中BRCA1蛋白表达量显著提高(p0.05),耐药组ES-2细胞中p62蛋白相对表达量高于敏感组SKOV3细胞(p0.01)。卵巢癌化疗后HMGB1下调与BRCA1、p62上调共存;卵巢癌中BRCA1蛋白的不同表达与化疗敏感性相关,其水平变化有可能作为一种新的肿瘤标志物,动态观察卵巢癌病情进展,为临床治疗提供客观指标。     

NF-κB和TNF-α在暴发性肝衰竭肝组织中的表达及其意义

目的探讨NF-κB,TNF-α与暴发性肝衰竭发生、发展的关系及其意义。方法雄性Wistar大鼠腹腔注射D-GalN＋LPS制造暴发性肝衰竭模型,采用免疫组化方法动态观察肝组织中NF-κB p65蛋白和TNF-α表达情况。结果①动态观察了暴发性肝衰竭病理变化过程。②模型组NF-κB p65蛋白表达阳性细胞主要为肝细胞、枯否细胞。造模后4h、8h、12h时核阳性表达的细胞数逐渐增多,明显高于对照组。2h组主要是非实质细胞的胞质着色。而4h、8h、12h、24h组以肝细胞胞核着色为主。对照组不同时间点NF-κB p65蛋白表达无明显差异（P〉0．05）。模型组则随着肝细胞坏死程度的增加而增加（r=0．694,P〈0．01）。③随着肝细胞炎症坏死程度的增加,模型组肝细胞质TNF-α表达逐渐增加（r=0．896,P〈0．01）,以肝细胞表达为主。对照组肝细胞质TNF-α表达较弱（P〉0．05）。④肝组织中NF-κB活化与TNF-α表达呈密切正相关（r=0．852,P〈0．01）。结论NF-κB和TNF-α参与了暴发性肝衰竭的发生发展。NF-κB可能是暴发性肝衰竭肝细胞炎症坏死过程中的关键环节。     

旋覆花内酯抑制血管平滑肌细胞炎性应答与阻断NF-kB活化有关

应用免疫细胞化学染色及Western印迹检测血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cells,VSMC）环加氧酶-2（cyclo—oxygenase-2,COX-2）表达、NF-kB抑制蛋白α（IkB-α）水平和NF—kB p65核转位的变化：电泳迁移率改变分析（electrophoretic mobility shift assay,EMSA）确定旋覆花内酯（1—o-acetylbritannilactone,ABL）对核内NF-kB p65与DNA调控元件的结合活性的影响。结果表明,脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）处理的VSMC,p65核转位加快,细胞核内的NF-kB p65水平快速升高,同时伴有IkB3—α的减少;用ABL预处理VSMC后,LPS诱导的p65核转位增加及IkB3—α减少受到明显抑制,抑制作用呈剂量依赖性。EMSA结果显示,LPS处理VSMC,其核蛋白与含有NF—kB结合位点的探针的结合活性升高;而用ABL预处理的VSMC,LPS诱导的核蛋白与探针结合活性的升高受到明显抑制。进而,ABL对NF—kB活化启动的下游炎性基因COX-2表达也具有较强的抑制效果。因此,ABL是一种抗炎物质,通过抑制NF—kB活化和炎性基因COX-2的表达而减弱或消除LPS诱导的VSMC炎症应答反应。     

