EPSTEIN-BARR病毒血清抗体阳性健康人外周血体外培养“自发性”转化的研究

对35名Epstein-Barr病毒血清抗体阳性健康人的外周血淋巴细胞进行了体外培养,观察B淋巴细胞感染了EB病毒后所导致“自发性”转化的情况。由于在培养基中加入了免疫抑制剂环胞菌素A,使“自发性”转化的发生率由26.7％提高到74.3％,说明了在血清抗体阳性健康人的外周血液中,EB病毒感染的B淋巴细胞的数量远比既往文献报道的高。     

Epstein-Barr病毒基因工程活疫苗人体免疫的初步研究

Epstein-Barr(EB)病毒的原发感染发生在儿童时期,在我国3～5岁儿童的感染率为70％～90％。感染后终生带毒,并经唾液不断排出病毒。我国南方是鼻咽癌高发区,其发病率和死亡率均占恶性肿瘤的第一位。早期诊断方法的改进和早期治疗,使鼻咽癌治疗后的5年生存率明显增加,但不能降低发病率。EB病毒疫苗有可能成为控制该病的有效手段之一。 Epstein等人从淋巴母细胞株(B95-8细胞)细胞表面提取EB病毒膜抗原(MA),用于免疫棉顶猴能产生中和抗体。免疫动物能抵抗EB病毒攻击后所诱发的恶性淋巴瘤。该中和抗体在体外能中和EB病毒的转化活性。EB病毒的主要膜抗原(MA)是由分子量220kD和     

用Epstein-Barr病毒转化技术建立分泌人单克隆抗体B淋巴细胞系的条件

用以去除T淋巴细胞的E—玫瑰花形成法中所用的羊红细胞(SRBC),其保鲜程度对EB病毒转化B淋巴细胞的结果有一定影响,用保存1天的SRBC者,转化细胞的抗体分泌时间较长(8～10周),并且能形成传代细胞系;用保存17天的SRBC,转化细胞的抗体分泌时间较短,未能无限传代。分离外周血单个核细胞时,保留自体粘附细胞作为饲养细胞,转化的细胞二个月的成活率可达75％,而不保留粘附细胞者,转化细胞成活率仅40％。能产生抗-HBc抗体的EBV转化细胞,自然分泌抗体时间一般不超过10周,高峰期在3周以内,第2周时最高。EB病毒感染后的转化细胞5天开始克隆,一般细胞难成活,在14天克隆的,成活率可达100％。21天开始克隆的转化细胞,免疫球蛋白自然分泌维持12周以上,而在35天开始克隆的细胞,维持分泌的时间都不超过10周。以未经γ线照射的小鼠腹腔渗出细胞作饲养细胞,可支持转化3周的细胞克隆扩增,克隆成活率可达100％,而对照组克隆成活率仅为64.7％。     

Epstein-Barr病毒特异性T细胞对重组痘苗病毒表达LMP和EBNA2的靶细胞的识别

本文用EB病毒转化自体淋巴细胞所建立的类淋巴母细胞系(LCL),以及用EB病毒潜伏感染膜蛋白(LMP)基因和核蛋白-2(EBNA2)基因与痘苗病毒重组的重组病毒(Vac-LMP和Vac-EBNA2)感染的自身纤维母细胞,同时作为刺激细胞和靶细胞,以~(51)Cr释放法检测5例血清中EB病毒VCA—IgA抗体阳性者及1例阴性健康者外周血单个核细胞(PBMC)的特异性T细胞杀伤效应。结果表明,用自身LCL激活的EB病毒特异性T细胞杀伤效应高峰出现在第14～28天;参与杀伤性细胞免疫反应的T细胞亚群主要是T3、T8阳性的细胞毒性T细胞,其对靶细胞的识别及杀伤受HLA-I的限制。用重组牛痘病毒感染的纤维母细胞作靶细胞或刺激细胞,有1例供者可接受LMP,另1例可接受EBNA2的刺激,并对相应的靶细胞产生特异性T细胞杀伤反应,表明EB病毒-LMP和EBNA2可能既是EB病毒特异性T细胞的刺激抗原,又是其识别的靶抗原。     

