氢化可的松对奶牛乳腺上皮细胞乳脂肪合成的影响

该研究旨在探讨不同浓度的氢化可的松处理对奶牛乳腺上皮细胞(bovine mammary gland epithelial cells,BMECs)增殖、甘油三酯(triglyceride,TAG)合成、脂滴的形成以及乳脂肪合成相关基因表达的影响。采用单因子随机实验设计,以不添加氢化可的松组为对照组,处理组的氢化可的松浓度分别为1、10、100、1 000 ng/m L。各组细胞处理24 h后,通过四甲基偶氮唑盐(thiazoly blue tetrazolium,MTT)比色法检测细胞活力;利用试剂盒检测胞内TAG的含量;使用油红O染色法检测细胞内乳脂球的合成;采用实时定量PCR法检测乳脂合成相关基因的表达。结果表明,氢化可的松处理对BMECs增殖无显著影响(P0.05);与对照组相比,100 ng/m L氢化可的松组能够显著提高TAG的合成量、增加胞内脂滴的形成以及过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisome proliferator activated receptorγ,PPARγ)的基因表达(P0.05);10 ng/m L和100 ng/m L氢化可的松组能够显著上调乙酰辅酶A羧化酶(acetyl-Co A carboxylase,ACC)、二酰甘油酰基转移酶(diacylgycerol acyltransferase,DGAT)的基因表达(P0.05);1、10、100 ng/m L氢化可的松组能够显著上调脂肪酸合酶(fatty acid synthase,FASN)基因表达(P0.05),且1 ng/m L的促进效果最明显,而1 000 ng/m L则显著抑制了FASN的表达(P0.05)。该研究结果说明,氢化可的松能够促进BMECs乳脂肪合成,且100 ng/m L的剂量对乳脂合成的促进效果最佳。     

Pten对奶牛乳腺上皮细胞活力及乳蛋白合成的影响

Pten作为抑癌基因,参与调控细胞生长、粘附、凋亡以及其它细胞活动.目前,国内外关于Pten在奶牛乳腺发育过程中表达及调节的研究鲜有报道.为了揭示Pten的表达与奶牛乳腺发育与泌乳之间的关系,本研究应用qRT-PCR技术检测Pten在不同泌乳时期和不同乳品质的奶牛乳腺组织中的表达差异,进而应用脂质体转染方法,通过siRNA介导的RNA干扰技术改变Pten基因在奶牛乳腺上皮细胞中的表达量,CASY法检测细胞活力,用ELISA试剂盒检测细胞分泌β-酪蛋白的含量,采用qRT-PCR、Western 印迹等技术检测Pten对奶牛乳腺上皮细胞中乳蛋白相关信号通路基因表达的影响.结果显示,泌乳期高乳品质奶牛乳腺组织中Pten表达水平显著低于泌乳期低乳品质及干乳期奶牛;Pten基因沉寂后,细胞活力提高,β-酪蛋白质量浓度增加,CSN2、AKT、MTOR、STAT5表达量增加.研究表明,Pten可通过抑制细胞活力和乳蛋白分泌而影响泌乳.     

硬脂酸及血清对奶牛乳腺上皮细胞乳脂合成关键酶的影响

通过检测添加硬脂酸和血清后体外培养奶牛乳腺上皮细胞乳脂合成关键酶的表达变化,阐明硬脂酸及血清对乳脂合成的影响,为建立体外乳脂合成细胞培养模型提供实验依据。采用ELISA法检测乳脂合成关键酶ACC、FAS、SCD含量。结果表明,分别添加硬脂酸和血清能显著上调ACC、FAS、SCD含量;同时添加血清和硬脂酸要比单独添加血清和单独添加硬脂酸更加明显促进乳脂关键酶的表达。     

组合添加雌激素和催乳素对奶牛乳腺上皮细胞酪蛋白合成的影响

为了探讨组合添加雌激素和催乳素对奶牛乳腺上皮细胞(BMECs)酪蛋白合成的影响及作用机制,以课题组前期筛选出的最佳雌激素和催乳素浓度为基础,开展组合添加试验.雌激素和催乳素的添加总量为300 ng/mL,根据二者的添加比例分为试验Ⅰ组(对照组,不添加雌激素和催乳素)、试验Ⅱ组(雌激素∶催乳素=5∶1)、试验Ⅲ组(雌激素...     