红景天苷对脂多糖诱导小鼠巨噬细胞炎性介质分泌的影响

本文旨在探讨红景天苷(salidroside,Sal)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导小鼠巨噬细胞系J774.1炎性活化的影响及其可能机制。J774.1细胞分为PBS对照组、LPS(0.5μg/m L)刺激组和不同剂量(5、25、125μg/m L)Sal预处理+LPS组。CCK-8比色法检测细胞活性,ELISA测定培养上清中TNF-α、MCP-1和MIP-2含量,硝酸还原酶法测定上清中NO含量,RT-PCR检测细胞i NOS m RNA表达,Western blot检测胞浆i NOS蛋白和胞浆与胞核NF-κB/p65蛋白表达,Trans AMTM NF-κB/p65活性检测试剂盒测定NF-κB/p65 DNA结合活性。结果显示,0.5μg/m L LPS以及不同剂量(5、25、125μg/m L)Sal处理细胞12 h对J774.1细胞活力无影响;与LPS刺激组比较,LPS刺激前Sal预处理J774.1细胞,培养上清中TNF-α、MCP-1、MIP-2和NO含量呈剂量依赖性降低(P0.05),细胞i NOS m RNA和蛋白表达水平下调(P0.05),胞核NF-κB/p65蛋白表达降低(P0.05)而胞浆NF-κB/p65蛋白相应增加(P0.05),且NF-κB/p65 DNA结合活性呈剂量依赖性降低(P0.05)。以上结果提示,Sal预处理能够降低LPS诱导的巨噬细胞炎性活化,其机制可能通过干扰LPS/TLR4/NF-κB信号通路,从而降低炎性介质及细胞因子的过度表达和分泌。     

NF-κB、p53和bax在顺铂所致肾损伤中的作用

目的探讨NF-κB抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(PDTC)和顺铂治疗对Lewis肺癌小鼠肾脏组织中p53和bax表达的影响。方法给小鼠皮下接种Lewis肺癌细胞用顺铂和/或PDTC治疗,15 d后处死小鼠。取肾脏并制成切片,应用免疫组织化学技术检测p53和bax蛋白的表达。结果对照组和PDTC组小鼠肾脏未检测到p53和bax表达;顺铂治疗小鼠肾小管上皮细胞表达p53和bax;合用PDTC治疗组小鼠p53和表达水平较单用顺铂治疗组明显减低。结论合用PDTC下调顺铂诱导的p53和bax表达上调,减少肾细胞凋亡。     

马桑内酯对培养的大鼠海马星形胶质细胞的激活

实验研究了马桑内酯对纯化培养的大鼠海马星形胶质细胞的影响。发现：（1）免疫细胞化学染色证实马桑内酯作用2h可引起胶质细胞核内NF-кBp65的表达,8h达高峰,至24hNF-кBp65阳性胞核的百分率和平均光密度仍维持在高水平;预先用PDTC作用1h可完全抑制NF-кBp65的核表达,而TNFα单抗则可延迟NF-кBp65免疫反应阳性胞核出现的时间,阳性胞核百分率及其平均光密度也有所下降;（2）酶联免疫吸附实验发现马桑内酯可促进星形胶质细胞培养基内TNFα含量升高,PDTC可部分对抗此作用,本实验表明马桑内酯激活星形胶质细胞的作用部分是由TNFα介导的。     

卵巢癌中TGF-β/Smads信号通路的功能研究

为探讨卵巢癌细胞中TGF-β的信号传导情况及TGF-β／Smads信号通路各组分在卵巢癌发生中的作用,采用MTT和活细胞计数方法研究了TGF-β1对卵巢癌细胞系HO-8910、HO-8910PM及SKOV3的生长抑制作用;并应用RT-PCR、荧光免疫组化等方法研究了TGF-β／Smads传导通路中各组分的表达和定位以及TGF-β1刺激前后Smad7和P-Smad2定位及表达的变化。结果显示,TGF-β1对细胞系SKOV3没有生长抑制作用．而SK-OV3细胞表达了TGF-β／Smads信号通路中的所有已知成分。且3种卵巢癌细胞在TGF-β1刺激后Smad7mRNA瞬时表达增加,Smad7蛋白表达亦增加并由胞核转位到胞浆,P-Smad2由胞浆转位到胞核。结果表明TGF-β／Smads信号传导通路在卵巢癌细胞HO-8910、HO-8910PM和SKOV3中是完整的,SKOV3细胞逃逸TGF-β介导的生长抑制作用可能是由于TGF-β／Smads信号通路下游发生异常。     