含HTNV S基因重组痘苗病毒在HFRS患者B淋巴母细胞系中的表达

采用Ficoll密度梯度离心法(淋巴细胞分离液)分离肾综合征出血热(HFRS)患者外周血单个核细胞（PBMC),并用EB病毒(EBV)感染B淋巴细胞,建立永生化的B淋巴母细胞系(B—LCL)。然后,用含汉滩病毒(Hantaan virus,HTNV)S基因的重组痘苗病毒感染B—LCL,应用问接免疫荧光检测核衣壳蛋白的表达。结果表明,B淋巴细胞经EBV感染4周左右,可形成永生化B—LCL。成功转化后的B—LCL,体积增大,且增殖的淋巴细胞积聚成团。汉滩病毒S基因在B—LCL中能有效表达核衣壳蛋白。含S基因的重组痘苗病毒感染的B—LCL可用作HTNV核衣壳蛋白特异性CTL活性研究的靶细胞。     

鼻咽癌患者血清中抗Epstein-Barr病毒早期和晚期膜抗原抗体的检测

对Epstein-Barr(EB)病毒抗原的研究,发现有淋巴细胞确定的膜抗原(Lydma)、早期抗原(EA)、壳抗原(VCA)、核抗原(EBNA)、早期膜抗原(EMA)和晚期膜抗原(LMA)。除了Lydma抗原外,鼻咽癌患者对上述抗原均产生相应的IgG和IgA抗体。因而研究这些抗体,对阐明EB病毒与鼻咽癌的关系及鼻咽癌的早期诊断都十分有价值。     

含HTNV S基因重组痘苗病毒在HFRS患者B淋巴母细胞系中的表达

采用Ficoll密度梯度离心法(淋巴细胞分离液)分离肾综合征出血热(HFRS)患者外周血单个核细胞(PBMC),并用EB病毒(EBV)感染B淋巴细胞,建立永生化的B淋巴母细胞系(B-LCL).然后,用含汉滩病毒(Hantaan virus ,HTNV) S基因的重组痘苗病毒感染B-LCL,应用间接免疫荧光检测核衣壳蛋白的表达.结果表明,B淋巴细胞经EBV感染4周左右,可形成永生化B-LCL.成功转化后的B-LCL,体积增大,且增殖的淋巴细胞积聚成团.汉滩病毒S基因在B-LCL中能有效表达核衣壳蛋白.含S基因的重组痘苗病毒感染的B-LCL可用作HTNV核衣壳蛋白特异性CTL活性研究的靶细胞.     

EB病毒与类风湿关节炎的相关性分析

目的:检测EB病毒VCA-IgA抗体在类风湿关节炎(RA)患者外周血中的表达,探讨EB病毒与RA的相关性.方法:分别采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法和实时定量PCR方法检测EB病毒VCA-IgA抗体和EB病毒DNA载量.同时分析EB病毒VCA-IgA抗体与RA患者的实验室指标抗CCP抗体、类风湿因子(RF)和血沉(ESR)的相关性.结果:223例SLE患者中,32例为EBV-VCA-IgA抗体阳性,259例健康对照者中16例阳性,KA患者阳性率明显高于对照组(14.35%VS 6.17%;P<0.01).RA患者EB病毒栽量也明显高于对照组.EB病毒VCA-IgA抗体阳性与抗CCP抗体、RF和ESR不相关.结论:EB病毒感染与RA相关.EB病毒VCA-IgA抗体阳性者有较高的DNA载量,RA的发病危险性亦高,EB病毒重新活化与RA活动有关.     