共轭亚油酸对脂肪代谢相关基因表达的影响

本文利用实时定量PCR的测定方法,分析了两种共轭亚油酸(CLA)异构体对3T3-L1小鼠前脂肪细胞脂肪代谢相关基因表达的影响。本研究CLA异构体的处理浓度和时间为75.4μmol/L,8 d,测定了与能量代谢、细胞凋亡、脂肪酸氧化作用和脂解作用相关的多种基因的mRNA水平。结果显示:两种异构体均能够显著提高UCP1、UCP3、Perilipin和PPARα的mRNA水平,而抑制UCP2的表达水平(P<0.01)。与cis-9t,rans-11CLA相比t,rans-10c,is-12 CLA显著提高PKA(P<0.05)、CPT-1和TNF-α(P<0.01)的mRNA水平。与对照组相比,两种CLA异构体处理组均对HSL、ATGL、ACO和Leptin的基因表达无显著影响。     

奶牛乳腺脂肪酸合成相关基因研究进展

数量和种类繁多的脂肪酸构成了牛奶中不同分子量和饱和度的甘油三酯,也是乳脂的主要成分.链长不同的脂肪酸来源也不尽相同,几乎所有的短链和中链脂肪酸都由乳腺内源合成,长链脂肪酸主要是由血液中转运而来,奶牛乳腺在转运和合成脂肪酸过程中起着重要作用.近年来,研究人员将传统营养与分子生物学研究相结合,发现了大量与乳脂合成相关基因,并揭示了其功能和相互之间的作用.就奶牛乳腺的脂肪酸摄取和转运,脂肪酸的内源合成,乳腺重要酶类,脂肪酸酯化和相关基因网络调控几方面对脂肪酸合成相关基因进行归类,对其研究进展进行介绍.     

不同细胞密度冻存对奶牛乳腺上皮细胞的影响

本试验采用了内蒙古呼和浩特健康荷斯坦奶牛乳腺组织经5代纯化后,将奶牛乳腺上皮细胞分别设为1组(1×10~4个细胞/ml)、2组(1×10~5个细胞/ml)、3组(1×10~6个细胞/ml)、4组(1×10~7个细胞/ml)4个密度梯度进行冻存,复苏后检测细胞死亡率、贴壁率、凋亡率并进行形态学观察。结果显示4组复苏后死亡率极显著低于其他三组(P0.01),贴壁率显著高于其他三组(P0.05)。3组细胞凋亡率显著低于其他三组(P0.05)。3、4组细胞到第3d基本铺满瓶底,生长状态良好。     

甲状腺素T4对体外高温培养奶牛乳腺上皮细胞生长和凋亡的影响

以体外培养的奶牛乳腺上皮细胞为模型,采用台盼蓝染色绘制生长曲线,细胞流式检测细胞凋亡,以正常培养温度(38℃)为对照,研究体外高温培养条件下(42℃),添加不同浓度(0.01、01和1mol/L)甲状腺素(thyroxine,T4)对细胞生长和凋亡的影响.结果表明,不同浓度的T4在38℃有促进奶牛乳腺上皮细胞生长的趋势,但是变化不显著(P>0.05),而T4对缓解高温所造成的乳腺上皮细胞的生长抑制作用也不显著(P>0.05);不同的T4都能够极显著缓解42℃培养1 h和3 h的奶牛乳腺上皮细胞的凋亡(P<0.01),并且对缓解42℃培养3 h的细胞凋亡效果更加明显,但是对42℃培养5 h和8 h的细胞,仅1 μmol/L的T4能够极显著缓解其凋亡(P<0.01).结果提示,T4对高温造成的奶牛乳腺上皮细胞的生长抑制没有明显的缓解作用,但能缓解高温诱导的奶牛乳腺上皮细胞凋亡.     

