细胞培养过程对单克隆抗体糖基化修饰的影响和调控

在单克隆抗体药生产过程中,其糖基化修饰可能受到多种工艺参数的影响,因而容易产生异质性,并且抗体糖基化和抗体半衰期、免疫源性、ADCC、CDC等密切相关,所以单克隆抗体的糖基化修饰是重要的质量属性,需要在生物药尤其是生物类似药开发过程中重点关注,并加以调控。通过概述培养过程中的细胞株、培养工艺,以及培养基对糖型的影响,讨论如何在工艺开发过程开展研究,确保产品糖基化的一致性,从而保证单抗药物的疗效及安全性。     

细胞培养过程对单克隆抗体糖基化修饰的影响和调控

在单克隆抗体药生产过程中,其糖基化修饰可能受到多种工艺参数的影响,因而容易产生异质性,并且抗体糖基化和抗体半衰期、免疫源性、ADCC、CDC等密切相关,所以单克隆抗体的糖基化修饰是重要的质量属性,需要在生物药尤其是生物类似药开发过程中重点关注,并加以调控。通过概述培养过程中的细胞株、培养工艺,以及培养基对糖型的影响,讨论如何在工艺开发过程开展研究,确保产品糖基化的一致性,从而保证单抗药物的疗效及安全性。     

小鼠Kupffer细胞分离及细胞培养

目的 采用在体胶原酶灌注、不连续密度梯度离心、选择性贴壁3步法分离Kupffer细胞（Kupffer cells,KCs）,探讨其在分离小鼠KCs的应用及其对KCs生物活性的影响.方法 根据原位灌注和梯度离心方法不同随机分为4组：无胶原酶原位灌注＋3层梯度离心组（A）、无胶原酶原位灌注＋双层梯度离心组（B）、胶原酶原位灌注＋3层梯度离心组（C）和胶原酶原位灌注＋双层梯度离心组（D）.采用F4/80（BM8）免疫染色及吞墨实验判断细胞纯度和功能、台盼蓝拒染实验判断细胞的活力,探讨不同方法KCs分离的效果及细胞活性.结果 刚分离的KCs细胞近似圆形,接种l h后收获细胞纯度较高,但细胞得率相对较低.培养4 h后KCs得率相对较高,培养28 d仍能存活.免疫荧光可显示分离的为KCs,台盼蓝染色显示各组细胞的活力均在90 %左右,在体胶原酶灌注和双层梯度离心可以增加KCs的得率,双层梯度离心法可以增加分离KCs的纯度.结论 在体胶原酶灌注对提高KCs得率较为重要,在体胶原酶灌注、不连续密度梯度离心、选择性贴壁3步法分离小鼠KCs的的方法简便、高效、稳定,培养的KCs具有良好的细胞生物学性状.     

白豆杉细胞培养

紫杉醇是从短叶红豆杉〔Ｔａｘｕｓｂｒｅｖｉｆｏｌｉａ(Ｃｈｅｎｇ)Ｃｈｅｎｇ〕树皮中分离出来的二萜类生物碱[1],现已成为知名抗癌药物。紫杉醇主要来源于红豆杉属植物。白豆杉〔Ｐｓｅｕｄｏｔａｘｕｓｃｈｉｅｎｉｉ(Ｃｈｅｎｇ)Ｃｈｅｎｇ〕属红豆杉科白豆杉属,为...     

动物细胞培养及单克隆抗体

930909磁性处疆培鼍I|基促进杂交囊生长[英]/Pedraza,A.…/Biotechn01.Tech.一1992,6(4).一329'334~译自DBA,1992,11(17),92-09883] 小鼠杂交瘤细胞系CB-IFNA2.4产生抗重组干扰素-a-2b的IgGl单克隆抗俸(MAb)。将杂交窟培养在磁化RPMI-1640培养基中。培养基补加10％新生牛血清、2raM谷氨酰胺、0.4graM丙酮酸钠和40#g/ml庆大霉素。直径0.3cm的Tygon灭嚣管(总长75cm)外包永久性磁铁,使培养基以0.1和0.0002ml/秒的流量循环通过该管(1--,5次)使培养基磁化。磁场强度为0.02、0.05、0.09和O.1T。细胞子37℃下,处于静止生长期培养(10万…     

动物细胞培养及单克隆抗体

921758浦定苏云金芽抱杆菌的活生物t浓度〔俄〕/Mura-tov,V.S.…1 Mikrobiologiya一1901,60(3)。一546~551〔译自DBA,1091,10(21),91-12214〕 发展3一种用来测定苏云金芽抱杆菌(Ba成-Z妞。比。八:好e:就幻培养物细胞活力及优化培养基的方法。在复合培养基上培养该菌2个亚种de-“‘rol““5 49/7和K助,sta无￡Z一52。用苯胺蓝和荧光素染色,在荧光显微镜下检测细胞、抱子和晶体。在营养生长阶段,用两种染料所得结果相似,表明在此阶段基本无死细胞,在颗粒形成阶段,16~25%(菌株49/7)和10~25%(Z一52)的细胞无活力。还可测定此阶段(从颗粒中…     

