洋葱卵细胞的分离

将洋葱的胚珠置于酶液中酶解50-110 min后剥去其珠被,可清楚地看到珠心中的胚囊轮廓。用解剖针将珠心从中部横切,然后挤压其珠孔部位,卵器细胞从胚珠的切口处逸出。再用显微操作仪的玻璃针将卵细胞和两个助细胞分开,达到分离洋葱卵细胞的目的。酶对分离卵细胞具有重要作用,在最佳的酶液浓度[0.02%果胶酶Y23、0.08%果胶酶（Serva）、0.05%纤维素酶和0.05%半纤维素酶]下酶解胚珠110 min后,解剖1 h可从24个胚珠中分离出10个卵细胞（41.67%）。随着胚囊的发育,两个助细胞的体积出现明显的二形性。洋葱生活卵细胞的分离为开展洋葱离体受精建立了基础,也为研究洋葱卵器细胞的发育创造了条件。     

葱卵细胞的分离

将大葱(Allium fistulosum)胚珠置于酶液中30分钟可将其外珠被去掉。可清楚地看到由内珠被包裹的胚珠中胚囊的轮廓。将胚珠转移至不含酶的相同溶液中, 用解剖针从胚珠中部切割, 然后挤压胚珠的珠孔部位, 卵器细胞从胚珠的切口处逸出。再用显微操作仪将卵细胞和2个助细胞分开, 达到葱卵细胞分离的目的。酶对分离卵细胞具有重要的作用, 经0.2%果胶酶Y23、0.8%果胶酶、0.8%纤维素酶和0.5%半纤维素酶的处理, 可在2小时内从30 个胚珠中分离出18个卵细胞。随着胚囊的发育, 2个助细胞的体积出现明显差异。生活的葱卵细胞的成功分离, 为建立葱离体受精体系创造了条件。     

葱卵细胞的分离

将大葱（Allium fistulosum）胚珠置于酶液中30分钟可将其外珠被去掉。可清楚地看到由内珠被包裹的胚珠中胚囊的轮廓。将胚珠转移至不含酶的相同溶液中,用解剖针从胚珠中部切割,然后挤压胚珠的珠孔部位,卵器细胞从胚珠的切口处逸出。再用显微操作仪将卵细胞和2个助细胞分开,达到葱卵细胞分离的目的。酶对分离卵细胞具有重要的作用,经0．2％果胶酶Y23、0．8％果胶酶、0．8％纤维素酶和0．5％半纤维素酶的处理,可在2小时内从30个胚珠中分离出18个卵细胞。随着胚囊的发育,2个助细胞的体积出现明显差异。生活的葱卵细胞的成功分离,为建立葱离体受精体系创造了条件。     

胡萝卜精、卵细胞、助细胞和中央细胞的分离

用两个解剖针挤压胡萝卜花粉使其破裂释放出精细胞。用酶解-解剖方法分离胡萝卜胚囊中的卵细胞、助细胞和中央细胞。胡萝卜胚珠先在酶液中酶解40~50min,然后将其转移到不含酶的分离液中用解剖针解剖胚珠。将胚珠的合点端切破,轻轻挤压胚珠的珠孔,卵细胞、助细胞和中央细胞即可逸出。在最佳条件下,20min可从20个胚珠中分离出5个卵细胞。对分离胚囊细胞的渗透压和酶液成分进行了筛选。分离出的卵细胞用显微操作仪收集。胡萝卜精、卵细胞的成功分离为在双子叶植物中进行离体受精探索创造了条件。     

莴苣胚囊细胞分离

用酶解和解剖方法分离了莴苣的卵细胞,助细胞,中央细胞和合子。莴苣子房先在酶液中酶解40～50min,然后在不含酶的分离液中用解剖针解剖子房。在解剖出的胚囊中,可看到卵细胞,两个助细胞和中央细胞的轮廓。将胚囊的合点端切破,轻轻挤压胚囊的珠孔端,四个细胞即可逸出。在最佳条件下,90min可从40个子房中分离出29个胚囊,进一步从中分离出11个卵细胞。分离出的胚囊细胞用显微操作仪收集备用。莴苣卵细胞的成功分离为进行离体受精探索创造了条件。     