奶牛乳腺上皮细胞系的建立及高温对细胞超微结构的影响

应用差酶消化法和反复贴壁法在体外建立奶牛乳腺上皮细胞培养方法,以细胞流式术、免疫组化、免疫印迹、超微结构观察等方法对乳腺上皮细胞特性进行检测,并研究高温热刺激对乳腺细胞超微结构的影响。实验结果表明,运用本方法建立的奶牛乳腺细胞系上皮特性及遗传特征完备;41℃1h的高温热刺激可使乳腺细胞染色质浓缩、线粒体肿胀、空泡化,形成凋亡小体,说明高温可以诱发乳腺细胞凋亡。     

奶牛乳腺上皮细胞系的建立及高温对细胞超微结构的影响

应用差酶消化法和反复贴壁法在体外建立奶牛乳腺上皮细胞培养方法,以细胞流式术、免疫组化、免疫印迹、超微结构观察等方法对乳腺上皮细胞特性进行检测,并研究高温热刺激对乳腺细胞超微结构的影响。实验结果表明,运用本方法建立的奶牛乳腺细胞系上皮特性及遗传特征完备;41℃ 1h 的高温热刺激可使乳腺细胞染色质浓缩、线粒体肿胀、空泡化,形成凋亡小体,说明高温可以诱发乳腺细胞凋亡。     

罗格列酮对猪脂肪前体细胞分化过程中聚脂相关基因表达模式的影响

为了解罗格列酮对猪脂肪前体细胞诱导分化过程的影响, 利用胶原酶消化法分离猪皮下脂肪前体细胞, 采用含50 nmol/L胰岛素、100 nmol/L地塞米松及0.25 mmol/L 3-异丁基-1-甲基黄嘌呤的分化培养液Ⅰ(对照组)和在分化培养液Ⅰ中添加100 nmol/L罗格列酮的分化培养液Ⅱ(实验组)两种诱导分化方法对脂肪前体细胞进行诱导分化, 借助实时定量RT-PCR方法检测了细胞分化过程中聚脂相关基因的表达。结果显示: 罗格列酮对PPARγ、C/EBPα、FABP4、FASN和GPAT基因的表达有显著的上调作用, 而对PPARα有一定的下调作用。试验组中PPARα、PPARγ、C/EBPα、FABP4、FASN和GPAT等基因分别于48 h、48 h、48 h、108 h、60 h和24 h达到表达高峰, 此时的表达量分别是诱导前的1.7、48、3.3、487.5、5.8和3.6倍, GPAT同PPARα和FASN基因表达量间均达到显著相关(P<0.05); 而对照组中PPARα、PPARγ、C/EBPα、FABP4、FASN和GPAT等基因分别于84 h、96 h、48 h、96 h、36 h和36 h达到表达高峰, 此时的表达量分别是诱导前的2.1、11、1.6、216.5、3.5和2.8倍, GPAT同PPARα和FASN基因表达量间均达到极显著相关(P<0.01)。本实验结果表明: 罗格列酮不仅可以极大的促进PPARγ和C/EBPα基因的表达, 还能让其协同达到表达高峰; PPARγ和C/EBPα可能是调控猪脂肪前体细胞分化的关键转录因子; 在脂肪形成过程中, 甘油脂类的生物合成可能发生较早, 同时PPARα可能主要参与甘油脂类生物合成的调控。     

