高压灭菌对培养基成分的影响

综述了高压蒸汽消毒对培养基无机盐,碳水化合物,氨基酸、渗压剂、植物激素和培养基渗透压、ｐＨ值的影响,就如何缩小高压蒸汽消毒对培养基成分的影响,提出了一些建议。     

不同质的试管塞对高压蒸气灭菌影响的研究

不同质的试管塞对高压蒸气灭菌影响的研究大连市第四医院大连１１６０３１周国华,于伯玲,姜忠云,于秀顺最早的试管塞始于棉塞,后来有人采用软木塞、胶塞,近年来又有厂家生产塑料塞、海绵塞等。我们对五种不同质的试管塞对高压蒸气灭菌的影响进行了研究。１．材料与方...     

胰蛋白酶消化强度优化获得高纯度体外培养的星形胶质细胞

本文旨在观察胰蛋白酶消化对体外培养的星形胶质细胞纯度的影响,优化星形胶质细胞培养方法。常规分离新生Sprague Dawley(SD)大鼠大脑皮质,分别用0.25%胰蛋白酶消化20、30和40 min制备单细胞悬液并接种细胞。细胞长满瓶底时进行恒温摇床振荡,前两个不同消化时间组再分为常规消化的对照组和二次胰蛋白酶消化组进行传代纯化。倒置相差显微镜观察细胞生长情况,MTT法检测细胞增殖,GFAP免疫荧光分析星形胶质细胞纯度并观察其形态,流式细胞术分析细胞凋亡。结果显示,胰蛋白酶消化20 min的细胞在原代培养9 d长满瓶底。而延长胰蛋白酶消化时间至30 min,细胞增殖更快,培养7 d即可铺满瓶底,且星形胶质细胞形态正常,纯度达(70.2±4.0)%,较20 min组有显著性提高(P0.05)。40 min组虽然星形胶质细胞纯度也较20 min组有所提高,但细胞增殖缓慢且损伤明显。在恒温摇床振荡结束后,进行二次胰蛋白酶消化可减少传代后杂细胞数量。二次胰蛋白酶消化组第一代(P1)的GFAP阳性率普遍高于各自对照组,其中30 min+二次胰蛋白酶消化组GFAP阳性率为(98.1±1.7)%,相当于20 min+对照组P3水平,且二者的凋亡率无显著性差异。以上结果表明,胰蛋白酶消化30 min+二次消化能有效提高星形胶质细胞纯度,缩短原代培养及纯化时间,是体外快速获得高纯度星形胶质细胞的有效方法。     

高压蒸汽灭菌对钛合金内植入物的疲劳的影响

分析了制约骨折手术成功的因素,一是钛合金内植人物经受长期反复高压蒸汽灭菌造成材料疲劳引起断裂;二是AO手术的引起应力集中和疲劳断裂。提出了发展骨内固定植入物的建议。     

高温灭菌操作中常见错误的分析

高温灭菌是指用热能杀死微生物。其原理是高温使原生质中的蛋白质变性、使酶失活,致使微生物死亡。高温灭菌主要有高压蒸汽灭菌法、干热灭菌法和灼烧灭菌法几种。如果操作不当,即达不到预期的灭菌效果。现就常见错误分析如下。1高压蒸汽灭菌蒸汽灭菌属湿热灭菌,由于湿热灭菌有潜能存在,被灭菌物体的温度比蒸汽的低,蒸汽在其表面凝结成水,放出潜能,可迅速提高被灭菌物体的温度。又由于水和水蒸汽比空气的热容量大、导热快、穿透力强,所以,与干热灭菌相比,灭菌需要的温度低、时间短。由于高压蒸汽灭菌法水蒸汽的温度随其所受压力的…     

高压电场灭菌效果研究

本文以乳酸杆菌、枯草杆菌及酵母菌为研究对象,研究了高压交流电场作用对它们的致死率影响及细胞结构的变化。实验表明：在22．5kv／cm的场强下处理ls能导致乳酸杆菌活菌数降低近6个数量级,通过显微摄影可明显观察到枯草杆菌细胞结构的破裂和酵母细胞的死亡。     