EB病毒对脐带血细胞产生免疫球蛋白的影响

探讨EB病毒是否使培养的脐带血B细胞、CD5+B细胞产生免疫球蛋白及具有天然自身抗体性质的免疫球蛋白。无菌采集新生儿脐带血,RosetteSepTM法分离全B细胞,免疫磁珠分离CD5+B细胞,将分离得到的全B,CD5+B,CD5-B三组细胞分别用EB病毒、紫外线照射灭活的EB病毒(UVEBV)、TPA刺激,于培养的第10～30d,每间隔4d分别留取上清,ELISA法检测培养上清中的IgG,IgM及抗角蛋白自身抗体(AKautoAb)IgG,IgM,阳性对照为健康成人血清,阴性对照为未加刺激的培养细胞上清。EB病毒感染的3组细胞于培养的第7d发生转化,14d以后的培养上清中IgM,AKautoAbIgMOD值较对照组显著升高(p<0.01);UVEBV刺激细胞存活15d,其第14d的CD5+B细胞培养上清中IgMOD值高于对照组(p<0.05);TPA及未刺激的细胞存活7d,培养上清中未检测到免疫球蛋白。可见,EB病毒能使培养的脐带血B细胞、CD5+B细胞产生可能具有天然自身抗体性质的免疫球蛋白。     

EB病毒诱导的胸腺恶性T细胞淋巴瘤细胞体外长期培养研究

建立含有EB病毒的T细胞淋巴瘤细胞系,为探讨EB病毒的致瘤机理,研究EB病毒在T细胞淋巴瘤发生过程中的作用提供手段.在TPA协同EB病毒诱导胸腺恶性T细胞淋巴瘤动物模型的基础上,联合应用IL-2,将诱导的肿瘤组织进行体外细胞培养,成功地分离获得一株在体外长期存活的淋巴细胞TET.T细胞亚群分类实验证实TET细胞为CD4阳性的T淋巴细胞,PCR和原位杂交可检测到EB病毒的EBERs、LMP1和BARF1,并有LMP1蛋白的表达.TET细胞的获得,有望在体外建立转化细胞系,为体外研究EB病毒的致瘤机理及防治提供理想的实验材料.     

用重组痘苗病毒感染动物细胞表达的Epstein-Barr病毒膜抗原检查IgA/MA抗体

用EB病毒膜抗原基因重组的痘苗病毒感染动物细胞,其细胞表面可表达EB病毒膜抗原,以此膜抗原作为诊断抗原检测血清中IgA/MA抗体,明显优于常用的B95-8细胞表面膜抗原,从而为研究人群血清抗体反应与鼻咽癌的关系,为鼻咽癌的诊断和普查开辟了新的途径。     

蚕豆萎蔫病毒单克隆抗体制备及检测应用

:用蚕豆萎蔫病毒(BBWV)免疫的BALB/C鼠脾细胞与SP2/0鼠骨髓瘤细胞融合,经筛选克隆,获得6株能稳定传代并分泌抗BBWV单克隆抗体(Mab)的杂交瘤细胞株,单抗腹水ELISA滴度为1:320000～1:640000,各单抗抗体类型均为IgG1。6株单抗与BBWV不同分离物均有反应,而与其它植物病毒无交叉反应。经Westernblot印迹分析表明,此6株单克隆抗体均是针对BBWV447kD的外壳蛋白大亚基的特异性抗体。这是国内外首次报道获得BBWV单克隆抗体     

广谱肾综合征出血热病毒单克隆抗体的A35的生物学性状

具有中和及血凝抑制活性的、能和世界各地分离到的肾综合征出血热病毒(HFRSV)发生反应的、广谱的单克隆抗体(McAb),对HFRSV的诊断和分子生物学研究都有重要意义。 本文着重比较了HFRSV McAbA5、A19、A25-1、A25-7和A35的生物学性状,并观察了对感染动物的实验治疗效果。     

Reactivity of Paul-Bunnell type heterophile antibody in sera from infectious mononucleosis patients with the surface of lymphoid cells carrying Epstein-Barr virus genomes.

The possible presence of Paul-Bunnell (PB) antigen on Epstein-Barr virus (EBV)-transformed lymphocytes were investigated. Of 23 EBV genome-positive lymphoblastoid cell lines tested all but one absorbed PB type antibody from the serum of an infectious mononucleosis patient. The one EBV-negative B cell line tested did not absorb the heterophile antibody. PB antibody, purified by an immunoadsorbent procedure using beef cell antigen, reacted with the EBV producer P3HR-1 cell line in an indirect membrane immunofluorescence test and was shown to be IgM antibody. Titers of heterophile agglutinin and reactivity with the cell surface were reduced to the same degree by absorption with beef cell antigen but not with guinea pig kidney antigen. PB antibody was distinct from IgM antibody against the EBV-determined membrane antigen, since the latter was not absorbed by beef cell antigen. PB antibody was also reactive with other EBV-positive B cell lines (QIMR-WIL, NC-37, and Raji) which were free of surface IgM. No reaction occurred with the nonproducer P3HR-1 line, a null cell line, and two T cell lines. The results suggest the presence of PB antigen on most EBV-transformed B lymphocytes, and its appearance in each of the transformed lymphocytes of patients with acute infectious mononucleosis.     