莴苣胚囊细胞分离

用酶解和解剖方法分离了莴苣的卵细胞,助细胞,中央细胞和合子。莴苣子房先在酶液中酶解40～50min,然后在不含酶的分离液中用解剖针解剖子房。在解剖出的胚囊中,可看到卵细胞,两个助细胞和中央细胞的轮廓。将胚囊的合点端切破,轻轻挤压胚囊的珠孔端,四个细胞即可逸出。在最佳条件下,90min可从40个子房中分离出29个胚囊,进一步从中分离出11个卵细胞。分离出的胚囊细胞用显微操作仪收集备用。莴苣卵细胞的成功分离为进行离体受精探索创造了条件。     

蓝猪耳卵细胞和合子的分离

蓝猪耳(Torenia fournieri)胚囊部分裸露出胚珠,在光学显微镜下能清楚观察到卵细胞和助细胞的形态结构.用解剖和酶解-解剖两种方法都能分离出生活卵细胞.用前种方法机械分离出的卵细胞数量较少(5%),但避免了酶对配子识别研究的干扰.在后种方法中加入0.1%纤维素酶和0.1%果胶酶既能使分离更加容易操作,又对卵细胞没有致命伤害,能在短时间内分离出较多的卵细胞(18%).用酶解-解剖方法也可分离出授粉14 h后的合子细胞.     

大叶杨配囊及胚珠的形成和发育

本文应用细胞化学方法研究了大叶杨胚珠、胚囊的形成和发育过程中核酸、蛋白质及不溶性多糖的分布和消长。大孢子母细胞、大孢子四分体及功能大孢子中含较少不溶性多糖,但却含丰富的RNA和蛋白质。功能大孢子经分裂发育成八核的蓼型胚囊。四核胚囊开始积累细胞质多糖,成熟胚囊中除反足细胞外充满淀粉粒。反足细胞形成后不久即退化。助细胞具多糖性质的丝状器,受精前两个助细胞退化。卵细胞核对Feulgen反应呈负反应。二极核受精前由胚囊中部移向卵器,与卵器接触后融合形成次生核。发育早期的胚珠为厚珠心,双珠被。晚期,内珠被退化,故成熟胚珠为单珠被。四核胚囊时期,珠孔端珠心组织退化,胚囊伸向珠孔形成胚囊喙。合点端珠心组织含丰富的蛋白质和核酸,这一性质与绒毡层性质相似,可能涉及胚囊的营养运输。胚囊的营养来源于子房和胎座细胞内贮存的淀粉粒。     

水稻胚囊卵器细胞发育期间超微结构变化的观察

通过透射电镜对水稻（ＯｒｙｚａｓａｔｉｖａＬ．）胚囊卵器发育过程中超微结构的变化进行观察,结果表明：卵器刚形成时,３个细胞均有完整的细胞壁,壁上分布着许多胞间连丝,不久各细胞合点极壁出现突起解体。随着卵器细胞进一步发育,合点极壁不断解体。到胚囊成熟时,卵细胞的合点极壁消失,仅留下一层质膜;助细胞由于出现退化,侧边近合点端壁出现断裂破碎解体。此时,３个细胞只在弯钩壁上观察到胞间连丝。卵器细胞不同发育阶段各种细胞器的变化很明显,其中最为明显的是质体和液泡。卵细胞在整个发育过程中大部分的质体都含有淀粉粒,而助细胞的质体在２个极核移向卵器上方时,质体内淀粉粒已消失,直至胚囊成熟也未重新出现;卵细胞液泡的出现时间、大小和位置与助细胞的有所不同,卵细胞液泡出现较迟,但到发育后期,液泡体积却明显比助细胞的大,液泡除了主要位于合点极外,珠孔极也有些液泡,而助细胞的则主要位于合点极。助细胞中脂滴的出现存在一个高峰期,即发生在胚囊近成熟时。助细胞核在发育早期呈椭圆形,位于近中部偏珠孔端,在发育中后期呈不规则形,位于近珠孔端壁旁边。水稻卵器发育过程中各细胞的超微结构变化充分反映其代谢规律。     

