鼠伤寒沙门氏菌外膜蛋白诱发BALB／C小鼠免疫保护的研究

本文采用超声破碎ＴｒｉｔｏｎＸ—１００和超速离心技术提取了鼠伤寒杆菌（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ,ＳＴＭ）的外膜蛋白（Ｏｕｔｅｒｍｅｍｂｒａｎｅｐｒｏｔｅｉｎｓ,ＯＭＰｓ）,并发现ＯＭＰｓ中脂多糖ＬＰＳ的含量约为５％,ＯＭＰｓ经ＳＤＳ—ＰＡＧＥ显示１０余条蛋白带。对ＯＭＰｓ诱发ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠产生典型迟发型变态反应ＤＴＨ和ＩＬ—２的水平进行了检测。经腹腔免疫的小鼠用５００ＬＤ５０鼠伤寒杆菌（５０１１５）攻击,１００％可得到保护;用５００ＬＤ５０伤寒杆菌（Ｅ６８６）攻击,３３．３％可得到交叉保护。免疫ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠的Ｔ淋巴细胞,经尾静脉注射给非免疫小鼠,可使后者得到８５．７％的被动免疫保护,上述结果说明ＯＭＰｓ能诱发ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠细胞免疫和保护性免疫,并提示成为分子疫苗的可能性。     

鼠伤寒沙门氏菌诱导昆明小鼠肠道感染模型的建立

目的:建立鼠伤寒沙门氏菌诱导昆明小鼠肠道感染模型。方法:先用5 mg/mL链霉素预处理2 d,提高小鼠对鼠伤寒沙门氏菌的敏感性,然后正常饲养1 d,攻毒前禁水禁食4 h,再分别以不同剂量灌胃攻毒2次,间隔24 h。观察小鼠临床症状,并通过组织病理切片、透射电镜和免疫组织化学的方法,分别观察小鼠肠道组织病理变化、小肠上皮细胞超微结构变化及肠道淋巴细胞增殖状况。结果:攻毒后昆明小鼠会出现昏睡、食欲不振、寒颤,甚至死亡的现象,解剖后发现小鼠肠道充血膨胀。组织病理切片显示小鼠肠粘膜受损,小肠绒毛肿胀,排列杂乱,炎性细胞浸润;透射电镜观察超微结构显示小肠上皮细胞线粒体空泡化,嵴和膜发生融合消失,粗面内质网发生扩张;免疫组织化学的方法显示肠道感染后,淋巴结肿大,T淋巴细胞大量增殖。结论:该模型对探索鼠伤寒沙门氏菌引发肠炎的发病机制、病理生理、免疫等方面作用具有重要意义,并为特异性卵黄抗体被动免疫保护效果的后续评价奠定基础。     

鼠伤寒杆菌主要外膜蛋白作为保护性抗原的研究

采用超声破碎,ＴｒｉｔｏｎＸ─１００处理和Ｓｅｐｈａｃｒａｌ超细Ｓ─３００凝胶过滤技术提取了鼠伤寒杆菌的主要外膜蛋白（ＭＯＭＰｓ）。ＭＯＭＰｓ的脂多糖（ＬＰＳ）含量约为０．２％。经ＳＤＳ─ＰＡＧＥ图谱显示蛋白在３６─４１ＫＤ之间。ＭＯＭＰｓ能使小鼠产生典型的足垫肿胀（ＤＴＨ）及高水平的ＩＬ─２;可保护５００ＬＤ５０鼠伤寒杆菌及伤寒杆菌的攻击,其免疫保护率分别为９０％和３３．３％,用５０ｕｇＭＯＭＰｓ免疫的小鼠的Ｔ淋巴细胞经尾静脉注射给非免疫小鼠,可使后者得到被动免疫保护,其保护率为４２．９％。基于上述实验结果,本文认为鼠伤寒杆菌的ＭＯＭＰｓ是一良好的保护性抗原。     

小鼠对鼠伤寒沙门氏菌感染免疫应答的研究进展

小鼠鼠伤寒沙门氏菌感染后,会引发一系列的肠道和全身性的疾病,这是一种类似于人感染伤寒沙门氏菌的疾病。在感染的早期,天然免疫系统能迅速对入侵的细菌做出反应,吞噬细胞的活化以及炎症因子的产生能在一定程度上抑制鼠伤寒沙门氏菌的增殖,而在感染的后期,对于有效地控制和消灭细菌,获得性免疫是必要的。鼠伤寒沙门氏菌的感染能诱导特异性CD4+和CD8+T细胞的增殖,从而引发强烈的免疫应答,在此过程中也会产生大量的B细胞。特异性T细胞以及B细胞介导的免疫反应能有效地抵御细菌的侵染。总而言之在天然免疫系统和获得性免疫系统协调作用下,实现了对宿主的免疫保护。     

