抗CMV的重组番茄

日本烟草产业遗传育种研究所利用基因操作培育出抗黄瓜花叶病毒(CMV)的番茄。导入病毒外壳蛋白基因从而对CMV有抗性的番茄曾由美国Monsanto公司、农林水产省生物资源研究所,武田药品和坂田种子等公司开发过。但是通过导入卫星RNA使重组番茄表现CMV抗性这还是第一次。在申请专利方面与Monsanto公司重组番茄的专利不冲突。CMV的感染可诱导卫星RNA的扩增,使植株产生CMV耐性。这种植株体内的卫星RNA拷贝数并不多。因此,估计能作为杂交种子的亲本使用。实用性极高。番茄在日本的栽培面积约15000万公顷。其中10％发生花叶病。估计大部分是CMV。目前没有什么消     

基因重组植物的非封闭式实验

筑波大学生物科学系教授原田宏实、助教授兼田博等向文部省申请导入卡那霉素抗性基因(km~(?))的烟草和导入rolc的颠茄的非封闭式实验。在10月下旬的学术审议会重组DNA专门委员会安全审查会上审议。如通过审查,将成为文部省首例非封闭式重组植物实验的第一号。各种基因连接在非特异表达的花椰菜花叶病毒(CaMV)的35S启动子的下游。km~(?)作为重组烟草的典型标记导入。rolc来自Ri质粒,一旦导入颠茄,就会增加花的数量,延长开花期。     

将水稻壳质酶基因导入烟草确认抗白粉病特性

农林水产省的农业生物资源研究所规划调整部规划科科长日比忠明和该研究所机能开发部微生物机能利用研究室西泽洋子等将从水稻分离的壳质酶基因导入烟草,烟草就获得白粉病抗性。打算明年开始封闭式温室实验。     

抗菌肽B基因导入水稻及转基因植株的鉴定

构建了一个适合在水稻中表达的含有抗菌肽B基因的转化载体(pCB1),应用基因枪转化法将其导入水稻未成熟胚,获得了一些转基因水和植株.Basta抗性鉴定,抗菌肽B基因PCR扩增分析,点渍印迹和Southern印迹分析结果表明,选择标记基因(bar)和抗菌肽B基因都已整合入转化水稻基因组中,Northern印迹分析证实了抗菌肽B基因在RNA水平上的表达.转基因水稻植株增强了对水稻白叶枯病和细条病的抗性.     

中国樱桃品种"对樱"再生体系的优化和转基因初探

优化了中国樱桃品种"对樱"不定根离体再生体系,用农杆菌介导法,将抗菌肽B基因导入"对樱",通过抗性筛选获得了44株抗性转化植株.PCR检测有9株为阳性,初步说明抗菌肽基因已整合到"对樱"基因组中.     

pagP基因对禽致病性大肠杆菌抗菌肽抗性和致病性的影响

【目的】禽致病性大肠杆菌(Avian pathogenic Escherichia coli,APEC)不仅严重影响全球的养禽业,对人类公共健康也造成巨大的潜在威胁。pag P基因在细菌的抗菌肽抗性和致病性方面发挥重要作用,但关于pag P基因在APEC中的功能尚不清楚。本文构建禽致病性大肠杆菌pag P基因缺失株,对缺失株的抗菌肽抗性和致病性进行研究。【方法】利用Red重组系统构建APEC的pag P基因缺失株,然后利用回复质粒构建回复株。研究pag P基因对细胞黏附与入侵、生物被膜形成能力、外膜渗透性、抗菌肽敏感性、致病性等方面的影响。【结果】成功构建pag P基因缺失株和回复株,抗菌肽抗性试验发现pag P基因缺失株对多粘菌素B、鸡β-防御素2(AVBD2)的敏感性显著增加(P0.01),致病性试验结果表明pag P基因缺失株的毒力显著降低(P0.01)。【结论】APEC的pag P基因对AVBD2的敏感性和APEC的致病性密切相关,为深入研究pag P基因的功能及调控作用奠定了基础。     

烟草花叶病毒外壳蛋白嵌合基因的重组(简报)

烟草花叶病在云南烟区普遍流行。通过ELISA和RNA斑点杂交法,我们已证明云南烟区烟草花叶病毒外壳蛋白和已知RNA序列的普通烟草花叶病毒OM株同源。我们拟根据交叉保护原理,通过植物基因工程手段来培育抗烟草花叶病的烟草新品种。为此,对OM株外壳蛋白基因进行了下述重组工作。 首先,我们对OM株外壳蛋白基因工作,得到C-DNA株pCK501。然后,切取其中带外壳蛋白基因的667bp Hinf Ⅰ片段,导入带花椰菜花叶病毒35S启动子和3′未端质粒pDH51的聚核苷酸接头中,组成带烟草花叶病毒外壳蛋白基因的嵌合基因的重组质粒pCK401。又把整个嵌合基因导入pGV1103 neo,和嵌合的新霉素磷酸转移酶Ⅱ(NPTⅡ)基因及新霉素磷酸转移酶Ⅰ(NPT Ⅰ)基因相连接,组成中间载体pCK403。最后在大肠杆菌GJ23帮助下,把pCK403导入土壤杆菌,和土壤杆菌中原有的去了致瘤基因的Ti载体pGV3850的T-DNA区pBR322片段进行同源重组,把嵌合基因导入Ti质粒的T-DNA区,得到pACK403。     