多胚水稻ApⅢ的胚胎发生:受精前后卵器的结构和组织化学研究

对高频率多胚水稻(Oryza sativa L.) ApⅢ受精前后卵器的细胞结构和组织化学变化进行了观察,并同已报道的正常水稻和多胚水稻大至相同发育时期的卵器进行了比较,结果表明: ApⅢ的2 932个幼嫩子房中,每个子房只有一个胚囊.没有看到含有一对胚囊和每个胚囊里有一套卵器的现象.除解体的和含胚的胚囊外, 1 655个胚囊中,含1个卵细胞和2个助细胞组成的正常卵器为1 643个 (99.27%), 含2个卵细胞和2个助细胞的4细胞卵器为12个(0.73%).没有观察到大量4细胞卵器、5细胞卵器(即由3个卵细胞和2个助细胞组成)和卵状细胞,以及其他4卵、5卵卵器的变异类型.卵细胞位于对着子房壁维管束一侧.细胞质含丰富的蛋白质和多糖颗粒;细胞核位于细胞中下部,少有偏远轴端的,直到合子分裂前由蛋白质物质和多糖颗粒聚成的环所包裹. 成熟胚囊中常见2个助细胞.助细胞位于珠孔端靠子房壁维管束一侧,多数为长颈烧瓶状,少有长形和星月形的.其珠孔端壁内侧丝状器发达,细胞质的结构,蛋白质物质和多糖颗粒的积累、分布及消长,细胞核的大小、组织化学反应和周围物质的动态与卵细胞的相同.此外,ApⅢ的2个助细胞存留时间较长.当花粉管进入助细胞的早期,助细胞的丝状器和帽颈端被花粉管损伤,中下部细胞质和核所在区仍保持完好.由以上结果得出结论: 多胚水稻ApⅢ高频率的额外胚(1或2个)主要来自3细胞正常卵器,极少来源于4细胞卵器; ApⅢ的助细胞除在受精和胚胎发生早期具特殊功能外,与卵细胞相似的细胞质结构、物质代谢过程以及崩溃较晚可能与胚胎发生有关; 在ApⅢ的少数胚囊中,接受助细胞可能有发生胚的潜能.     

多胚水稻ApⅢ的胚胎发生：受精前后卵器的结构和组织化学研究

对高频率多胚水稻（Oryza sativa L.)ApⅢ受精前后卵器的细胞结构和组织化学变化进行了观察,并同已报道的正常水稻和多胚水稻大至相同发育时期的卵器进行了比较,结果表明：ApⅢ的2932个幼嫩子房中,每个子房只有一个胚囊。没有看到含有一对胚囊和每个胚囊里有一套卵器的现象。除解体的和含胚的胚囊外,1655个胚囊中,含1个卵细胞和2个助细胞组成的正常卵器为1643个（99．27％）,含2个卵细胞和2个助细胞的4细胞卵器为12个（0．73％）。没有观察到大量4细胞卵器,5细胞卵器（即由3个卵细胞和2个助细胞组成）和卵状细胞,以及其他4卵,5卵卵器的变异类型。卵细胞位于对着子房壁维管束一侧。细胞质含丰富的蛋白质和多糖颗粒;细胞核位于细胞中下部,少有偏远轴 ,直到合子分裂前由蛋白质物质和多糖颗粒聚成的环所包裹。成熟胚囊中常见2个助细胞。助细胞位于珠孔端靠子房壁维管束一侧,多烽为长颈烧瓶状,少有长形和星月形的。其珠孔端壁内侧丝状器发达,细胞质的结构,蛋白质物质和多糖颗粒的积累,分布及消长,细胞核的大小,组织化学反应和周围物质的动态与卵2细胞的相同。此我,ApⅢ的2个助细胞存留时间较长。当花粉管进入助细胞的早期,助细胞的丝状器和帽颈端被花粉管损伤,中下部细胞质和核所在区仍保持完好。由以上结果得出结论：多胚水稻ApⅢ高频率的额外胚（1或2个）主要来自3细胞正常卵器,极少来源于4细胞卵器;ApⅢ的助细胞除在受精和胚胎发生早期具特殊功能外,与卵细胞相似的细胞质结构,物质代谢过程以及崩溃产晚可能与胚胎发生有关;在ApⅢ的少数胚囊中,接受助细胞可能有发生胚的潜能。     

