乙酰胆碱对人胃粘膜上皮细胞和胃腺癌细胞 N受体β亚单位的影响

目的:了解乙酰胆碱(ACh)对人胃粘膜上皮细胞和胃腺癌细胞烟碱型胆碱能受体(N受体)β亚单位的影响及两者间的差异.方法:采用免疫组化法检测培养的人胃粘膜上皮细胞和胃腺癌细胞膜上N受体β亚单位的数量、数密度和面密度的变化.结果:胃腺癌细胞N受体β亚单位数量、数密度明显高于而面密度低于胃粘膜上皮细胞(P＜0.05).10-6mol/L ACh使胃粘膜上皮细胞N受体β亚单位的数目、面密度和数密度增加(P＜0.01),该作用未被阿托品阻断.两种浓度的ACh对胃腺癌细胞N受体β亚单位未见显著性影响.结论:低浓度ACh使培养的胃粘膜细胞N受体失敏,但对胃腺癌细胞N受体β亚单位的作用不明显.     

乙酰胆碱对人胃粘膜上皮细胞和胃腺癌细胞N受体γ亚单位的影响

目的:了解Ach对人胃粘膜上皮细胞和胃腺癌细胞烟碱型胆碱能受体(nAchRs) γ亚单位的影响及两者间的差异.方法:采用免疫组化法检测培养的人胃粘膜上皮细胞和胃腺癌细胞膜上nAchRs γ亚单位的数量.结果:Ach使胃粘膜上皮细胞nAchRs γ亚单位的数量、数密度和面密度显著增加(P<0.01),但对胃腺癌细胞nAchRs γ亚单位无影响.结论:胃粘膜上皮细胞nAchRSs对不同浓度的Ach反应性不同,胃腺癌细胞nAchRs γ亚单位对Ach的敏感性降低.     

消化系统(1)——消化管电镜图象

图1.胃粘膜表面扫描电镜(SEM)图像:图为人胃粘膜表面,衬有单层柱状上皮细胞,且被纵横交错的小沟分为许多小区(胃区),整个胃粘膜分布着许多胃小凹(↑)。每一小的半球状隆起,为一柱状上皮细胞的顶部。×4,500 图2.胃粘膜纵断面SEM图像:图下方为粘膜表面,可见大量与粘膜表面呈垂直方向的胃腺。这些胃腺多呈单管状平行排列。Sm为粘膜下层。×300     

胰岛素增强EGF和TGF_α的促胃粘膜细胞生长作用

上皮生长因子(EGF)和转移生长因子(TGFα)是两种调节胃上皮细胞生长的因子。EGF/TGFα的mRNA已用免疫定位于胃腺上皮细胞。它们可能以局部或旁分泌方式作用于邻近的胃粘膜细胞。另外一些资料显示,胰岛素或胰岛素样生长因子在刺激胃肠道生长中起直接的或允许作用。     

子宫腺肌病中异位和正位子宫内膜血管发生的研究

目的探讨子宫腺肌病中异位和正位内膜组织中血管内皮生长因子(VEGF)的表达及微血管密度(MVD)与发病机制的关系.方法采用免疫组织化学技术检测21例正常子宫内膜(对照组)和38例子宫腺肌病(疾病组)异位内膜及正位内膜中VEGF的表达,利用Ⅷ因子相关抗原标记血管内皮细胞,再应用计算机图像分析系统分析VEGF免疫染色密度值及计数切片中微血管(20×视野).结果疾病组异位内膜腺上皮细胞及间质细胞中VEGF的表达明显高于对照组腺上皮及间质细胞(P<0.01).疾病组正位内膜腺上皮细胞中的VEGF的表达亦高于对照组(P<0.05).疾病组异位内膜中的平均微血管密度明显高于正位内膜及对照组(P<0.05).VEGF与MVD表达呈明显正相关(P<0.01).结论子宫腺肌病异位和正位内膜中VEGF表达的明显增高及局部微血管密度的明显增加,可能导致局部新生毛细血管的增多,从而促进子宫内膜在子宫肌层内异位种植和生长.     