Genistein增加顺铂诱导的SKOV-3细胞的凋亡与活性氧的关系

目的:探讨Genistein增加顺铂诱导的耐药卵巢癌细胞SKOV-3凋亡的可能作用机制.方法:倒置相差显微镜下观察药物处理后细胞形态学的变化;MTT比色法检测不同药物处理后对SKOV-3细胞增殖的影响;流式细胞仪检测药物处理后细胞的凋亡情况;流式细胞仪和荧光显微镜检测细胞内活性氧(ROS)的水平.结果:10ug/ml的Genistein和2.5ug/ml的顺铂联用24h后,引起了细胞内ROS的增加,细胞的凋亡率也显著增高,与单用顺铂组相比差异有显著性(P＜0.05);用NAC预处理细胞2h后,有效抑制了ROS的产生,并增加了细胞的活性,降低了细胞的凋亡率,与未加NAC组相比差异有显著性(P＜0.05).结论:Genistein增加顺铂诱导的耐药卵巢癌细胞SKOV一3的凋亡与细胞内ROS水平的升高有关,这可能是Genistein增加顺铂诱导的耐药卵巢癌细胞SKOV-3凋亡的作用机制之一.     

GDF15基因在卵巢上皮性癌组织中的表达及其临床意义

目的:探讨生长分化因子GDF15(Growth Differentiation Factor 15)基因在卵巢上皮性癌组织中的表达及其与铂类耐药的相关性。方法:应用免疫组化、western blot、RT-PCR等方法对80例原发性卵巢癌组织和卵巢癌顺铂敏感/耐药株A2780和CP70、SKOV3和SKOV3/DDP中生长分化因子GDF15表达水平进行测定。结果:生长分化因子GDF15的表达强度与卵巢癌铂类耐药性显著相关。在卵巢癌顺铂耐药株CP70、SKOV3/DDP中GDF15表达水平较顺铂敏感株A2780、SKOV3明显增高。结论:GDF15表达水平与卵巢癌发生发展及铂类耐药相关,对于卵巢癌患者早期筛选、预测预后具有一定的临床指导价值。     

Investigation of the mechanism of temperature sensitivity of the electroreceptors of ampullae of lorenzini

In experiments on Black Sea skates (Raja clavata), the potential of the receptor epithelium of the ampullae of Lorenzini and spike activity of single nerve fibers connected to them were investigated during electrical and temperature stimulation. Usually the potential within the canal was between 0 and –2 mV, and the input resistance of the ampulla 250–400 k. Heating of the region of the receptor epithelium was accompanied by a negative wave of potential, an increase in input resistance, and inhibition of spike activity. With worsening of the animal's condition the transepithelial potential became positive (up to +10 mV) but the input resistance of the ampulla during stimulation with a positive current was nonlinear in some cases: a regenerative spike of positive polarity appeared in the channel. During heating, the spike response was sometimes reversed in sign. It is suggested that fluctuations of the transepithelial potential and spike responses to temperature stimulation reflect changes in the potential difference on the basal membrane of the receptor cells, which is described by a relationship of the Nernst's or Goldman's equation type.I. P. Pavlov Institute of Physiology, Academy of Sciences of the USSR, Leningrad. I. M. Sechenov, Institute of Evolutionary Physiology and Biochemistry, Academy of Sciences of the USSR, Leningrad. Pacific Institute of Oceanology, Far Eastern Scientific Center, Academy of Sciences of the USSR, Vladivostok. Translated from Neirofiziologiya, Vol. 12, No. 1, pp. 67–74, January–February, 1980.     

Principles of organization and evolution of systems of regulation of functions

Evolution of living organisms is closely connected with evolution of structure of the system of regulations and its mechanisms. The functional ground of regulations is chemical signalization. As early as in unicellular organisms there is a set of signal mechanisms providing their life activity and orientation in space and time. Subsequent evolution of ways of chemical signalization followed the way of development of delivery pathways of chemical signal and development of mechanisms of its regulation. The mechanism of chemical regulation of the signal interaction is discussed by the example of the specialized system of transduction of signal from neuron to neuron, of effect of hormone on the epithelial cell and modulation of this effect. These mechanisms are considered as the most important ways of the fine and precise adaptation of chemical signalization underlying functioning of physiological systems and organs of the living organism