动物细胞培养及单克隆抗体

923633抗人6一丙酮酸一四氢媒咤一合酶的单克隆抗体的产生及该酶的免疚细胞化学定位〔英万Guzman,J.…f Bioehem.Biophys。Res.Commun一2902,182(2)。一510~516〔译自DBA,1992,11(7),92一04039〕 经离体免疫接种制备了抗人垂体6一丙酮酞一四氢蝶咤一合酶(PTPs)的单抗(MAbs)。用一种直接由SDS一PAGE点印到聚偏二氟乙烯膜上的抗原刺激脾细胞5天,然后以2:1的比率在PEG 400中与X63一Ags/653骨髓瘤细胞融合,在HAT培养基中选择杂种细胞,并通过ELISA筛选能产生专性抗体的杂交瘤。获得的MAbs在ELIsA中不仅与人PTPS发生交叉反应,而…     

动物细胞培养及单克隆抗体

研究了利用遗传免疫（GI）生产人生长激素（hST）特异性单抗的情况。将质粒pLFhGH4的hST基因组序列     

动物细胞培养及单克隆抗体

923289限定培并基培并杂交瘤:替代血清及其它优点〔法〕/Bosehetti,E.…了Ann。Pharm。Fr一1901,遵9(4)。一198一205〔译自DBA,1992,11(5),92 02825〕 用3种杂交瘤细胞系ATCC HB4、ATCcHB72和ATCC HB8o检验有血清和无血清培养基培养细胞的功效。介绍了这3种细胞系的性成步骤。将市售的IMDM培养基(含7%胎牛血清)与Imoeell培养基(含抗生素)作比较。采用Faleon箱和细胞培养器,细胞密度为3000。个/ml。HB72和HB80在有血清培养基中生长更好,而HB4则在无血清培养基中生长更好。事实上,HB4的MAb生产变化不明显,而另外2细胞系还略…     

动物细胞培养及单克隆抗体

924039抗肺炎球菌英膜多糖4、8、22F和19A门gF型的鼠单克隆抗体〔英」/Kolberg,J.“·了APMIS一1092,100(i)一91~04〔译自DBA,1902,11 (8),92一04640〕 用12声923价的荚膜多糖肺炎球菌疫苗Pneu-movaxN皮下注射BALB/c下小鼠。33周后即融合前4天,动物得到6产g疫苗。或者用6声g疫苗经皮下注射免疫小鼠2次(间隔1周),44周后(融合前4夭),小鼠获得10声9 19F多糖。利用标谁的技术融合脾细胞和NSO骨髓瘤细胞,以23价疫苗为外壳抗原筛选第一次融合获得的杂种细胞上清液。用个别疫苗组分组成的小组进行了抗皿实验之后,选择出3种杂交瘤并克隆之…     

动物细胞培养及单克隆抗体

942224 在哺乳动物细胞中表达重组抗体并分泌碱性磷酸酶 [英3/Rather,A.!J.…/Appl.Microbi01. Biotechn01.一1994,40(6).-851～856E译自 DBA,1994,13(7),94—03868] 测试了表达重组抗体(rAb)的Sp2/0细胞系 F3blo和表达相同rAb(分离自同一质粒(BHK ·IgG))或分泌碱性磷酸酶(BHK·SEAP)的 BHK21细胞的生长和产率,该rAb含有小鼠IgGl 抗体可变区和人IgGl分子恒定区。F3blo细胞系 以单细胞悬浮方式生长,BHK细胞则以自然聚集 方式悬浮生长或固着在Gytodex-3微载体上。在 F3b10~~,细胞的~LrAb产率随着比生长率(u)的 提高而提高;…     

动物细胞培养及单克隆抗体

962115 对CD3-专性单克隆抗体进行PCR克隆和定序[英]/Thirion, S.…//Immunogenetics. -1995, 43(3).-167～168[译自DBA,1996,15(7),96-03879] 使被免疫小鼠的脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,获得了CD3-专性单克隆抗体。从总RNA开始,从产抗CD3抗体的杂交瘤中制备cDNA。分离了     

动物细胞培养及单克隆抗体

922321工业用动物细胞反应器系统:选择与评价〔英〕/Bliem,R.…1 Ad、.Bioehetn.Eng./Bio-teehnol一1991,连4一i一26[译自DBA,1992,11(3),92一01619] 从以下方面讨论了工业用动物细胞反应器系统的选择与评价:(1)细胞、反应器及操作的复杂程声,(2)培养器部件及操作性能;(3)增殖方式:批式或连续,(4)灌注和细胞定位;(石)过程中的限制因素及实际条件,(6)选择并开发反应器系统,(7)设计难点:流体动力学与细胞损伤、气泡造成的细胞损伤、充氧问题(氧摄取率、喷入气体及无气泡充氧);(8)评价的范围;(9)所需的标准检测细胞系;(10)前景展望。人们最…     