三氧化二砷对人胃腺癌细胞株SGC-7901细胞核及线粒体作用的实验研究

目的:研究三氧化二砷(As203)对人胃腺癌细胞株SGC-7901的生物效应及其对线粒体和半胱氨酸蛋白酶家族-3(caspase-3)的作用.方法:通过MTT比色实验检测不同浓度As2O3对该细胞株的生长抑制作用;经Hoechst 33258染色后用荧光显微镜观察细胞核的形态变化;经过细胞线粒体膜电位检测区分凋亡细胞与正常细胞,并经流式细胞仪分析;caspase-3吸光度检测法测定As2O3组caspase-3的活化程度.结果:As2O3明显抑制SGC-7901人胃腺癌细胞的生长,抑制作用的强度呈时间依赖性(方差分析,P<0.01);Hoechst 33258染色后荧光显微镜观察细胞核固缩碎裂边集呈强蓝色荧光;线粒体膜电位检测法,流式细胞仪检测法,caspase-3吸光度检测法均检测到胃腺癌细胞的凋亡.结论:As2O3破坏线粒体跨膜电位和激活caspase-3活性可能是As2O3诱导人胃腺癌SGC-7901细胞凋亡的重要机制.     

纳米四氧化三铁双歧杆菌LTA对实验性胃癌增殖及凋亡的影响

目的 观察纳米四氧化三铁(Fe3O4)双歧杆菌脂磷壁酸(lipoteichoicacid,LTA)对实验性胃癌增殖细胞核抗原(PCNA)和bcl-2、bax蛋白表达的影响.方法 用胃癌BGC-823细胞裸鼠皮下移植瘤模型,观察不同浓度纳米Fe3O4双歧杆菌LTA组与LTA组及环磷酰胺组移植瘤的生长情况,免疫组化法检测bcl-2和bax及增殖细胞核抗原(PCNA)的表达.结果 纳米Fe3O4双歧杆菌LTA各剂量组胃癌移植瘤PCNA阳性细胞面密度以及bcl-2阳性细胞面密度均显著低于肿瘤对照组(P<0.01),而bax 的阳性细胞面密度显著高于肿瘤阴性对照组(P<0.01).结论 纳米四氧化三铁LTA能明显降低人胃癌移植瘤的增殖活性及增强bax的蛋白表达,同时使其bcl-2基因蛋白的表达下调.     

RhoC、Rho-GDIa在肺癌细胞系中过表达并与转移相关

目的 分析Rhoc及其调节蛋白GDP解离抑制因子α(Guanine dissociation inhibitor,GDIα)在肺癌细胞中的表达及其与肺癌细胞转移能力间的关系.方法 应用Western blot、RT-PCR分别检测正常支气管上皮细胞、不同的肺癌细胞系中的RhoC、Rho-GDIa蛋白及RNA的表达.结果 RhoC、Rho-GDIα在人支气管上皮细胞、肺腺癌细胞系、肺巨细胞癌细胞系均有表达,免疫荧光显示均表达于细胞浆.RhoC、Rho-GDIα在肺癌中的表达高于人支气管上皮细胞.在高转移能力的肺巨细胞癌亚系BEl RhoC、Rho-GDIα的表达均高于低转移能力的肺巨细胞癌亚系LH7.结论 RhoC、RhoGDIα在肺癌细胞系中过表达并与转移能力相关.     

RhoC、Rho-GDIα在肺癌细胞系中过表达并与转移相关

目的 分析Rhoc及其调节蛋白GDP解离抑制因子α(Guanine dissociation inhibitor,GDIα)在肺癌细胞中的表达及其与肺癌细胞转移能力间的关系.方法 应用Western blot、RT-PCR分别检测正常支气管上皮细胞、不同的肺癌细胞系中的RhoC、Rho-GDIa蛋白及RNA的表达.结果 RhoC、Rho-GDIα在人支气管上皮细胞、肺腺癌细胞系、肺巨细胞癌细胞系均有表达,免疫荧光显示均表达于细胞浆.RhoC、Rho-GDIα在肺癌中的表达高于人支气管上皮细胞.在高转移能力的肺巨细胞癌亚系BEl RhoC、Rho-GDIα的表达均高于低转移能力的肺巨细胞癌亚系LH7.结论 RhoC、RhoGDIα在肺癌细胞系中过表达并与转移能力相关.     