鼠伤寒沙门菌外膜蛋白与耐药性关系的分析

目的分析鼠伤寒沙门菌外膜蛋白(OMP)与耐药性的关系。方法用消除剂丫啶橙消除耐药性,盲传测其遗传稳定性,采用超声波物理裂解法制备鼠伤寒沙门菌外膜蛋白标本,用变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDA-PAGE)检测外膜蛋白,用紫外分光光度计测其吸光值,计算浓度。结果抗性消除表型能稳定遗传,耐药鼠伤寒沙门菌与敏感鼠伤寒沙门菌都含有6条主要的外膜蛋白条带,两者相比,发现耐药菌的外膜蛋白在约57、53、30 kDa处减弱或缺失,总的蛋白浓度也低于后者。结论鼠伤寒沙门菌耐药性与外膜蛋白的减弱或缺失有关。     

鼠伤寒杆菌外膜蛋白作为保护性疫苗的初步实验研究

本文采用超声波破碎和Triton X-100处理、超速离心的方法,提取了鼠伤寒杆菌的外膜蛋白(OMP)。用提取的OMP免疫家兔和小鼠,经用ELISA方法测定小鼠、家兔及鼠伤寒意染患者血清中抗-OMP抗体含量,并用小鼠作足垫肿胀实验及主动和血清被动保护试验。结果免疫动物及患者血清中都含有较高滴度抗体,免疫小鼠足垫出现明显地DTH反应。50ug OMP免疫小鼠可保护500 LD50毒株的攻击,0.2ml免疫血清亦能够被动保护以上同样的毒株攻击。这些结果表明,提取的OMP有较强的免疫原性和明显的免疫保护作用,应用Western blot分析免疫血清均能识别36KD蛋白带,36KD蛋白带可能是鼠伤寒杆菌的主要免疫原。     

鼠伤寒沙门氏菌噬菌体型的相变异

经过反复检查1980～1993年间在新疆维吾尔自治区各地收集的鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella typhimurium)菌株,发现了鼠伤寒沙门氏菌噬菌体型的相变异(phase variation)。在4774或4776噬菌体型(完全型)的培养物中,有一小部分可以发生变异,有的变为4000(第1相),有的变为0776或0774(第2相)。这种4000和0776(0774)噬菌体型培养物的多数,容易发生回复变异,变为原来的噬菌体型4774(或4776);有时,4000噬菌体型(第1相)可以变为0776(第2相),而0774噬菌体型(第2相)也可以变为4000(第1相)。在7776噬菌体型(完全型)的培养物中,也有一小部分可以变为7000(第1相)或0776(第2相)。7000(或7002)和0776噬菌体型培养物的多数容易发生回复变异,变为原来的噬菌体型7776(或7774)。从完全型培养物变为第1相或第2相的变异率为156%,从第1相或第2相培养物变为完全型的变异率为532%。这一现象的阐明,将有助于鼠伤寒沙门氏菌的噬菌体分型,和对鼠伤寒沙门氏菌感染的流行病学分析有重要意义。     

构建化学发光-绿色荧光稳定标记的鼠伤寒沙门氏菌

基因改造的鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella typhimurium)作为弱毒疫苗活载体被广泛应用于多种病毒、细菌、寄生虫等的免疫研究和生产实践中,甚至在肿瘤治疗方面也有诸多研究。在科学研究中,可视化技术为研究提供十分方便的手段。在鼠伤寒沙门氏菌强毒株ATCC 14028s基因组上插入Lux operon和gfp基因,使其同时具有化学发光和绿色荧光的特征,而这种基因组的改变并未影响其生长和毒力;在荧光显微镜下可观察到其在食管癌细胞TE1和乳腺癌细胞MDA-MB-468的分布情况;用小动物活体成像系统可检测其在小鼠体内的分布情况。该菌株在细胞水平下的绿色荧光信号和在小鼠体内的化学发光信号搜集方便,信号明显,为今后进一步研究鼠伤寒沙门氏菌提供了良好的可视化手段。     

创伤弧菌外膜蛋白免疫刺激复合物对欧洲鳗鲡的免疫保护性分析

创伤弧菌(Vibrio vulnificus)是一种革兰氏染色阴性、多形性、运动性、有荚膜的嗜盐性细菌, 属于弧菌属第5群, 主要生长于海水中、鱼类及贝母类等体内1。根据寄主范围和生化反应类型的不同, 将创伤弧菌分为3 个生物型: 生物Ⅰ型(产吲哚)2、生物Ⅱ型(不产吲哚)3以及1999 年以色列的研究人员报道的创伤弧菌生物Ⅲ型。       