日本开始重组番茄的野外试验

农林水产省1991年2月开始在茨城县筑波研究学园农业环境技术研究所试验田进行基因重组番茄的野外试验.1月份召开的农林水产省农林水产技术会议批准了农业环境技术研究所、农业生物资源研究所和农业研究中心申请的试验计划.试验到明年3月底为止.向田间移植20株重组株,20株非重组株,主要是探讨其越冬性.这是在日本首次进行的基因重组植物的环境释放试验.这种番茄导入了烟草花叶病毒(TMV)的外壳蛋白基因.     

改造后的抗菌肽AD基因在毕赤酵母中表达效价研究

通过PCR方法使抗菌肽AD基因中带有XhoⅠ和XbaⅠ酶切位点序列,再克隆到表达载体pPICZαA中,重组表达载体转化GS115,经重组酵母菌表达的抗菌肽AD,其N端去除了其它氨基酸。对重组抗菌肽培养条件进行优化,在YEPD中含葡萄糖2%,pH为75,重组酵母菌培养30h后,05%甲醇诱导42h,杀菌效价达1843,是改造前的31倍。最后重组抗菌肽经CMcellulose23柱层析得到纯化。     

转基因改良水稻抗稻瘟病的策略及其进展

稻瘟病是由子囊菌引起的广泛发生在世界各水稻产区的主要真菌病害。由于病原菌致病性的高度分化,使得对稻瘟病很难控制和防治。长期实践证明,培育抗病品种是稻瘟病抗病育种的主要目标。随着基因工程的发展,利用转基因技术导入外源基因改良稻瘟病抗性已成为一条新途径。现有研究表明,通过某些抗病基因、抗真菌蛋白基因、杀菌肽基因的克隆和转育,可以培育出获得对稻瘟病广谱抗性的水稻品种(系)。     

利用水稻抗菌蛋白开发抗稻瘟病水稻

《日经生物技术》１９９９年４月１２日第１２页报道：岩手县生物工程研究中心和岩手县农业研究中心、叶大学小组在高表达水稻抗菌蛋白的基础上,成功地获得抗水稻重要病害之一稻瘟病的抗性水稻。导入的是从水稻悬浮培养细胞中克隆的タウマチン样抗菌蛋白—米胶蛋白（ォリゼマチン）基因。是该小组独自克隆的基因。用导入基因的水稻当代的叶片,进行稻瘟病菌孢子的接种试验,获得抗性病斑,几乎没有患病性的个体。详细情况于４月４日在宇都宫市召开的日本育种学会上发表。目前该小组把米胶蛋白基因导入烟草获得了灰色霉病抗性。即使用水稻过…     

三菱油化学公司用基因电脉冲导入法加速氨基酸生产菌的分子育种

日本三菱油化学公司中央研究所使用电脉冲法,确立了短时间内将基因导入工业上用来生产氨基酸、核酸等的棒型细菌黄色短杆菌(Brevibacterium flavum)的方法,并将于下月上旬在名古屋召开的农艺化学会上发表。使用了电脉冲法,只需2～3天就能获得重组菌,使棒型细菌的分子育种所需时间大幅度缩短,而且非常省事。向棒型细菌导入基因以前使用的方法必须溶解细胞壁,然后用药剂导入基因(原生质体法)。因再生细胞壁比较费时,获     

酵母菌中表达的新疆家蚕抗菌肽（Cecropin-XJ）的特性研究

研究酵母菌中表达的新疆家蚕抗菌肽 (CecropinXJ)的抗菌特性。根据琼脂孔穴扩散法,检测抗菌肽的热稳定性、抑菌效价、对氨苄青霉素抗性菌的抑菌作用,并检测了抗菌肽对酸碱盐、人造胃液的耐受性及其抗菌谱。结果显示新疆家蚕抗菌肽具有很强的热稳定性、能够杀灭氨苄青霉素抗性菌、对酸碱盐、人造胃酸有一定的耐受性,其杀菌活力为：1mg抗菌肽与1200U的氨苄青霉素杀菌活力相当。新疆家蚕抗菌肽能够不同程度地杀灭革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌,这一发现将为抗菌肽在农业、医疗卫生、畜牧业等方面的应用奠定基础,同时为深入研究抗菌肽作用机制提供了依据。     

昆虫抗菌肽基因工程研究进展

昆虫抗菌肽对细菌、真菌、病毒和原虫都具有杀灭作用 ,甚至对肿瘤细胞也具有杀伤作用。昆虫抗菌肽并且有独特的作用机制 ,成为众多表达系统外源导入基因的侯选对象之一 ,综述了昆虫抗菌肽的种类及其在微生物转基因工程和植物转基因工程中的进展。     