共轭亚油酸对草鱼肝脏和肌肉组织的细胞学形态、抗氧化能力以及脂肪代谢相关基因表达的影响

采用65d的生长实验研究共轭亚油酸(CLA)对草鱼肝脏和肌肉细胞学形态、抗氧化能力以及脂肪代谢相关基因表达的影响。共配制7种近似等氮(粗蛋白: 36 g/100 g)等脂(粗脂肪: 4.5 g/100 g)的饲料: 0 (对照组)、0.5 (CLA0.5)、1 (CLA1)、1.5 (CLA1.5)、2 (CLA2)、2.5 (CLA2.5)和3 g/100 g CLA (CLA3)。每个饲料组均设置3个生物学重复,实验鱼初始体重约为(5.08±0.08) g。实验结果显示:与对照组相比,CLA0.5-CLA2.5组草鱼肝脏和肌肉组织细胞学形态均无明显异常,但CLA3组肝细胞线粒体空泡化,内质网肿胀,排列过于紧密;肌细胞肌节结构松散,肌原纤维降解;在CLA1.5-CLA2.5组肝脏和肌肉中超氧化物歧化酶(SOD)、总抗氧化能力(T-AOC)和谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)活力均显著上升(P<0.05);在CLA1.5-CLA3组中肝脏过氧化氢酶(CAT)活力均显著高于对照组(P<0.05),但谷胱甘肽还原酶(GR)活力无显著变化(P>0.05),且在CLA0.5-CLA3组中肌肉CAT和GR活力均无显著变化(P>0.05)。CLA1.5-CLA2组肝脏中MDA含量显著低于对照组(P<0.05),而CLA2.5-CLA3组MDA含量显著高于对照组(P<0.05)。CLA3组肌肉中MDA含量显著高于对照组(P<0.05)。与对照组相比,在CLA1.5-CLA2.5组肝脏和肌肉中乙酰辅酶A羧化酶(ACC) mRNA表达显著下调(P<0.05),脂蛋白脂酶(LPL)、激素敏感性脂肪酶(HSL)和过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPARα)均显著上调表达(P<0.05)。在CLA2-CLA3组肝脏以及CLA1.5-CLA2和CLA3组肌肉中脂肪酸去饱和酶2(FAD2)mRNA显著上调表达(P<0.05)。过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)mRNA在CLA1-CLA3组肝脏中显著下调表达(P<0.05),而其在肌肉中均无显著变化(P>0.05)。综上所述,结合2%CLA在不影响草鱼的生长和饲料利用,且显著降低肝脏脂肪积累,研究结果建议,2% CLA在不影响草鱼肝脏和肌肉组织细胞学形态的前提下,可有效提高其肝脏和肌肉组织抗氧化能力并促进其脂肪分解代谢以及抑制脂肪合成代谢相关基因表达。     

维甲酸对SK-N-SH细胞增殖和相关基因表达的影响

目的:研究维甲酸对SK-N-SH细胞的增殖和相关基因表达的影响.方法:通过苔盼蓝排除法绘制细胞生长曲线、流式细胞技术测定细胞周期、HE染色光镜观察细胞形态改变以及SABC免疫细胞化学梁色法观察维甲酸对SK-N-SH相关癌基因、抑癌基因表达的影响.结果:1μmol/LRA处理后,SK-N-SH细胞的增殖活动受到明显的抑制,处理第7天抑制率达36.16%;周期测定显示处理后出现明显的G0/G1期阻滞,由对照组的49.7%增加至62.7%,增加了26.2%;免疫细胞化学染色结果显示,处理后细胞癌基因c-myc、c-fos的表达较对照组明显降低,而抑癌基因p53、p27的表达则有所加强.结论:维甲酸能有效抑制SK-N-SH细胞的增殖活动,其对细胞的增殖抑制作用与RA下调c-myc、c-fos等癌基因以及上调p53、p27等抑癌基因的表达有关.     

