人心肌肌凝蛋白轻链(CMLC)的分离及临床应用

从人心肌提取了肌凝蛋白,并检测了其ATP酶活力的稳定性。用SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)法纯化并鉴定了人心肌肌凝蛋白轻链(CMLC),结果表明CMLCI的分子量为27000;CMLCⅡ的分子量为20 000。它们的紫外吸收光谱显示A260>A280,表明其高含苯丙氨酸。制备了兔抗人CMLC抗血清,免疫双扩散的结果表明,纯化后的CMLC与肌凝蛋白有相同的抗原性。用阳性的兔抗人CMLC抗血清为对照作ELISA实验,不仅从免疫学角度进一步证实了人心肌CMLC的特性且为其在临床诊断应用提供了可靠的方法。     

亲和层析法分离人心脏特异性肌钙蛋白Ⅰ(CSTnⅠ)

在Ca~(2+)存在下,肌钙蛋白C(TnC)和肌钙蛋白Ⅰ(TnⅠ)可于高浓度的尿素溶液中形成稳定的复合体,而该复合体又能被EGTA解离。并且TnC和TnⅠ的Ca~(2+)依赖性结合反应没有种间或者肌肉类型间的特异性。将提纯的兔快肌TnC和活化的琼脂糖凝胶进行偶联,制备TnC-Sepharose 4B亲和层析柱,用来从人心肌中直接提纯心脏特异性肌钙蛋白Ⅰ(CSTnⅠ)。SDS-PAGE测得其分子量为29kD左右。对其氨基酸组成亦进行了分析。     

人甲状旁腺激素(1-34)二联体与人血清白蛋白融合蛋白的构建及表达

构建人甲状旁腺激素(1-34)二联体与人血清白蛋白融合蛋白的表达载体,并表达得到该融合蛋白.通过设计强特异性的引物,利用重叠PCR技术,定向定量的拼接得到hPTH(1-34)二联体-HSA融合蛋白的基因;将构建好的融合基因插入表达载体pPIC9K,大量扩增重组质粒,并用Sal I线性化,电击转化毕赤酵母GS115,经组氨酸缺陷和G418抗性双重筛选得到阳性转化子;挑选阳性转化子进行甲醇诱导表达.测序结果表明得到的重组质粒pPIC9K-hPTH(1-34)二联体-HSA与目标设计完全一致;基因组PCR鉴定结果证明成功构建了hPTH(1-34)二联体-HSA融合基因的毕赤酵母(GS115)表达系统;SDS-PAGE电泳表明融合蛋白获得了表达,尿微量白蛋白试剂盒测定甲醇诱导表达3d后融合蛋白的产量为127 mg/L.     

Percoll等密度梯度离心法分离利什曼原虫细胞核

分离纯化锥虫类原生动物细胞核存在着许多困难,阻碍了人们对这类单细胞生物的细胞核在各方面作进一步研究。本文提出一个从破碎细胞开始的分离核的完整程序。采用起始密度为1.083的Percoll工作液作等密度梯度离心,获得了纯度较高的利什曼原虫(Leishmania gerbilli)细胞核。经测定,L.gerbilli细胞核在Percoll中的浮力密度为1.048—1.051。     

用人胚肺二倍体细胞株分离一株甲型肝炎病毒

自甲型肝炎患者粪便中分离到一株甲型肝炎病毒(TZ-84)。病毒不产生细胞病变,胞浆中有颗粒性荧光。细胞中的病毒抗原能被抗甲肝病毒抗体阳性血清所中和。 TZ-84株病毒耐酸,耐乙醚。免疫电镜见有大量直径27～30mm的甲肝病毒颗粒,以空心为主。将其接种细胞后的黑暗期随传代而缩短,病毒滴度则随传代而增加。将细胞粉碎后获得的病毒。ELISA滴度为1:16。用其检测45份人血清中抗HAV-IgM抗体,并与Abbott ELISA药盒比较,符合率为91.1％,敏感度为87.1％。     

