重组β-葡萄糖苷酶生产龙胆低聚糖的工艺条件优化

摘要：【目的】β-葡萄糖苷酶可用于酶法生产龙胆低聚糖。为了给龙胆低聚糖的生产提供大 量的酶来源,构建基因工程菌表达黑曲霉(CMI CC 324626)β-葡萄糖苷酶基因（bgl）并研究重组酶生产龙胆低聚糖的工艺条件。【方法】将bgl克隆到表达载体pPIC9K,转化毕赤酵母（Pichia pastoris）KM71。表达产物通过HPLC和LC-MS鉴定了其可用于生产龙胆低聚糖的转苷活性,并对酶转化葡萄糖生产龙胆低聚糖的反应条件进行了优化。【结果】实现了β-葡萄糖苷酶的过量表达。当底物葡萄糖浓度为80%,反应pH4.5,温度为60℃,加酶量为每克葡萄糖60 U,添加1 mmol/L的K+,转化周期为48 h,龙胆低聚糖累计达到最大为50 g/L。【结论】本研究是国内外首次利用重组酶酶法生产龙胆低聚糖的报道。     

生物传感器的展望

生物传感器是一个总称,实属酶工程的应用工学的一个范畴。它利用酶、微生物、抗原或抗体、动、植物组织经载体固定化后可编制成单个或一组识别单元,去识别出特定基质后所得信息,再通过转换器和电气化学装置进行组合,这就成为生物传感器。 例如,酶传感器是籍助独特机能一酶对底物的专一性。所以,反应液(或生产过程     

外切菊粉酶的酶学研究进展

菊粉富含于菊芋、菊苣等多种菊科植物中,是一种来源丰富的可再生资源。菊粉是一种由D 呋喃果糖经β-2, 1-糖苷键连接,还原端经α-1, 2-糖苷键连接1个葡萄糖残基构成的果聚糖。菊粉能被菊粉酶水解,生产果糖、高果糖浆、菊粉寡糖,可通过微生物发酵生产燃料酒精等产品,在食品、生物能源、医疗保健等方面都有重要应用,受到广泛关注。介绍外切菊粉酶的分类、来源、结构和催化机理,重点总结近10年微生物来源外切菊粉酶的重组表达和酶学性质情况,简述外切菊粉酶在食品、能源等方面的应用,展望外切菊粉酶的研究热点及方向。     

重组大肠杆菌生产可溶性MBP融合肝素酶的培养条件优化

为确立肝素酶Ⅰ的高效生产工艺,利用麦芽糖结合蛋白(MBP)与肝素酶Ⅰ融合性能,通过构建相应的表达质粒pMHS,在大肠杆菌方面实现了肝素酶Ⅰ可溶性表达。通过对LB培养基摇瓶培养E.coliTB1(pMHS)的诱导时机、诱导剂用量以及添加葡萄糖、酵母提取物、乙醇、氯霉素和卡那霉素等一系列培养条件的优化,确定了该可溶性肝素酶融合蛋白MBP-hepA的最佳生产条件。     

酶和发酵工程

862501新的胆红素氧化酶的生产及应用〔专,英〕/Mats。i,5.…// UK Paten tA-ppl.GB Zi46997.Pub.ol.os.ss.Appl .JP58/218895,filed 21 .11.83〔译自CBA,1985, (7),2221〕通过培养Trachyderma属的各个种,特别是培养T.tsunodaeK一2593,可生产胆红素氧化酶M一1,此酶可用于胆红素及其它底物的定量测     

青霉菊粉酶的产生和性质

由淀粉通过葡萄糖异构化生产高果糖糖浆,生产上受到原料的限制。果糖另一种来源是菊粉（Inulin）。菊粉是以β-2,1果糖苷键连接的一种多聚果糖,其末端含有一个蔗糖残基,它作为贮存性多糖大量存在于菊芋（Helianthus tuberosus）、菊巨(chicoryintybus)、大丽花（Dahlia pinnata）等多种植物中,至今尚未得到很好利用。菊粉可通过化学法或酶法水解生成果糖。利用菊粉酶     