烟碱型乙酰胆碱受体及其亚单位的结构功能

烟碱型乙酰胆碱受体是配体门控的离子通道蛋白,每个受体由5个亚单位组成,每个亚单位具有4个跨膜α螺旋结构域。通道孔由5个亚单位的M2结构域(α螺旋)环绕围成,它们放射状地排列,使通道孔在膜中部逐渐变细。另外15个α螺旋相互盘绕,构成通道的外环。至今已确认了17种亚单位,它们由一个共同起源的基因家族编码,在中枢神经系统、周围神经系统和肌肉组织广泛表达。众多的亚单位,再加上组织表达的特异性导致受体类型的多样性,结果使该受体具有广泛的生理、药理特性和功能。进年来,基因敲除等现代遗传操作技术提供了在体内研究各类型受体的有效手段,使人类对该受体及亚单位的结构和功能有了长足的认识。     

TGFα对肝癌细胞SMMC-7721增殖和ERK蛋白的影响

目的观察TGFα诱导肝癌细胞增殖和对信号传导因子ERK蛋白表达的影响.方法应用MTT比色法观察不同浓度TGFα对肝癌细胞SMMC-7721的增殖作用.用流式细胞术检测TGFα对肝癌细胞凋亡和细胞周期的影响.用免疫组化方法检测TGFα对ERK蛋白表达影响.结果 1μg/L TGFα作用24h SMMC-7721细胞增殖率为3%(P>0.05);作用48h后增殖率达16%(P<0.05).5μg/L TGFα作用24h增殖率达18%(P<0.05);作用48h增殖率达24%(P<0.01),增殖效应呈时间、剂量依赖性.5μg/L TGFα作用肝癌细胞48h能抑制肝癌细胞凋亡,使细胞滞留于G2M期,增加PI.5μg/L TGFα能促进ERK蛋白在细胞核中的表达.结论 TGFα能促进肝癌细胞增殖,增加ERK蛋白在细胞核中的表达.     

胰岛素受体的研究进展

胰岛素受体是靶细胞膜表面固有的糖蛋白、由两个α亚单位和两个β亚单位组成、亚单位间由二硫键连结的大分子物质。其中α亚单位为结合亚单位,β亚单位为效应/调质亚单位。胰岛素与受体结合后引起β亚单位磷酸化,可能是胰岛素发挥一系列生理功能的早期现象。受体与胰岛素结合后一起内移,在细胞内分别以不同途径代谢。激素-受体复合物的内移及受体降解使细胞表面受体数减少,这是胰岛素对受体数进行减数调节的原因。     

树突状细胞C型凝集素DC-SIGN在人肾炎组织和肾小管上皮细胞表达

DC-SIGN(DC-specificICAM-grabbingnon-integrin,亦称CD209)属树突状细胞(DC)表面C型凝集素的膜蛋白。作为DC黏附及模式识别受体,其参与介导了DC的炎症组织迁移,识别捕获病原微生物,以及随后激活静息T细胞启动的免疫应答。为此观察了DC-SIGN及DC-SIGN DC在肾炎患者肾组织中表达和分布,以及DC-SIGN在炎性状态下培养人肾小管上皮细胞表达,探讨与肾小管间质炎症病变和损伤的关系。结果显示,DC-SIGN在正常肾组织基本不表达,而在肾炎早期即以肾小管上皮细胞为主表达上调,且随肾小管间质病变程度加重表达增强(P<0.01),与肾小管间质病变程度明显相关(P<0.01)。此外,DC-SIGN在经TNF-α刺激炎性状态下的人肾小管上皮细胞也明显表达。进一步发现,DC-SIGN DC在肾炎早期以肾间质为主分布聚集,也随肾小管间质病变程度加重明显增多(P<0.01),与肾小管间质病变程度显著相关(P<0.01),也与DC-SIGN表达相关联(P<0.01)。另外,DC-SIGN DC在肾小管间质分布数量与肾炎患者肾功能改变明显相关(P<0.05)。研究结果提示,DC-SIGN也是肾小管间质早期炎症的启动参与因素,其介导DC可能也参与了人肾炎肾小管间质的免疫损伤机制。     

胆固醇结石患者肝脏LCRα基因的蛋白差异表达及意义

目的:研究胆囊胆固醇结石患者肝脏的核受体基因:肝脏x受体a(liver Xreceptor a,LXRα)、法尼醇受体(famesoid Xreceptor,FXR)、人类固醇异生物受体(steroid xenobiotic receptor,SXR)及肝受体同类物1(liver receptor homolog-1,LRH-1)的蛋白表达,探讨胆固醇结石病的发病机理.方法:23例胆囊胆固醇结石患者(胆石组),12例无胆石症的胆囊息肉患者为对照(对照组).测定胆石胆固醇成分和胆汁脂类成分(胆固醇、磷脂和胆汁酸),并计算胆汁总脂和胆汁胆固醇饱和指数.Western-Blot法测定肝脏LRH-1、FXR、SXR及LXRa基因的蛋白表达量.结果:胆石组胆汁呈胆固醇过饱和;胆汁胆固醇摩尔百分比浓度较对照组升高,P<0.01;胆汁总脂较对照组明显下降,P<0.05;胆汁中胆汁酸和磷脂成分2组比较差异均无统计学意义(P>0.05).胆石组LRH-1蛋白表达高于对照组(0.88±0.05vs 0.69±0.03),P<0.05,LXRa、FXR和SXR表达2组差异无统计学意义(P>0.05).结论:人类肝脏LRH-1的蛋白表达增高与胆囊胆固醇结石形成有关.     