草鱼垂体生长激素分离纯化及其抗体制备的研究

应用碱性抽提,亲和层析,凝胶过滤和离子交换层析等技术从草鱼垂体中分离提纯出纯度高的草鱼生长激素（ｇｃＧＨ）用酶联免疫吸附测定法（ＥＬＩＳＡ）检测表明草鱼ＧＨ与大马哈鱼ＧＨ抗血清具有明显的免疫交叉反应,而与大马哈鱼催乳素（ＰＲＬ）抗血清没有交叉反应,聚丙烯酰胺凝胶电泳表明草鱼ＧＨ为单一蛋白带,其分子量约为２２５００道尔顿,等电聚焦揭示出草鱼ＧＨ主要由等电点为４．７和５．０的两条蛋白带组成,用纯化的草     

利用IL－3／GM－CSF融合蛋白（PIXY－321）扩增脐血造血细胞方法的初步建立

利用单克隆抗体免疫磁珠吸附方法分离脐血ＣＤ３４＋细胞,并观察了ＩＬ３／ＧＭＣＳＦ融合蛋白（ＰＩＸＹ３２１）对脐血ＣＤ３４＋细胞的刺激作用。ＰＩＸＹ３２１对脐血ＣＤ３４＋细胞扩增作用大于ＩＬ３和ＧＭＣＳＦ单独及联合应用。在液体培养条件下,每毫升２０ｎｇＰＩＸＹ３２１可有效地扩增脐血造血祖细胞,适宜扩增时间为５－８天,扩增后造血祖细胞的数量可达扩增前的８－１０倍,从而初步建立了一种简单可行的脐血造血细胞扩增方法。     

维胺酸对体外转化人支气管上皮细胞及体内构建人支气管上皮组织的抑制作用

癌前改变是肿瘤演变过程中的关键阶段。许多研究显示维甲类化合物对动物肿瘤及体外恶性细胞系具有抑制作用,但尚未见其对肺癌前病变作用的实验室研究报道。人类肺癌的绝大部分起源于支气管上皮,为研究维胺酸对体外转化人支气管上皮M细胞系以及在大鼠气管构建后移植到裸鼠体内生长的具有癌前病变特点的人支气管上皮组织的抑制作用,采用上皮细胞无血清培养技术,人支气管上皮组织大鼠气管内构建／裸鼠皮下移植生长技术,流式细胞学分析,免疫组化、凋亡细胞原位末端标记以及病理学检查等研究方法发现,维胺酸可抑制体外培养的转化人支气管上皮细胞的增殖,使S期细胞比例下降,以及细胞增殖标志Ki-67、mpm-2阳性反应细胞比例下降;明显诱导细胞凋亡。裸鼠腹腔注射给予维胺酸也可使大鼠气管内构建后移植到裸鼠体内生长的癌前期人支气管上皮组织的生长率明显降低,病变程度明显减轻;同样可以诱导细胞凋亡。研究结果提示,维胺酸对体外培养的转化人支气管上皮细胞系及大鼠气管构建／裸鼠体内移植生长的人支气管上皮组织均有明显的抑制作用,是有希望的肺癌化学预防药物。     

乙型肝炎血源疫苗不同免疫剂量阻断新生儿母婴传播的效果观察

用乙型肝炎血源疫苗,按0、1、6程序,分5种不同剂量免疫HBsAg和HBeAg均阳性(双阳性)母亲和仅HBsAg阳性母亲的新生儿,井于首针后8～12个月采血,用放射免疫(RIA)法检测他们的HBsAg和抗-HBs、抗-HBc,以比较不同剂量乙肝疫苗阻断母婴传播的效果。结果,10μg×3组对双阳性和仅HBsAg阳性母亲的新生儿的保护率,分别是42.9％和53.5％;20μ×3组为67.4％和69.7％;30μg、10μg、10μg组为75.6％和79.8％,30.20、20μg(含30、30、10μg)组为80.2％和81.5％;30μg×3组为82.3％和83.7％。随疫苗剂量增加保护率逐渐增加,抗-HBs阳转率也是如此。     

