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从290个土样中分离到1380株细菌,加上本所其他课题组提供的细菌共1870株,其中有707株能分解淀粉,经过复筛、纸层析鉴定有3株菌的淀粉酶酶解液中主要产物是麦芽四糖,进一步用β-淀粉酶水解为麦芽糖,用萄葡糖淀粉酶水解为萄葡糖,确证为麦芽四糖。其中最优菌株为537.1,其酶解产物中麦芽四糖占90%,而其他两株菌的酶解产物中除麦芽四糖外,还有较多的麦芽糖及麦芽三糖,因此选择了537.1作为形成麦芽四糖淀粉酶的优良菌株,经鉴定,该菌属于产碱菌(Alcaligenessp.)。菌株537.1产酶的较好条件为t培养基中麦芽糖1.5%,蛋白胨0.5%,起始pH7—7.5,在27—28℃振荡培养48h。株537.1培养液可以酶解谷类、薯类和野生植物淀粉生成麦芽四糖。 相似文献
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麦芽四糖淀粉酶是一种新型外切淀粉酶,从淀粉的非还原末端特异地顺序切割第4个α-1,4糖苷键,产物为麦芽四糖,广泛应用于食品、医疗保健等领域.对来自嗜糖假单胞菌(Pseudomonas saccharophila)的麦芽四糖淀粉酶基因序列进行优化,优化前后基因序列同源性达75%.将优化合成的成熟肽基因克隆至原核表达载体pET32a(+)上,转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导,重组蛋白主要以包涵体形式存在.包涵体经变性、复性、多步纯化,获得有活性的麦芽四糖淀粉酶.将麦芽四糖淀粉酶与不同来源的淀粉水解反应,结果表明,该酶能与7种不同来源的淀粉反应产生单一的麦芽四糖.经SDS-PAGE电泳,DNS法和硅胶板薄层色谱分析法(TLC)进行酶学性质分析,结果表明麦芽四糖淀粉酶的分子量约为57kDa,纯化后的酶液最适反应温度为45℃,最适反应pH为8.0.研究结果为麦芽四糖淀粉酶的研究和开发提供依据和参考. 相似文献
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产碱菌麦芽四糖淀粉酶的纯化及性质 总被引:4,自引:0,他引:4
产碱菌(Alcaligenes sp.)537.1除去菌体的培养液经硫酸铵沉淀及DEAE-纤维素离子交换柱层析,得到了凝胶电泳均一的麦芽四糖淀粉酶。纯化了141倍,酶活力回收40.1%,比活力达3308U/mg。用浓度梯度PAGE和SDS—PAGE测定酶分子量分别为68000和66000,不具亚基。用PAG-1EF测定等电点为4.45。酶反应最适pH和温度分别为7.0和60C。在pH7—10范围内稳定,该酶半衰期为37C 12小时,50 C 1小时和62 C 6分钟。
麦芽四糖淀粉酶是糖蛋白,含有4%左右的糖,含有27.10%酸性氨基酸、11.08%碱性氨基酸和1.82%色氨酸。 相似文献
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一种新型淀粉酶的鉴定及其产酶菌株的筛选 总被引:14,自引:1,他引:14
对筛选到的菌株ZX99产生的一种新型淀粉酶(异麦芽低聚糖酶)进行了分析鉴定,ZX99菌株能产生一种胞外淀粉酶,该酶能催化淀粉的降解产生异麦芽低聚糖,对原产酶菌株ZX99多次进行紫外线照射诱变后,获得了优良,稳定的变异菌株RB3.232,其产酶水平为原株的160%,产物薄层层析证明,该酶能催化淀粉的降解,产生异麦芽糖,潘糖,异麦芽三糖和异麦芽四糖等低聚糖,但对普鲁兰基本不起作用,由此证明它是一种不同于新型普鲁兰酶(nepullulanase)和 传统淀粉酶(amylase)的一种新型淀粉酶。 相似文献
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产碱菌麦芽四糖淀粉酶的化学修饰 总被引:7,自引:0,他引:7
不同蛋白质侧链修饰剂对麦芽四糖淀粉酶进行修饰。在一定条件下,分别用IAA、NEM、EDC和NAI处理后,酶活力不受影响,仍为100%,说明巯基、羧基和酪氨酸残基与酶活力无关。用DEP、NBS和HNBB修饰后,酶活力大幅度下降,说明组氨酸和色氨酸基为酶活力所必需。 相似文献
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对筛选到的菌株ZX99产生的一种新型淀粉酶 (异麦芽低聚糖酶 )进行了分析鉴定。ZX99菌株能产生一种胞外淀粉酶 ,该酶能催化淀粉的降解产生异麦芽低聚糖。对原产酶菌株ZX99多次进行紫外线照射诱变后 ,获得了优良、稳定的变异菌株BS3.232 ,其产酶水平为原株的160 %。产物薄层层析证明 ,该酶能催化淀粉的降解 ,产生异麦芽糖、潘糖、异麦芽三糖和异麦芽四糖等低聚糖 ,但对普鲁兰基本不起作用 ,由此证明它是一种不同于新型普鲁兰酶 (neopullulanase)和传统淀粉酶 (amylase)的一种新型 相似文献
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用微量气相扩散方法在含酚的柠檬酸缓冲体系中,得到了可供X射线晶体学分析用的Al-(L-丙氨酸)胰岛素晶体,晶体衍射能力为2.5A。经X射线衍射分析确定,该晶体属于单斜晶系,空间群为P2_1,晶胞参数:a=61.5A,b=62.2A,c=48.3A,α=γ=90.0°,β=110.9°。晶胞中每个结晶学不对称单位含有一个Al-(L-丙氨酸)胰岛素六聚体。 相似文献
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α—淀粉酶基因表达中启动子上游区EcoRI—BclI片段的生理功能 总被引:1,自引:0,他引:1