HIF-1α的表达在肝移植后肝癌复发与转移中的意义

目的:探讨肝癌组织中低氧诱导因子-1α(HIF-1α)表达与肝癌行肝移植治疗后肿瘤复发与转移之间的关系.方法:选择肝癌行全肝移植患者45例,应用免疫组化方法检测其切除的肝癌组织、癌旁组织中HIF-1α的表达,分析其表达与移植后肝癌复发与转移之间的关系和意义.结果:肝癌组织中HIF-1α阳性表达率明显高于癌旁组织(X<'2>=6.39,P<0.01).HIF-1α在肝癌组织中的表达与肿瘤直径、TNM分期、有无淋巴结转移、有无门静脉癌栓及肿瘤播散灶密切相关(P<0.01).复发转移组和未复发转移组HIF-1α阳性表达率比较,差异存在显著性(X<'2>=8.46,P<0.01).Cox回归多因素分析表明HIF-1α高表达是影响肝癌患者肝移植后肿瘤复发和转移的独立预后因素(P<0.01).结论:HIF-1α蛋白有望成为一个预测肝癌患者肝移植后复发和转移的重要指标.     

左旋千金藤啶碱D1激动作用增加6-OHDA损毁大鼠的DARPP-32磷酸化效应

为了进一步阐明SPD对大鼠纹状体突触后D1受体的激动作用特性,本文应用反磷酸化在体内测定及放射配体结合方法,分别观察SPD对6-OHDA损毁大鼠纹状体DARPP-32体内磷酸化作用及突触后D1受体密度的影响.结果表明:皮下给予SPD(20,40 mg/kg,21 d),损毁侧纹状体DARPP-32体外[32P]的掺入量较健侧下降50%(P<0.01).换言之,损毁侧纹状体内DARPP-32的磷酸化程度增加了.然而,SPD使损毁导致D1受体上调的作用减弱(Bmax 从385.0±26.1 fmol/mg 降至319.7±20.1 fmol/mg水平).因此,SPD激动D1受体,使6-OHDA损毁大鼠纹状体内DARPP-32磷酸化作用加强,而受体密度减少.这是SPD调节脑内D1受体信号转导功能的重要机制.     

实验性哮喘时肺的α-受体增加和β-受体减少

近些年来不断报道α-受体和β-受体在哮喘发病中的作用,提出了哮喘发病的β-受体阻断和α-受体功能亢进的假说。最近,P.J.Barnes 等发现实验性哮喘动物肺中α-受体增加,β-受体减少,进一步支持上述假说。实验性哮喘动物模型系用卵蛋白致敏豚鼠后,再用卵蛋白反复攻击所造成,均有喘、咳、呼吸困难、青紫和气道高敏性等症状。取这种豚鼠和正常豚鼠的肺制备匀浆,用放射标记结合分析法测定肺匀浆中的α-受体和β-受体的数量及它们的比例。还测定肺匀浆中腺苷酸环化酶的活性,以确定β-受体对β-受体激动剂的敏感性。结果发现,实验性哮喘动物肺匀浆中α-受体数量为对照动物的两倍(P<0.001),β-受体数量则低于对照动物(P<0.05)。在实验性哮喘动物肺匀浆中,α:β受体结合部位的比例为1:12,在对照动物则为1:30。     