反胶束萃取胰蛋白酶的研究

本文以含有反胶束的有机溶剂作为萃取剂,进行了将胰蛋白酶从水相传入有机相,再从有机相传入另一水相的研究。结果表明：影响萃取率的主要因素为水相ｐＨ值、离子强度和种类,以及反胶束溶液中表面活性剂浓度等;在适宜的条件下,酶的单级萃取和反萃取率都很高,显示了良好的工业应用前景。     

灭菌生物指示剂的研究及在灭菌监测中的应用

本文论述有关生物指示剂的历史概况，在灭菌监测中，与物理、化学指示方法比较，生物指示剂的作用与地位。在生物制品、医院、食品行业等领域，生物指示剂的应用越来越受到人们的重视，并产生了良好的效果。本文论述了灭菌监测及生物指示剂的应用，与医院的感染的关系。美国药典（ＵＳＰ）和中国卫生部与也专门规定了生物指示剂的标准，应用及有关规定。在应用时，菌株的选择和具体方法尤为受人关注，本文列出有关应用中须注意的问题     

Trypsin inhibitors in plants

Trypsin inhibitors were found in several food plants. Potato and sweet corn were the most inhibitory, while fruits had negligible activity. Intermediate in activity were sweet potato, spinach, broccoli, Brussels sprouts and cucumber. The trypsin inhibitor of sweet corn was isolated by extraction in dilute salt solution, ammonium sulfate fractionation, chromatography with Sephadex G75 and CM-cellulose and lyophilization. Two components were demonstrated by disc gel electrophoresis. The inhibitor was heat stable. It had little inhibitory activity against papain but was moderately active against chymotrypsin.     

刺桐胰蛋白酶抑制剂亲和填料的制备及纯化瑞替普酶

刺桐属胰蛋白酶抑制剂(ETI)是一种丝氨酸蛋白酶抑制剂,能特异性的抑制胰蛋白酶、组织纤溶酶原激活剂(tPA)、瑞替普酶(rPA)等丝氨酸蛋白酶。实验利用ETI工程菌,经诱导表达、体外复性及纯化获得ETI蛋白,并将该蛋白键合到CNBr活化的琼脂糖凝胶,制备ETI亲和填料,纯化瑞替普酶 。     

固定化胰蛋白酶亲和层析法制备低STI残存大豆分离蛋白质

聚苯乙烯阴离子交换树脂(GM201)经预处理除去杂质后先与戊二醛(2—6％)反应,再与胰蛋白酶(5000u/mg,8—10mg/mL,pH 8.0)反应即制得固定化胰蛋白酶。此法得到的固定化胰蛋白酶具有良好的热稳定性,贮藏稳定性和操作稳定性,可用于工业化目的。脱脂豆粉经萃取(PH9.0)后,稀释4倍,在pH5.0下沉淀分离出大豆球蛋白,然后用酸性水(pH5.0)洗涤两次,并进行碱溶与酸沉淀两次,即可将大豆分离蛋白质的STI残留降低到1.85％,比活性降到1u/mg以下。最后再用固定化胰蛋白酶亲和层析,就可以除去大豆分离蛋白质中残留的STI。     

β-Propriolactone Sterilization of Commercial Trypsin

A method for sterilizing commercial 1:250 trypsin was investigated.     

Trypsin inhibition by a peptide hormone: crystal structure of trypsin-vasopressin complex

The large variety of serine protease inhibitors, available from various sources such as tissues, microorganisms, plants, etc., play an important role in regulating the proteolytic enzymes. The analysis of protease-inhibitor complexes helps in understanding the mechanism of action, as well as in designing inhibitors. Vasopressin, an anti-diuretic nonapeptide hormone, is found to be an effective inhibitor of trypsin, with a K(i) value of 5 nM. The crystal structure of the trypsin-vasopressin complex revealed that vasopressin fulfils all the important interactions for an inhibitor, without any break in the scissile peptide bond. The cyclic nature due to a disulfide bridge between Cys1 and Cys6 of vasopressin provides structural rigidity to the peptide hormone. The trypsin-binding site is located at the C terminus, while the neurophysin-binding site is at the N terminus of vasopressin. This study will assist in designing new peptide inhibitors. This study suggests that vasopressin inhibition of trypsin may have unexplored biological implications.     