抗植物细菌病害基因工程的研究进展

综述了利用基因工程技术提高植物抵抗细菌病害能力的研究进展。植物抗细菌病害基因工程的方法包括：阻断病原细菌的致病途径,强化植物抗病反应及其信号转导途径,导入植物防御基因,导入非植物源抗菌蛋白的编码基因,利用细胞调亡反应控制病害的发生。随着基因组学和功能基因组学的发展,和对植物与病原细菌之间相互作用更深入的了解,植物抗细菌病害基因工程所面临的问题会逐步得到解决,因此利用植物基因工程技术培育抗病品种将具有广阔的应用前景。     

痢疾杆菌酸抗性系统相关基因缺失突变体的构建

依赖于谷氨酸脱羧酶的酸抗性系统对痢疾杆菌在宿主细胞内的生存和繁殖至关重要,hdeA、hdeB、yhiE和yhiF是其中几个重要的酸抗性基因。借助Red系统的重组功能,PCR扩增两翼与目的基因上下游同源的抗性基因片段,电击转化痢疾杆菌2457T,对筛选到的阳性转化子再导入编码FLP位点特异性重组酶的质粒pCP20以去除抗性基因。结果成功的敲除了hdeA、hdeB、yhiE和yhiF等4个酸抗性系统相关基因,为深入研究痢疾杆菌酸抗性基因的调控网络奠定了基础.     

巨噬细胞特异性启动子/抗菌肽PR39基因腺病毒载体的构建及其表达

旨在构建由巨噬细胞特异性启动子调控的抗菌肽PR39基因腺病毒表达载体,检测目的基因在小鼠巨噬细胞RAW264.7中的表达。PCR扩增巨噬细胞启动子/抗菌肽PR39成熟肽基因序列,插入腺病毒穿梭载体pAdTrack中,重组穿梭质粒(pAdTrack-SP/PR39)与腺病毒骨架(pAdEasy-1)共转化大肠杆菌BJ5183,通过细菌内同源重组产生重组腺病毒载体(pAd-SP/PR39)。pAd-SP/PR39经PacI线性化后转染293细胞,包装出重组腺病毒(Ad-SP/PR39)。Ad-SP/PR39感染小鼠巨噬细胞RAW264.7,经RT-PCR和免疫细胞化学检测PR39的靶向表达特异性。成功构建了由巨噬细胞特异性启动子调控的抗菌肽PR39基因腺病毒表达载体。包装出的重组腺病毒仍然能感染小鼠巨噬细胞且高效表达抗菌肽PR39。构建的重组腺病毒能够在巨噬细胞中表达抗菌肽PR39基因,为靶向表达抗菌肽在胞内菌感染治疗中的应用奠定了基础。     

抗菌肽CMIV变体的制备及对临床耐药致病菌作用的初步研究

应用新的融合方法制备抗菌肽ＣＭＩＶ变体;了解重组型抗菌肽变体对几株临床耐药菌的抗性。通过基因工程的手段,将合成的抗菌肽ＣＭＩＶ的ｃＤＮＡ与根据金黄色葡萄球菌Ａ蛋白（ＳＰＡ）的ＩｇＧ结合结构域设计并合成的ＺＺ结构域基因融合,在大肠杆菌细胞中表达;用制备的ＣＭＩＶ变体进行抑菌圈试验和液相试验。结果表明５ｕｌ（１０ｕｍｏｌ／Ｌ）抗菌肽可在大肠杆菌Ｋ１２Ｄ３１平板上产生直径１５ｍｍ的抑菌圈;抑制５０％大肠杆菌生长的抗菌肽浓度约０．２ｕｍｏｌ／Ｌ。６种青霉素抗性的革蓝氏阴性菌的抑菌圈直径在６～１３ｍｍ之间;而同样的条件下,对革蓝氏阳性菌——金黄色葡萄球菌的作用很弱。用新的融合方法可通过大肠杆菌体系制备有活性的抗菌肽变体,重组型抗菌肽有可能成为新一代的抗菌素     

克隆化小麦Cys合成酶基因培育抗酸雨的针叶树木

秋田县农业短期大学附属生物工程研究所教授佐野浩等克隆了小麦的 Cys 合成酶基因,导入烟草,用     

菜豆的性状转化获得成功

据报道,美国Agracetue公司的研究员David Russel使菜豆的性状转化获得成功.现在正进行导入抗病基因的实验. Russel使用基因枪导入了有关基因.该公司研究开发副经理Kenneth Barton指出这项成功表明,在抗病毒菜豆品种的开发上可以应用基因重组技术. 据Barton说该公司正在着手导入菜豆的重要病害——烟草花叶病毒的外壳蛋白基因,研究培育抗病菜豆. Agracetus公司是美国Cetus公司和化学公司的W.R.Grace公司合并而成的风险企业.之后,W.R.Grace公司收买了Cetus公司的股份,使其成为W.R.Grace公司的独家子公司.以新品种的开发为中心,继续农业领域的研究开发.该公司以1986年在美国首先获准进行基因重组植物的野外试验而闻名.