Epstein—Barr病毒基因组在鼻咽癌组织中转录的特征

对ＥＢ病毒基因在鼻咽癌活检组织细胞内的转录进行了较系统的探测。实验结果表明,ＥＢ病毒基因组在鼻咽癌活检组织中以附加体（Ｅｐｉｓｏｍｅ）形式存在,而其基因转录有如下特征：（１）ＥＢ病毒在所有鼻咽癌组织细胞中都表达ＥＢＮＡ－１,并且此基因转录产物由一个在ＢａｍＨＩ－Ｆ区的启动子（Ｆｐ）驱动;（２）潜伏感染膜蛋白（Ｌａｔｅｎｔ ｍｅｍｂｒａｎｅ ｐｒｏｔｅｉｎ,ＬＭＰ）和末端蛋白（Ｔｅｒｍｉｎａｌ ｐｒ     

几种药物抑制马传染性贫血病毒和人免疫缺陷病毒的实验研究

用马传染性贫血病毒—驴胚肺二倍体细胞(EIAV-DELDC)为实验体系,以细胞中病毒逆转录酶活性及病毒相关抗原的表达为观察指标,检测了叠氮胸苷(AZT)、三氮唑核苷(Ribavirin,病毒唑)、磷羧基甲酸钠(PFA)和苏拉明等4种已知抗人免疫缺陷病毒(HIV-1)药物对马传染性贫血病毒的抑制作用。结果表明,PFA、AZTTP(三磷酸AZT)和苏拉明均能抑制病毒相关抗原的表达,AZT虽无此作用,但能抑制细胞内逆转录酶活性。用~3H-TMP掺入法比较了PFA、AZTTP、苏拉明对体外无细胞系EIAV逆转录酶粗提物和HIV-1基因工程产物逆转录酶活性的抑制作用表明,两种逆转录酶对苏拉明的敏感性相近,而HIV-1逆转录酶对PFA和AZTTP的敏感性较EIAV者高约100倍。又以无细胞系中逆转录酶活性测定法,检测了12种中药提取物的抑制作用,其中小柴胡汤对EIAV和HIV-1逆转录酶活性都有抑制作用,IC_(50)为717μg/ml和700μg/ml(生药浓度)。小柴胡汤对两种病毒感染细胞中抗原的表达和HIV引起细胞病变都有抑制作用,对HIV-1的抑制比EIAV强。这些结果表明,EIAV-DELDC体系可考虑作为抗HIV-1药物筛选模型。     

Establishment and characterization of a malignant lymphoid cell line from a chronic lymphocytic leukemia patient

A long-term culture Epstein-Barr virus (EBV)-negative malignant lymphoid cell line (NAK) was established from a lymph node biopsy of a chronic lymphocytic leukemia patient. This cell line is of particular interest because it grows as an adherent cell line and depends on the presence of autologous conditioned medium for growth. After 6 months of growth in vitro, doubling time and cell cycle parameters were derived. Doubling time was 48 hours with over 45% cycling cells. Cell viability was over 90%. Expression of B-cell markers (CD19 and CD20) and surface immunoglobulin of the original tumor cell biopsy were roughly the same as in passage 14 (3 months in culture), including the expression of the original patient idiotype and IgM-lambda. Furthermore, binding of antiidiotypic antibodies was only slightly decreased at passage 14. Cytogenetic studies of chromosomal abnormalities in the primary tumor tissue and in later passages indicated similar abnormalities, with no translocations t(8;14), t(14;22), or t(2;8). However, frequent trisomies, deletions, and t(1;4) translocations were observed. Negative results for EBV nuclear antigen indicate that this cell line is an EBV-negative cell line.