人脐血CD34+细胞来源的树突状细胞疫苗在SCID小鼠体内的抗肿瘤免疫作用

目的观察脐血CD34 干细胞来源的树突状细胞(dendritic cells, DC)疫苗在严重联合免疫缺陷(severecombined immunity deficiency,SCID)小鼠体内对人肝癌细胞的免疫治疗和免疫保护作用.方法采用微磁珠分选系统(Mini MACS)从脐血单个核细胞中分离CD34 干细胞.重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(recombined human granulocyte-macrophage colony-stimulating factor, rhGM-CSF)、重组人肿瘤坏死因子(recombined human tumor necrosis factor,TNF)-α诱导脐血CD34 细胞向DC分化,相差显微镜下观察DC分化过程中细胞的形态及数量变化.用人肝癌细胞BEL-7402裂解物冲击DC制备DC疫苗.在SCID小鼠体内观察DC疫苗致敏的淋巴细胞对人肝癌细胞的免疫治疗和免疫保护作用.结果脐血CD34 细胞在细胞因子诱导下,细胞形态由小变大、由圆形逐渐变为不规则形;细胞分裂扩增过程中,数量逐渐增多,形成细胞集落.经过细胞因子联合诱导2周的DC胞质突起丰富,具有典型的树枝状形态.在体内的抗肿瘤实验中,经DC疫苗致敏的人外周血淋巴细胞治疗荷瘤小鼠,肿瘤生长速度、瘤体积和重量明显小于未致敏淋巴细胞治疗组(P<0.05).与未致敏淋巴细胞免疫组和DC疫苗致敏的淋巴细胞治疗组比较,经DC疫苗致敏的淋巴细胞免疫SCID小鼠,肝癌细胞攻击后,肿瘤的发病率降低(P<0.05),发病潜伏期延长(P<0.01),肿瘤体积和重量减小(P<0.05).结论人脐血CD34 细胞来源的DC疫苗能在一定程度上抑制人肝癌细胞在小鼠体内的生长,抵抗肿瘤细胞的攻击,对机体具有相应的抗肿瘤免疫治疗和免疫保护作用.     

自发性高血压大鼠中血小板源生长因子-AA及其受体表达与血管平滑肌细胞增殖的关系

为明确血小板源生长因子-AA(platelet derived growth factor-AA,PDGF-AA)及PDGF-α受体在自发性高血压大鼠(spontaneously hypertension rats,SHR)血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)增殖中的作用,采用Western blot、 [3H]TdR及 [3H]Leu掺入率等方法,观察在SHR和WKY大鼠VSMC中PDGF-AA及PDGF受体表达的差异; 在PDGF-AA刺激下VSMC增殖和肥大反应的变化.结果显示,SHR-VSMC 中PDGF-AA、PDGF-α受体蛋白表达明显高于WKY-VSMC(P<0.01),而PDGF-β受体蛋白表达在SHR-VSMC与WKY-VSMC无明显差异; 在不同浓度PDGF-AA刺激下,增殖细胞核抗原(PCNA)及3H掺入率在SHR-VSMC明显增强且呈剂量依赖性增加(P<0.01).本研究表明PDGF-A链及其α受体的自泌性增高,可能是导致SHR-VSMC异常增殖和肥大,并导致血管构型变化的重要原因之一.     

高密度脂蛋白减轻小鼠内毒素性急性肺损伤

高密度脂蛋白(high density lipoprotein, HDL)是一种血浆含量丰富的脂蛋白,通常认为它可在体内发挥抗炎作用,能够与内毒素结合而抑制其生物活性.为探讨人HDL对内毒素性急性肺损伤的影响,将昆明小鼠分为假手术对照组、脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)组、HDL组和LPS HDL组,腹腔注射LPS(10mg/kg体重)复制内毒素性急性肺损伤模型,于腹腔注射LPS 30min后经尾静脉给予人血浆HDL(70mg/kg体重),6h后结束实验.处死动物前抽取动脉血测定血气变化(PaO2, pH, PaCO2).处死后行支气管肺泡灌洗,计数灌洗液中白细胞(white blood cell, WBC)数量,测定蛋白含量和乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase, LDH)活性,并取肺组织进行病理学观察,测定肺组织湿/干重比值、丙二醛(malondialdehyde, MDA)含量、髓过氧化酶(myeloperoxidase, MPO)活性和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor α, TNF-α)含量.结果显示:(1)HDL改善小鼠肺换气功能,显著降低LPS所致的PaO2、pH的降低和PaCO2的增高(P<0.01);(2)HDL显著抑制LPS所致的肺泡灌洗液中WBC数量、总蛋白浓度和LDH活性的增高(P<0.01),降低肺组织湿/干重比值、MPO活性、MDA和TNF-α含量(P<0.05, P<0.01);(3)病理形态学分析及评分显示,HDL治疗组小鼠在出血、肺水肿及肺组织内中性粒细胞浸润的程度均低于LPS所致肺损伤组(P<0.01).结果提示,HDL可减轻小鼠内毒素性急性肺损伤.