辽宁省鼠伤害沙门氏菌噬菌体分型的研究

本文报道了辽宁省不同来源鼠伤寒沙门氏菌噬菌体型的分布情况。实验结果表明：１５１株鼠伤寒沙门氏菌能分型者１４７株,分型率高达９７．３５％;１４７株鼠伤寒沙门氏菌可分成１４个噬菌体型,其中４７７４型（４６．２６％）、７７７７型（２４．４９％）、６７７４型（１１．５６％）、４０００型（６．８０％）。上述４型为辽宁省鼠伤寒沙门氏菌优势噬菌体型（８９．１２％）。辽宁省各种来源鼠伤寒沙门氏菌均以４７７４型最为常见,肠炎病人和健康带菌者型别众多,医院交叉感染病人型别相对集中,食物中毒鼠伤寒沙门氏菌流行型别为４７７４型和６７７４型。     

伤寒杆菌和甲型副伤寒杆菌的稳定L型外膜蛋白和染色体DNA酶切研究

非高渗培养基传代培养的伤寒杆菌和甲型副伤寒杆菌的稳定L型丧失了主要外膜蛋白、特异性表面抗原和染色体DNA部分片段,保留了沙门氏菌共同的内部抗原和形成L型独特的表面抗原。提示伤寒杆菌和甲型副伤寒杆菌的稳定L型多种特性的丧失同其基因或主要外膜蛋白的缺失有关。     

一种快速提取禽源性大肠埃希氏菌外胰蛋白的方法

介绍一种快速提取禽源性大肠埃希氏菌外膜蛋白的方法。该法是对Ｋａｐｕｒ等发表的方法的改进。全过程只需超速离心一次,比Ｋａｐｕｒ等的方法缩短了４ｈ。所得样品可直接用于禽源性大肠埃希氏菌外膜蛋白模式的测定。     

嗜水气单胞菌主要外膜蛋白对欧洲鳗鲡的免疫保护试验

制备出4株分属3个不同血清型嗜水气单胞菌的主要外膜蛋白(MOMP)免疫刺激复合物(ISCOMs)亚单位疫苗,腹腔注射免疫欧洲鳗鲡,ELISA法测得免疫后第14d和第30d所采集的血清的平均抗体效价在1∶320-1∶1280之间。免疫印迹结果显示,在印迹膜上对应的位置均可检测到MOMP的主要蛋白条带。第40d的免疫保护试验表明,免疫欧鳗对TPS-30菌株约100倍半数致死剂量的攻击无免疫保护作用,其中的3组被测免疫欧鳗对TPS-30菌株约10倍半数致死剂量的攻击的免疫保护率皆在80%以上。上述试验结果提示,嗜水气单胞菌的主要外膜蛋白是重要的保护性抗原,在制备成ISCOMs亚单位疫苗的情况下,较小的剂量免疫一次即可显示出较高的相对免疫保护率,且没有明显的血清型特异性。       

鱼类病原菌外膜蛋白及其免疫原性研究进展

细菌性疾病是水产养殖病害中最常见且危害甚为严重的一类疾病1。长期以来,一直用于鱼类细菌性疾病防治的西药类药物,由于会导致病原菌产生耐药性,在鱼体内产生药物残留危害人类健康等副作用而被限制使用2。因此,为了选择更加安全有效的防治方法,疫苗免疫逐步得到了人们的重视。       

鼠伤寒沙门氏菌嘌呤生物合成调控研究IX.PUR box的突变分析2

为研究１６ｂｐ ＰＵＲｂｏｘ 中８ 个完全保守的碱基中的２ 个碱基在与ｐｕｒＲ＋ 阻遏蛋白结合中的功能,对它们分别作了定点突变,使其分别从Ｃ,Ｇ 突变为Ｇ,Ａ。凝胶阻滞实验结果表明,含上述保守碱基突变的ＰＵＲｂｏｘ 均不能与ｐｕｒＲ＋ 阻遏蛋白结合。证明这２ 个保守碱基对维持ＰＵＲｂｏｘ 的功能是必须的,其中任一改变都导致ＰＵＲｂｏｘ 功能的丧失。     

金属硫蛋白对大鼠红细胞膜受羟自由基损伤保护作用的自旋标记—ESR研究

用自旋标记物5NS,16NS及MSL分别插入红细胞膜脂及标记膜蛋白,发现金属硫蛋白(10~(-5)mol/L)对羟自由基引起的膜运动性减弱和膜蛋白构象改变有明显抑制作用,说明金属硫蛋白对大鼠红细胞膜的羟自由基损伤有保护作用,并且,对于低剂量的羟自由基损伤,保护作用更为明显。