以壳聚糖为载体亲和层析胰蛋白酶

用活化的壳聚糖为载体,鸡卵粘蛋白(CHOM)为配基,制备了胰蛋白酶的亲和吸附剂。采用该吸附剂亲和层析胰酶,所得产物经SDS-PAGE电泳检测,带中只有一条带颜色较深,且与标准胰蛋白酶带位置几乎相同。实验结果表明1 g壳聚糖可以固定60 mg鸡卵粘蛋白,制成的亲和吸附剂可吸附胰蛋白酶的最大量为118 U/g。以壳聚糖为载体的亲和吸附剂制备过程简单、安全。     

猪胰蛋白酶自溶活性产物—绿豆胰蛋白酶抑制剂复合物的初步晶体学研究

本文报道了猪胰蛋白酶自溶活性产物——绿豆胰蛋白酶抑制剂复合物的晶体生长及晶体学参数的测定。晶体衍射分辨率为2.8A,四方晶系,空间群I422,晶胞参数为a=b=121.6A,c=113.6A,V=1.680×10~6A~3,每个结晶学不对称单位中含一个复合物分子。     

表面电荷突变与胰蛋白酶底物专一性的改造

分别利用酶切重组和“３＋１”引物ＰＣＲ定点突变的方法构建了三个胰蛋白酶表面电荷双突变体：Ｒ６２Ｄ＋Ｋ９７Ｅ、Ｒ６２Ｄ＋Ｋ１７５Ｅ和Ｋ９７Ｅ＋Ｋ１７５Ｅ．对三者在Ｅ．ｃｏｌｉＸ－９０菌中的表达产物进行了动力学测定,分别得到了三种双突变体在两种ｐＨ条件下,水解ＴＡＭＥ、ＴＬＭＥ两种底物的动力学数据．结果表明,Ｒ６２Ｄ＋Ｋ１７５Ｅ和Ｋ９７Ｅ＋Ｋ１７５Ｅ在ｐＨ６．８５时,对两种底物的催化活性与野生型相比下降了２～３个数量级,当ｐＨ升高至８．８５时,它们的活性基本丧失;双突变体Ｒ６２Ｄ＋Ｋ９７Ｅ虽然催化活性也有所降低,但随着ｐＨ的升高,它对Ｌｙｓ底物的特异性（选择性系数２５倍于Ａｒｇ底物）转变为对Ａｒｇ底物略高的特异性,基本符合分子设计．实验结果还表明,各种双突变体催化活性的降低主要是由于酶和底物的亲和力降低引起的．     

固定化胰蛋白酶活力的测定方法探讨

对自制的固定化胰蛋白酶(Immobilization Trypsin,ITP)分别经过冷冻干燥、真空干燥后定量测定其酶活力,与由湿态直接定量法(DQA)测定的活力进行比较。试验表明,直接定量方法测定的酶活力比前两者高,而且操作简单。     

Effect of Sterilization by Dry Heat or Autoclaving on Bacterial Penetration through Berea Sandstone

A study was undertaken to determine why bacteria could penetrate lengths of consolidated sandstone (Berea) faster when the sandstone was sterilized by autoclaving than when dry heat (150°C, 3 h) was used. Changes in permeability, porosity, and pore entrance size of the rock as a result of autoclaving were not sufficient to explain the differences in penetration times observed, but electron dispersion spectroscopy and electron microscopy of the rock revealed changes in mineral composition and clay morphology. Autoclaved cores contained more chloride than dry-heated cores, and the clays of autoclaved cores were aggregated and irregularly shaped. Therefore, the decreases in bacterial penetration rates caused by autoclave sterilization were probably the result of a change in surface charge of the pores of the rock and of a reduction in surface area of clays available for adhesion. The results implied that dry-heat sterilization was preferable to autoclaving when examining biotic and abiotic interactions in a native-state rock model.