颠茄胚囊细胞原生质体的酶法分离和观察

分离被子植物雌配子原生质体对发展植物受精工程有着重要意义。最近几年,虽然用酶法分离生活的胚囊已有一些成功的报道。但对分离组成胚囊细胞的原生质体前人还没有进行过尝试。1984年我们首次从烟草生活胚珠中分离出卵细胞、中央细胞、助细胞和反足细胞的原生质体。最近我们又用颠茄胚珠为材料,采用酶解压片技术进行分离胚囊细胞的原生质体,也取得预期的结果。获得了有活性的卵细胞、中央细胞和助细胞的原生质体。从而证明这项技术是有推广应用价值的。在观察中发现用酶法分离生活胚囊细胞的原生质体,能     

蝴蝶兰合子和胚的分离

该文用酶解一振荡法分离蝴蝶兰受精后的胚囊,然后显微解剖出合子、早期原胚及接近成熟的球形原胚。酶解液由O．7％-1．3％的纤维素酶、0．6％-1．0％果胶酶和10％甘露醇组成,pH5．8,酶解时间20-30min。分离的蝴蝶兰早期原胚和接近成熟的球形原胚均发现有发达的胚柄吸器。     

龙须草无融合生殖的胚胎学证据

采用石蜡切片技术对龙须草(Eulaliopsis binata(Rotz)C.E.Hubb)进行了系统的胚胎学研究,证明龙须草为禾本科植物中一种新的无融合生殖材料.龙须草无融合生殖方式为无孢子生殖,在胚珠发育早期,多个珠心细胞特化为无孢子生殖原始细胞,由原始细胞发育为单核胚囊,经两次有丝分裂形成4核胚囊,进一步分化形成两种类型的成熟胚囊:(1)具1个卵细胞,1个助细胞和2个极核,占观察总数的67.6%;(2)具1个卵细胞,2个助细胞和1个极核,占观察总数的32.4%.胚囊发育属大黍型.多个无孢子生殖原始细胞可以同时发育,最后形成2个或多个胚囊,其比例为17.7%.胚珠内没有有性胚囊的发育.胚的发生有两种类型:(1)早发生胚(74%),开花前1～2 d,极核未分裂前卵细胞分裂形成胚;(2)迟发生胚(26%),开花后2～3 d,极核分裂形成多个胚乳游离核后,卵细胞启动分裂形成胚.存在多胚现象,多胚来自不同胚囊内卵细胞的孤雌生殖,多胚发生率为13%.胚乳由极核不经受精自发分裂产生.     

八角莲大孢子发生和雌配子体形成

首次报道了八角莲(Dysosma versipellis (Hance)M.cheng)大孢子发生和雌配子体形成的过程.结果:双珠被,多为厚珠心胚珠,少数为假厚珠心,胚珠多为横生,少数为弯生;边缘胎座,子房一室,多胚珠,珠孔由两层珠被共同形成,呈"之"字形;多为单孢原,位于珠心表皮下:偶见2～3个孢原细胞位于珠心表皮下;大孢子母细胞有两种发生方式;直线形大孢子四分体,合点端的大孢子发育为功能大孢子,蓼型胚囊;成熟胚囊中,二个极核在受精前合并为次生核;三个反足细胞不发达,较早退化;"品"字形卵器极性明显,其中卵细胞与助细胞极性相反;助细胞发达,其丝状器在不同发育时期形态及大小不同,且具吸器功能.     

龙须草无融合生殖的胚胎学证据

采用石蜡切片技术对龙须草(Eulaliopsisbinata(Rotz)C.E.Hubb)进行了系统的胚胎学研究,证明龙须草为禾本科植物中一种新的无融合生殖材料。龙须草无融合生殖方式为无孢子生殖,在胚珠发育早期,多个珠心细胞特化为无孢子生殖原始细胞,由原始细胞发育为单核胚囊,经两次有丝分裂形成4核胚囊,进一步分化形成两种类型的成熟胚囊:(1)具1个卵细胞,1个助细胞和2个极核,占观察总数的67.6%;(2)具1个卵细胞,2个助细胞和1个极核,占观察总数的32.4%。胚囊发育属大黍型。多个无孢子生殖原始细胞可以同时发育,最后形成2个或多个胚囊,其比例为17.7%。胚珠内没有有性胚囊的发育。胚的发生有两种类型:(1)早发生胚(74%),开花前1~2d,极核未分裂前卵细胞分裂形成胚;(2)迟发生胚(26%),开花后2~3d,极核分裂形成多个胚乳游离核后,卵细胞启动分裂形成胚。存在多胚现象,多胚来自不同胚囊内卵细胞的孤雌生殖,多胚发生率为13%。胚乳由极核不经受精自发分裂产生。     