微生物法生产丙烯酰胺的研究（Ⅰ）—腈水合酶产生菌株的培养和高活力的表达

研究了丙烯酰胺生产菌株的培养条件。通过对培养过程pH值调控、培养基补料以及诱导剂加入量的研究,使发酵液的腈水合酶的活力达到了6567u/mL菌液。这一酶活是国内外所见报道中最高的。进一步进行了丙烯腈的酶催化水合实验,产物中并没有发现副产物丙烯酸,说明在提高腈水合酶的同时,酰胺酶的活力并没有明显体现这一试验结果为工厂化生产改造以及新工艺的研究打下了基础。     

三相鼓泡塔生物反应器培养云芝菌合成漆酶

为了提高云芝菌发酵生产漆酶的效率,提出了一种利用自絮凝菌丝球在三相鼓泡塔生物反应器中重复分批发酵产漆酶的新方法。在优化后的产酶条件下,考察维生素C的添加浓度对漆酶活力的影响,并通过在培养基中添加维生素C进行漆酶多批次培养。研究结果表明,维生素C的添加浓度为1.50mmol/L时,可使漆酶活力提高2.6倍。连续进行了10批培养,每批最大漆酶的活力均在1000 U/mL以上,最高酶活出现在第五批为1919.6 U/mL,总培养时间达25 d。此方法所得漆酶对染料靛蓝具有明显的脱色降解作用,在介体1-羟基苯并三唑（HBT）用量0.10%,漆酶用量100 U/L条件下作用40 min时,靛蓝脱色率达到96.7%。该方法采用的三相鼓泡塔生物反应器性能稳定、菌丝球可重复使用,该方法有利于漆酶的高效、规模化生产。     

微生物法生产丙烯酰胺的研究(Ⅰ)——腈水合酶产生菌株的培养和高活力的表达

研究了丙烯酰胺生产菌株的培养条件。通过对培养过程pH值调控、培养基补料以及诱导剂加入量的研究 ,使发酵液的腈水合酶的活力达到了 6567u mL菌液。这一酶活是国内外所见报道中最高的。进一步进行了丙烯腈的酶催化水合实验 ,产物中并没有发现副产物丙烯酸 ,说明在提高腈水合酶的同时 ,酰胺酶的活力并没有明显体现这一试验结果为工厂化生产改造以及新工艺的研究打下了基础.     

最新专利文摘

用β-半乳糖苷酶制备蔗糖生物传感器核微孔酶膜的方法,一种可生物降解塑料母料的制备方法,利用活性污泥生产可生物降解塑料的方法,石制文物表面防护用微生物材料的制备方法,生物催化法制备2,2-二甲基环丙甲酰胺及其菌株.     

重组黄杆菌肝素酶III的纯化、表征及培养条件对酶生产的影响

肝素酶III是一种特异性地裂解乙酰肝素的酶,在大肠杆菌中表达时容易形成包涵体。为实现肝素酶III的可溶性表达,利用谷胱甘肽-S-转移酶(GST)与肝素酶III融合性能,通过构建相应的表达质粒pGEX-heparinaseIII,在大肠杆菌中实现了肝素酶Ⅲ的可溶性表达。粗酶通过一步亲和纯化其纯度可达95%以上。通过对LB培养基摇瓶培养Escherichia coli BL21的诱导时机、诱导剂用量、诱导时间等培养条件的优化,确定了该可溶性肝素酶III融合蛋白的最适生产条件。通过对纯酶的最适反应温度、pH、Ca2+浓度等一系列性质研究,确定了该酶的最适反应条件。     

细胞工程

900914 生产对里氏木霉的内葡聚糖酶-Ⅰ和纤维二糖水解酶Ⅱ特异的单克隆抗体[会,英]/Nieves, R. A.…∥Abstr. Annu. Meet. Am. Soc. Microbiol.-1989, 89 Meet.-305[译自DBA,1989,8(17),89-10405] 里氏木霉(Trichoderma reesei)的纤维素酶系统由纤维二糖水解酶、内葡聚糖酶和β-葡糖苷酶组成。通过这些酶的协同作用可使纤维素降解为可利用的底物。生产     

培养基配方和生物量再循环对菌株可可球二孢(Botryodiplodia theobromae)糖化酶生产的影响

B．theobroae培养在添加了（NH4）3 PO4、蛋白胨、K3PO4、CaCO3和大豆粉的木薯淀粉培养基中,mH6．0时播瓶发酵产生据化酶1950u／ml。真菌生物量能在无有效损失的情况下被再循环利用于酶生产至少4次。糖化酶（EC3．2．1．幻是一种重要同工业酶制剂,例如它能被用于葡萄糖浆的生产上。各种真菌糖化酶已被用于不同DE值（葡萄糖当量值）的糖浆生产中。黑曲霉已被用于深层培养和固态发酵生产糖化酶。B．theobromae是一种真菌,它作为糖化酶产生菌的潜力也已被研究过。在分批工艺、补料分批工艺和连续工艺中,都可通过细胞再循环（利用）…     