本文从pAmy41和pNL201出发,构建一系列α-淀粉酶基因上游区EcoRi-BclII片段的人或部分缺失的质粒,并构建了pAmy41系列质粒pAmy41系列、pNL201系列双质粒工程菌,通过对这些工和力α-淀粉酶基因表达水平的分析显示,B.licheniformis α-淀粉酶基因上游区EcoRI-Bcll片段在α-淀粉酶基因表达中行使负的调控功能。 相似文献
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麦芽四糖淀粉酶(Maltotetraose amylase, Mta)可以从淀粉的非还原末端特异性依次切割第4个α-1,4糖苷键形成麦芽四糖,目前在食品、医疗保健和造纸等领域具有重要应用。构建安全、高效的表达系统强化麦芽四糖淀粉酶的重组表达,进而降低以其为核心酶的麦芽四糖生物转化过程的生产成本具有迫切的现实需求。本研究将源自Pseudomonas saccharophila(DSM 654)的麦芽四糖淀粉酶基因mta在枯草芽胞杆菌Bacillus subtilis中重组表达,利用麦芽糖诱导型启动子实现其安全高效表达,之后对重组酶进行分离纯化和酶学性质表征。结果显示,将携带麦芽糖诱导型启动子Pglv的表达载体转入B.subtilis WB800N中,成功构建工程菌后进行诱导表达,并且利用金属离子螯合层析技术成功获得了Mta纯酶。酶学性质研究结果显示其最适反应温度为55℃,最适反应pH为7.5。动力学常数Km为(1.26±0.17) g/L、kcat/Km为(2 275.07±32.83) L/s·g,... 相似文献
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嗜碱菌碱性淀粉酶的研究 总被引:4,自引:0,他引:4
分离自内蒙古自治区察汗淖碱湖的嗜碱菌株No.1 0-1,好气,运动,细胞杆状,革兰氏染色阴性。该菌生长pH范围为8.0—13.0,最适生长pH1 0.0-ll.0,为专性嗜碱菌。在含淀粉培养基中产生胞外碱性淀粉酶,最适产酶条件是: 碳源为土豆淀粉,氮源为复合蛋白胨,Nacl浓度为2.O%,Na2CO3浓度为1.0—1.5%(pH9.9-10.5)。 酶的最适反应pH为10.0,稳定pH8.0,最适反应温度为50℃。作用于直链淀粉其水解产物为β-构型,主要产物是麦芽糖,其次为麦芽三糖、葡萄糖和麦芽四糖。嗜碱菌No.10-1产生的酶为碱性β-淀粉酶。 相似文献
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用基因工程菌E.ColiAE109生产了青霉素G酰化酶,该酶经分离纯化后,摸索了晶体生长条件。用PEG8000作为沉淀剂以两种方法获得了晶体。晶体衍射能力超过2.0,初步晶体学研究显示晶胞参数a=52.19,b=69.35,c=73.90,α=68.80°,β=71.40°,γ=74.20°,空间群P1,收集了一套2.5分辨率的数据。 相似文献
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产碱菌麦芽四糖淀粉酶水解淀粉的特性 总被引:1,自引:0,他引:1
产碱菌麦芽四糖淀粉酶水解不同来源淀粉的产物组成有差异:G4占81.5%~98.8%,G_3占0%~9.6%,G_2占0%~5.9%。不同淀粉的水解速度在4170~9036mgGlch~-(1)·mg~(-1)之间。对可溶性淀粉的水解产物为6-型。麦芽四糖淀粉酶能被小麦、玉米及马铃薯的生淀粉吸附,其吸附率分别为60.2%、50.0%及52.2%,相对水解率分别为4.5%、2.7%及0%,水解生淀粉的主要产物为G_4。 相似文献
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巨大芽孢杆菌淀粉酶基因的克隆及其在枯草杆菌中的表达 总被引:4,自引:0,他引:4
以λ噬菌体为载体,采用鸟枪法由B.megaterium基因组克隆得到了1个淀粉酶基因,并已被亚克隆到E.coli和B.subtilis中,其表达水平较B.megaterium高250倍。克隆株产生的淀粉酶对直链淀粉的早期水解产物主要为麦芽三糖和麦芽糖,随着水解时间的延长,又将它们转变为葡萄糖。同时能以麦芽三糖为底物水解为麦芽糖和葡萄糖。受体菌的平行提取物无上述水解活性。因而该酶被确定为糖化型α-淀粉酶。SDS-凝胶电泳法确定酶分子量为58000道尔顿。 相似文献
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嗜热真菌Thermomyces lanuginosus热稳定α—淀粉酶的纯化及特性 总被引:2,自引:0,他引:2
嗜热真菌Thermomyces lanuginosus在液体培养基中于50℃静止培养14d,培养液经硫酸铵分级沉淀、DEAE-Toyopearl离子交换层析、Butyl-Toyopearl疏水层析、SephacrylS-300分子筛层析和FPLC MonoQ离子交换层析,得到了凝胶电泳均一的淀粉酶。纯酶与淀粉反应不同时间后,用碘色反应法和DNS法测定淀粉和还原糖量,结果显示淀粉量在开始时迅速下降, 相似文献
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从江浙蝮蛇中分离纯化的碱性磷脂酶A2在pH9.5,0.05mmol/L CHES缓冲液中,用汽相悬滴扩散的方法,获得了适用于高分辨率X射线结构分析的单晶。经X200B面探测器分析,表明该晶体属于正交晶系,P2I2I2I空间群,晶胞参数为a=97.13A,b=103.69A,c=23.27A。并收集了一套衍射数据,独立衍射点数12001个,数据完整度为86.2%,Rmerge为0.0459。最高分辨 相似文献