动物细胞培养及单克隆抗体

920533以柠檬酸铁替代转铁蛋白的无蛋白培养基培养鼠-鼠杂交瘤〔英〕/Eto,N一了Agric.Biol.Chem一1901,55(3)一563一865〔译自DBA,1991,10(12),91一07039〕 于37“C、通入湿润5%CO:/95%空气条件下,将鼠杂交瘤IA一4细胞保存在补加10产g/ml胰岛素(I)、35拜g/ml人转铁蛋白(T)、10拼M乙醇胺(E)和2.snM硒(S)(ITES)的DF培养基中。试验了各种低分子量含铁化合物对培养于ES一DF培养基中的IA一4细胞的生长刺激作用。柠檬酸铁的作用最大,与转铁蛋白相当。柠檬酸铁钱的作用也很大;硫酸亚铁和硫酸高铁的作用较小。硫酸铁钱几乎无作用,氯化…     

动物细胞培养及单克隆抗体

921346开发新的无蛋白无激紊培养基培养杂交容〔英叮Toyoda一K。…了Agrie.Biol.C丘em一1991,55(6)一1631~1633[译自DBA,1091,10Qs),91一10670二 配制一种新型不含蛋白和激素的培养基PHF,用以大规模培养小鼠和人杂交瘤。杂交瘤有IgGI小鼠一小鼠杂交瘤AZ(融合配偶体:x63.653,专性抗原:a一胎蛋白)、C7(NS~1,癌胚抗原)17(NS一i,IgE),以及IgM人一人杂交瘤HB4C6 (NAT一30,肺癌)。最佳培养基是在E一RDF(Kyokuto Seiyaku Kogyo,日本)基本组分中添加50声M柠檬酸铁、0.5产M亚油酸、10产M牛磺酸、10。井M乙醇胺和25nM亚硒酸盐。用P…     

动物细胞培养及单克隆抗体

922508 搅拌生物反应器中杂交瘤细胞对流体动力剪切的生物学反应[英]/Abu-Reesh,Ⅰ.…∥EnzymeMierob.Technol.-1991,13(11).-913～919[译自DBA,1991,10(25),91-14978] 小鼠-小鼠杂交瘤HDP-1产生抗2,4-二硝基苯的IgG单克隆抗体(MAb)。在37℃下将其培养在装有浆状叶轮的连续搅拌槽培养器(250ml摇瓶)中。研究了搅拌速度(100～400rpm)、稀释     

动物细胞培养及单克隆抗体

931658氧对悬浮培井的草地夜蛾细胞产生重组蛋白的影响亡英]/Scott,R.I.…I Enzymc Microb.Techn01.-1992,14(10).-798N804[译自DBA,1992,11(23),92—132033 草地夜蛾(Spodoptera frugiperda)Sf9细胞生长在250mi、装有SF900无血清培养基的旋转瓶中。最大细胞密度取决于通气率。4升的搅拌槽培养器和80rpm搅拌旋转瓶中的非侵染细胞密度最大,培养器的溶解氧控制在20％空气饱和度。用含编码丙型肝炎病毒核·Lq~IINS 5区域基因的杆病毒侵染细胞,进行各种多重感染。重组蛋白的表达时间及最大表达水平取决于侵染的多重性、侵染时的细胞密度…     

动物细胞培养及单克隆抗体

950546通过倾斜沉积悬浮培井中■仓一卵巢细胞[会,j英]’/Searles,J.A.…/Abstr.Pap.-A耐j;Chem.Soc.一1992。203Meet,Pt.1.一BIOT|『l;[译自DBA,1992,11(15),92—08726]、 通常提高动物细胞培养密度的方法是将剪切掣’感细胞暴露于高剪切力环境中,使死细胞和活细胞循环,并增加     

动物细胞培养及单克隆抗体

94一01025] 用3种血清添加培养基定量了草地夜蛾 (spodbpter口,rugiperda)Sf9细胞和顶灯蛾 (Estigme％e口ctea)BTI—EAA细胞摇瓶培养 物的生长、营养素消耗和终产物累积。计算了培养 基中大多数被分析成份的单细胞消耗率和产率。 TNM—FHJ音养基中的葡萄糖限制生长,但它是全 部培养物重要的有机碳唯一来源。ol一酮戊二酸和 苹果酸对TNM—FH中细胞的碳累积有重要意义。 细胞生长时一般不累积乳酸。细胞消耗大多数氨基 酸,但产生丙氨酸。应充分供应大多数氨基酸,谷 氦酸消耗最快,其次是谷氨酰胺。丙氨酸累积与葡 萄糖消耗相关。 (王颖…