乳蛋白调控元件和乳腺表达载体的研究进展

利用转基因动物乳腺生物反应器生产重组蛋白是一项极具潜力和开发价值的生物技术,但成功的例子并不多,主要是由于乳蛋白的表达调控机制还未完全阐明,构建的表达载体不足以克服位置效应的影响,使得外源基因的表达难以预期。目前乳腺生物反应器研究的热点是对乳蛋白表达调控元件进行更深入的研究,构建基于酵母人工染色体、细菌人工染色体的经过修饰的乳蛋白基因座载体。简要综述了乳蛋白表达调控元件和表达载体的研究进展。     

高温对乳腺上皮细胞生长及凋亡的影响

近年来随着生物技术的发展,对应激的研究已经深入到细胞水平上,Li met al·(2006)揭示细胞抵抗热应激的能力因细胞种类、热处理的温度、时间的不同而存在差异;热应激还会引起G1/S或G2/M细胞周期调控点的阻滞(Kuhl and Rensing,2002;Fuse et al.,1996),剧烈的热应激还可以诱导细     

敲降VPS28基因对中国荷斯坦奶牛乳脂合成的调控

本课题组前期通过GWAS研究,发现VPS28基因在荷斯坦奶牛乳腺组织中特异性高表达,且其5′-UTR的突变位点-58C>T与乳脂性状关联,但其对乳脂性状的调控机理尚未明确。本研究为了明确VPS28基因及其突变位点-58C>T对乳脂的调控机理,首先利用启动子活性分析检测突变位点-58C>T对VPS28基因的影响,发现该突变位点显著降低VPS28基因启动子活性;然后利用RNA干扰技术敲降奶牛原代乳腺上皮细胞中VPS28基因表达量,检测VPS28通路和乳脂合成相关基因mRNA表达量以及细胞中脂肪滴形态,分析结果发现敲降VPS28基因可降低泛素化-溶酶体和泛素化-蛋白酶体通路基因和乳脂合成相关基因的表达量,并提高细胞中甘油三酯的合成,预示VPS28基因可能通过泛素化-溶酶体和泛素化-蛋白酶体途径调控乳脂生成。本研究结果在转录组水平揭示VPS28基因对乳脂合成的调控机制,为奶牛乳脂性状的分子育种研究提供参考依据。     

乙烯利处理对葡萄花色苷合成相关基因表达的影响

利用荧光定量PCR技术分析‘京优’葡萄果实成熟过程中,花色苷生物合成途径相关酶基因mRNA转录水平的变化以及乙烯利处理对果皮中花色苷含量和关键酶基因转录水平的影响。结果显示,葡萄果实发育进入着色期,花色苷合成过程中主要相关基因(CHSs、CHIs、F3Hs、F3′H、F3′5′H、DFR、LDOX、UFGT、OMT和GST)和转录因子(MybA1和MybA1-2)转录水平都显著提高,其中UFGT、GST、MybA1和CHSs、CHIs、F3Hs基因家族中的CHS3、CHI2、F3H2随着花色苷合成而大量转录;乙烯利处理能够增强花色苷合成相关基因的转录,使其转录时期前移和转录水平提高,其中对GST、UFGT和MybA1转录的促进作用最明显。相关性分析表明,花色苷合成与一些花色苷合成相关基因(CHS3、CHI2、F3H2、F3′5′H、UFGT、GST)和转录因子(MybA1)的转录水平呈显著或极显著正相关;与CHS1、CHS2、CHI1、F3H1、DFR、F3′H、LDOX和OMT转录水平的相关性均不显著。本研究结果为进一步阐明花色苷生物合成机理和花色苷类色素的生产应用提供一定的理论依据。     