Purification of human interleukin 1

Interleukin I (IL-1) is a lymphocyte stimulant released by human monocytes cultured for 18–24 hours in tissue culture medium containing 5% serum and the non-specific immunostimulant lipopolysaccharide (LPS). Human IL-1 is found in the conditioned medium in a low molecular weight (～ 13,000) and a high molecular weight (～ 85,000) form. The high MW activity may result from the formation of a complex between IL-1 and serum constituents. During the course of purification, the low MW IL-1 activity is often recovered in a high MW form. Hollow fiber diafiltration and membrane ultrafiltration has been found to rapidly separate low MW IL-1 from all measurable protein with a yield of 4% of the original activity. The IL-1 which converts to the high MW form during the purification is recoverable, 21% of the original activity, but contains small amounts of serum proteins. Isoelectric focusing (IEF) of the low MW IL-1 resulted in a very highly purified sample which was analyzed by polyacrylamide gel electrophoresis (PAGE). Utilizing a new staining procedure which detects less than 1 ng of protein per band, the IEF-purified IL-1 revealed trace quantities ( < 1 ng) of a slowly migrating protein similar to immunoglobulin and no other bands. There were no bands which corresponded with the known electrophoretic mobility of IL-1. Since the samples applied to the gel contained significant biological activity, this result implies that human IL-1 is biologically active in picogram quantities.     

温度和食物对稻虱缨小蜂发育、存活和繁殖的影响

在白背飞虱(Sogatella furcifera(Hovàrth))卵内,稻虱缨小蜂(Anagrus nilparvatae Pang et Wang)的发育起点温度为10.6℃,有效积温为162.3日度,随着温度上升,发育加快;寿命(y_1,D_(10.4)~0C)、产卵量(y_2,粒/♀)、产出卵率则在适宜温度范围(23—26℃)内最大,高低温区内均呈下降趋势,其方程分别为:y_1=exp(-0.04187+0.3612x-7.4654×10~(-3)x~2),y_2=exp(-1.9539+0.4563x-0.01001x~2),式中x为温度。温度对未产出卵量影响不显著;对子代雌性比的影响也不显著,其平均值为0.7631。温度主要通过对产卵量和产卵速率来影响繁殖力,理论上27.3℃时周限增长率λ最大,达1.2374倍/天。成虫期供蜜加水时的产卵量、产出卵率和寿命显著比仅供水时的高或长。此研究为预测害虫种群发展,充分利用天敌资源,达到综合管理害虫提供了科学依据。     

江西鄱阳湖湖口水域船舶通行对长江江豚发声行为的影响

江西鄱阳湖是长江江豚(Neophocaena phocaenoides)的重要栖息地, 湖中栖息着约400 头江豚。多年的观察表明, 船舶交通是鄱阳湖中江豚面临的重要威胁之一。为了评估船舶通行对长江江豚发声行为的影响,尤其是了解船舶通行期间及其前后江豚的发声和行为特征, 作者于2007 年6 月27 日—7 月1 日在江西鄱阳湖湖口水域采用固定被动声学系统, 即安装在监测点(29°42′38″ N, 116°11′11″ E)的一套水下声学数据记录系统, 对周边通行船舶的水下噪声及江豚声纳信号脉冲事件进行了定点监测和记录, 并对所记录的数据进行了定量和统计分析。在整个监测的109h 中, 声学记录仪共记录到船舶494 艘, 江豚声纳脉冲串信号13413个。船舶出现与江豚出现存在弱的负相关关系(r = -0.029, N = 6550, P Z = -0.370, P> 0.05); 当有船舶经过时, 江豚的发声频次显著降低(Z = -10.050, P Z = -0.275, P> 0.05; Z = -0.119, P> 0.05); 船舶通行之前和之后, 江豚的发声频次、脉冲串持续时间、脉冲间间隔的差异性均不显著(χ2= 5.255, P> 0.05; χ2= 3.511, P> 0.05; χ2= 5.155, P>0.05); 在船舶经过时, 江豚对游动方向没有明显的选择性(χ2= 0.861, P> 0.05)。基于分析结果推测, 在狭窄水域中江豚躲避船舶干扰通常采取“临时性”策略, 而非长距离逃避。由于鄱阳湖湖口水域水道相对狭窄, 尽管研究的结果表明江豚对船舶有一定的敏感反应, 但是在相对狭窄的水域中, 江豚躲避船舶的行为难以充分表现。另外, 江豚对该水域中高密度航行船舶的噪声可能存在一定的“适应性”, 导致当遭遇船舶时, 江豚的声行为反应不十分强烈。因此, 建议有必要在不同尺度的水体中采用声学数据记录仪继续开展类似的观察,以进一步了解江豚对船舶的行为响应, 尤其是观察江豚躲避船舶的行为及发声特征