植物生产新型生物聚合物PHB的研究进展

聚-β-羟基丁酸酯(polyhydroxybutyrate,PHB)是一种可完全生物降解和具有良好生物相容性的高分子材料,可作为传统塑料的替代品,在塑料、化学药品和饲料市场上具有巨大的商业应用价值。近年来,用植物生产新型生物聚合物PHB的技术取得一定进展,可望通过农业生产提供可再生的工业原料,这使得它具有广泛的发展前景。采用转基因方法可以大幅度提高用植物生产PHB的产量,包括控制启动子来驱使转基因表达,减少内源性酶在竞争性代谢途径中的活性,通过插入的基因来增加聚合物的碳含量。这些研究成果增加了我们对碳的可获取性的了解和区分不同的植物细胞器、细胞和器官类型的能力,推动了用植物生产PHB及其他产物的进展。     

丝状真菌能分泌外源蛋白

Genencor公司的一个研究小组已用重组DNA技术开发出一种丝状真菌分泌系统。他们是用一种曲霉(Aspergillus)实现这一点的。该公司现用大规模发酵曲霉及其他丝状真菌来生产商用的食品级酶。已用这项新技术分泌凝乳酶,此酶通常由牛第四胃的壁衬细胞分泌,可用于奶酪生产。     

产纤维素酶细菌的工程化

Oak Ridge National Laboratory的研究人员对一种细菌进行遗传工程,使之生产纤维素酶,这种酶可用作纺织中的去垢剂,使蓝劳动布纤维变得平滑。 上述研究小组的负责人Craig Dees博士介绍说:“工程化细菌产生的酶比真菌同期产生的多得多。在蓝     

枯草杆菌α-淀粉酶的生产

α-淀粉酶是在酒精、酿造、制药、制糖和纺织工业上应用广泛的酶种,也是目前国内外应用最广、产量最大的酶种之一。α-淀粉酶可由微生物发酵产生,也可由植物和动物提取。目前工业生产上都以微生物发酵法为主进行大规模生产α-淀粉酶。我国从1965年开始应用枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)BF-7658生产α-淀粉酶,当时仅无锡酶制     

新的芽孢杆菌载体具有标志分泌蛋白的序列

在纽约市公共卫生研究所(PHRI)的努力下,以枯草芽孢杆菌进行蛋白生产又向商业化前进一步。该项目得到 Applied Microbiology(AMBI)(Brooklyn,NY)的资助。新的载体除带有分泌序列与外源基因外,还带有特殊的蛋白标志基因。利用此基因,研究者可通过追踪分泌产物的产量检测生产某一蛋白的可行性。初步研究之后,可用限制性内切酶除去蛋白标志基因,从而得到纯的分泌产物。     

重组黄杆菌肝素酶Ⅲ的纯化、表征及培养条件对酶生产的影响

肝素酶Ⅲ是一种特异性地裂解乙酰肝素的酶,在大肠杆菌中表达时容易形成包涵体.为实现肝素酶Ⅲ的可溶性表达,利用谷胱甘肽-S-转移酶(GST)与肝素酶Ⅲ融合性能,通过构建相应的表达质粒pGEX-heparinaseⅢ,在大肠杆菌中实现了肝素酶Ⅲ的可溶性表达.粗酶通过一步亲和纯化其纯度可达95%以上.通过对LB培养基摇瓶培养Escherichia coli BL21的诱导时机,诱导剂用量、诱导时间等培养条件的优化,确定了该可溶性肝素酶Ⅲ融合蛋白的最适生产条件.通过对纯酶的最适反应温度、pH、Ca~(2+)浓度等一系列性质研究,确定了该酶的最适反应条件.     

生物工程简讯四则

1983年5月,美国政府批准加利福尼亚州的Quidel医学生物学研究所生产一种人们可以自己检测怀孕的检验箱。据说这是第一种应用单克隆抗体技术生产的产品。检验是采用酶联检测技术,在停经2天后就可根据显色反