水稻多卵卵器的起源

被子植物的卵器中通常只有１ 个卵细胞。在水稻（Ｏｒｙｚａ ｓａｔｉｖａ）多胚品系胚囊中观察到二卵卵器和三卵卵器。对其大孢子和胚囊发生进行了观察,首次揭示了被子植物多卵卵器的起源。该品系大孢子发生正常。大孢子母细胞进行正常的减数分裂形成４ 个大孢子。靠近合点端的大孢子发育,其它３ 个退化。功能大孢子第一次有丝分裂后,两个子核被一中央大液泡分隔在胚囊珠孔端和合点端。紧接着发生第二次有丝分裂,合点端核分裂时纺锤丝与胚囊纵轴平行,而珠孔端核分裂时纺锤丝与胚囊纵轴成４５°夹角。由此产生的四核胚囊中,合点端１核向胚囊中部或中上部（胚囊珠孔端）迁移。四核胚囊再经１ 次有丝分裂形成两种类型的核分布偏离蓼型的八核胚囊。一种类型是珠孔端４个核,中部与合点各２ 个核,在胚囊细胞化过程中,珠孔端４ 核分化成四细胞卵器,其中卵细胞和助细胞各２ 个,中部的２ 核分化成２ 极核中央细胞,合点端的２ 核形成反足细胞。另一种类型是珠孔端６ 个核,合点端２ 个核,在胚囊细胞化过程中,两端各１ 核向中部迁移分化成２ 极核中央细胞,珠孔端剩余的５ 核分化成５ 细胞卵器,其中卵细胞３ 个,助细胞２ 个,合点端的１ 核迅速分裂形成反足细胞     

韭菜胚囊发育与胚胎发生

韭菜胚囊发育为葱型,胚胎发生属柳叶菜型。成熟胚囊中,三个反足细胞形态上常类似卵器,其中二个呈助细胞状,一个呈卵细胞状。卵状反足细胞可分裂成多细胞原胚,但随着胚乳的发育而退化。在未受精胚囊中,卵细胞和卵状反足细胞均可分裂,它们的发生过程与合子胚相似,但因无胚乳哺育,均不能继续发育。论证了反足细胞胚的性质,初步探讨了胚乳与反足细胞无配子生殖的关系。     

裸子植物种子的胚乳由何而来?

答:裸子植物胚珠里的胚囊内有许多个颈卵器生长于配子体组织中,每个颈卵器中有一个大型的卵细胞,没有极核细胞,卵受精后发育成胚(其中有一个发育成熟,其余的败育).胚乳是由雌配子体——成熟的胚囊发育而来的。这种现象有别于被子植物双受精后形成的胚     

籽银桂雌雄配子体的发育研究

利用石蜡切片和扫描电子显微镜技术。研究了南京地区银桂品种群的‘籽银桂’雌雄配子体的发育过程。雄蕊的孢原细胞在8月中旬出现。花药壁的发育为基本型,分泌型绒毡层。小孢子母细胞减数分裂为同时型。形成的4个小孢子四分体呈典型的四面体型。成熟花粉粒即雄配子体为二核花粉粒。籽银桂为倒生胚珠。单珠被,薄珠心。珠被内层细胞特化为珠被绒毡层。在胚珠合点端。有承珠盘结构。在9月中旬,雌蕊的孢原细胞开始分化出来。孢原细胞直接发育成大孢子母细胞,然后大孢子母细胞减数分裂形成大孢子。‘籽银桂’的胚囊发育类型为蓼型。成熟胚囊即雌配子体由2个助细胞、1个卵细胞、1个中央细胞(2个核)和3个反足细胞组成。