UV-B辐射对神农香菊萜类物质合成 及其相关基因表达的影响

该研究以神农香菊为材料,用强度为400μw·cm~(-2)的紫外光UV-B对其进行辐射处理,辐射时间分别为0、0.5、1、2、4 h,探讨了UV-B辐射对神农香菊萜类物质合成及其相关基因表达的影响。结果表明:(1)较短时间的UV-B辐射对神农香菊萜类物质合成相关基因表达量有明显的促进作用。与对照相比,0.5、1、2、4 h处理对相关基因表达量均有不同程度的提高;在2 h处理下HMGR、DXR、TPS、GPS基因的相对表达量达到最大值,在4 h处理下FPS和DXS的相对表达量达到最大值,其中FPS基因表达量变化最显著,为对照的69倍。(2) MVA途径中,去氢白菖烯、杜松萜烯的含量与FPS基因表达量4 h内持续上升的变化趋势保持一致,1-石竹烯与HMGR的变化趋势保持一致,表现为先升高后降低。(3) MEP合成途径中,α-侧柏酮、崖柏酮、β-侧柏酮的含量呈现与DXR、GPS、TPS基因表达量相同的变化趋势,桉树脑在UV-B辐射4 h内持续上升,与DXS基因的变化一致。由此可以推断,UV-B辐射通过影响各自途径中一些关键基因的表达量,进而影响了神农香菊萜类物质的合成量。     

RNA干扰基因表达对哮喘小鼠支气管上皮细胞凋亡的影响

为了研究RNA干扰基因表达对哮喘小鼠支气管上皮细胞凋亡的影响,本研究拟通过RNA干扰技术降低Toll样受体表达,检测其是否对缓解哮喘小鼠的支气管上皮细胞凋亡发挥作用。本实验将30只小鼠,雌雄各半,随机分为对照组、哮喘组以及干预组3组。哮喘造模成功后,原代培养各组小鼠的支气管上皮细胞,4~8代后进行si RNA干扰。通过RT-PCR以及TUNEL的方法分别检测小鼠细胞内Toll样受体的基因表达量和细胞凋亡情况。结果显示,哮喘的小鼠Toll样受体的表达明显升高,支气管上皮细胞凋亡比例也比较高,与对照组小鼠进行比较,两种指标均有统计学差异;而si RNA进行干扰后,相较于哮喘组,Toll样受体的表达量明显下降;且凋亡细胞的比例也明显下降,与哮喘组进行比较,两组间有明显的统计学差异。本研究在小鼠模型中验证了用RNA干扰技术对Toll样受体基因表达的干预作用,并且也证明此技术能明显改善哮喘小鼠的病理表型,是非常有前景的临床治疗方法,为临床推广提供了较为可靠的基础实验证据。     

共轭亚油酸对高脂血症大鼠脂质代谢及visfatin基因表达水平的影响

目的建立高脂血症大鼠模型,分析共轭亚油酸（CLA）对其脂质代谢和visfatin基因表达水平的影响,为进一步研究CLA对脂肪代谢的调控机制奠定基础。方法用高脂饲料饲喂雄性Wistar大鼠,4周后断尾采血测定血清甘油三酯（TG）、总胆固醇（CHO）和血糖（GLU）含量,将构建成功的高脂血症大鼠分为实验组和对照组,实验组每天定时灌胃CLA（0.8 mL/0.1 kg）,每周定时称重,记录采食量;4周后眼球采血,测定血清中GLU、CHO、TG、低密度脂蛋白（LDL）、高密度脂蛋白（HDL）水平;断颈处死大鼠,分离体脂并提取肝脏总RNA,半定量RT-PCR分析visfatin基因表达水平。结果高脂饲料饲喂4周后,模型组大鼠血清TG、CHO、GLU明显高于对照组大鼠（P〈0.05）,表明高脂大鼠模型构建成功。灌胃CLA 4周后,实验组大鼠体重、体脂和采食量低于对照组大鼠（P〈0.05）,血清中GLU、CHO、TG、LDL含量明显降低,但实验组HDL浓度升高。RT-PCR实验结果表明,实验组大鼠visfatin基因表达水平明显低于对照组大鼠（P〈0.05）。结论CLA能降低高脂血症大鼠摄食量,改善高血脂大鼠脂质代谢,并能降低visfatin基因的表达水平。