氧化应激诱导内皮细胞凋亡microRNA表达改变的研究

目的:研究氧化应激诱导的内皮细胞micro RNA的表达变化。方法:ECM(Endothelial Cell Medium)培养人脐静脉内皮细胞,利用不同浓度双氧水(0μmol/L,200μmol/L,500μmol/L,800μmol/L)刺激24小时后应用流式细胞术检测其凋亡水平。提取细胞总RNA,利用实时定量PCR(Quantitive real-time PCR;q RT-PCR)检测micro RNA表达量变化,并利用生物信息学软件预测可能的靶基因。结果:加入不同浓度双氧水处理24 h后的内皮细胞总凋亡率均显著高于对照组,200μmol/L、500μmol/L和800μmol/L组的凋亡率分别为(13.31%vs 4.75%,35.9%vs 4.75%,89.75%vs 4.75%,P0.01)。200μmol/L的双氧水处理内皮细胞后,micro RNA的表达出现了明显的改变。其中mi R-92a、mi R-126的表达明显下调(P0.05),mi R-181a、mi R-217、mi R-34a和mi R-320的表达明显上调(P0.05)。靶基因预测显示mi R-320、mi R-92a可能调控多个和内皮细胞凋亡相关的基因表达。结论:在氧化应激诱导的内皮细胞凋亡中,mi RNA表达发生改变并可能参与调控内皮细胞功能。     

MARVELD1调控内含子miR-186、miR-335表达的研究

目的:前期研究发现,MARVELD1(具有囊泡运输和膜连接功能的MAL及相关蛋白1)在多种肿瘤细胞中表达下调,许多micro RNAs也随其发生变化。本研究探讨了MARVELD1调控mi R-186和mi R-335的表达方式。方法:本研究选取了多种肺癌细胞系,运用q RT-PCR的方法检测了MARVELD1以及mi R-186和mi R-335的表达情况,通过MARVELD1过表达体系和si RNA干扰MARVELD1表达的体系分析mi R-186和mi R-335表达变化情况,运用生物信息学网站对mi R-186和mi R-335进行分析,确认其是否为内含子mi RNA,并进一步应用MARVELD1过表达和RNAi体系检测MARVELD1对mi R-186和mi R-335的宿主基因的影响。结果:在肺癌细胞中,MARVELD1与mi R-186、mi R-335的表达呈现明显的正相关。在过表达MARVELD1之后,mi R-186、mi R-335出现高表达;当下调MARVELD1表达时,mi R-186、mi R-335则表现低表达。生物信息学分析发现mi R-186和mi R-335均为内含子mi RNA。进一步分析MARVELD1与mi R-186和mi R-335宿主基因的表达关系显示,MARVELD1可以上调它们的宿主基因的表达。结论:上述结果表明,MARVELD1可通过影响内含子mi R-186和mi R-335的宿主基因进而调控二者的表达,为进一步研究MARVELD1影响肿瘤细胞的发生机制奠定了基础。     

miR-181b-5p靶向调控Nr6a1抑制GC-1spg细胞的增殖与迁移

Micro RNA(mi RNA)是一段长约为22 nt的内源性非编码单链RNA,研究表明mi RNA对正常精子发生和雄性发育必不可少。为了探究mi R-181b-5p在雄性生殖细胞发育中的功能以及寻找其靶基因,首先采用流式细胞术、噻唑蓝检测以及划痕实验分析了mi R-181b-5p在小鼠GC-1spg精原细胞系中的生物学效应,随后利用Targetscan和GO数据库等生物信息学软件预测发现生殖核受体Nr6a1可能为其靶基因,进而通过双荧光素酶报告基因实验以及q PCR证实了mi R-181b-5p与Nr6a1的靶向识别关系,最后采用细胞功能回补实验明确了mi R-181b-5p通过靶向调控Nr6a1来抑制GC-1spg细胞的增殖和迁移。结果表明mi R-181b-5p通过其靶基因Nr6a1在精子发生中起到负调控的作用。     

精神分裂症患者中miR-197-3p调控瘦蛋白水平的研究

该文主要分析了精神分裂症(schizophrenia,SCZ)患者血清中候选微RNA(microRNA,miRNA)水平的变化,研究其作用靶点及机制。针对前期芯片结果分析发现的差异表达miRNA,该研究使用荧光定量PCR对一批患者和对照血清进行验证分析。利用生物信息学工具分析经验证的差异表达miRNA,寻找潜在的作用靶点。进一步对miRNA及其潜在靶点进行调控功能的验证。芯片筛选结果发现,microRNA-197-3p(miR-197-3p)在初诊患者中呈低表达,较临床痊愈者和健康人有显著性差异,并在45例初诊患者和50例健康人对照血清中得到验证。生物信息学分析发现,瘦蛋白(leptin)mRNA可能是miR-197-3p的一个作用靶点,并经ELISA验证患者相对于健康人血清中瘦蛋白浓度显著升高。细胞水平的研究发现,miR-197-3p模拟物可以下调瘦蛋白水平,相反miR-197-3p抑制剂可以上调其水平。荧光素酶活性实验证实,miR-197-3p可能通过结合于瘦蛋白mRNA 3′UTR(3′untranslated region)的特异性位点,调控其水平。该研究表明,miR-197-3p水平下降,进一步上调瘦蛋白的水平可能在精神分裂症发病过程中发挥一定作用。     

miR-17-92、自噬在肿瘤中的研究进展

micro RNA(mi RNA)是一类在转录后水平调控目的基因表达的功能性小RNA分子。mi R-17-92基因簇是一个高度保守的基因簇,编码6个mi RNAs,分别为:mi R-17、mi R-18a、mi R-19a、mi R-19b-1、mi R-20a和mi R-92a。细胞自噬(autophagy)是将细胞内受损、变性或衰老的蛋白质以及细胞器运输到溶酶体进行消化降解的过程。mi RNA的异常表达可影响自噬水平,从而影响肿瘤的发生发展。研究证明mi R-17-92基因簇与细胞自噬及肿瘤的发生密切相关,有望成为具有潜在价值的肿瘤标志物或肿瘤治疗的新靶点。现对mi R-17-92基因簇与细胞自噬和肿瘤的关系进行综述。     

miR-181a调控骨髓间充质干细胞中OPG水平及对破骨细胞活性的影响

该研究预测并验证骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMMSCs)中mi R-181a对靶分子骨保护素(osteoprotegerin,OPG)m RNA水平的调控作用,探讨其在骨质疏松发病过程中对破骨细胞活性的影响。通过生物信息学预测mi R-181a可能调控的靶基因OPG,构建含mi R-181a结合位点的OPG m RNA 3′UTR(3′untranslated regions)荧光素酶报告载体。通过双荧光素酶载体系统检测mi R-181a与OPG m RNA 3′UTR相互作用对荧光素酶活性的影响;转染mi R-181a进入BMMSCs并与破骨细胞共培养,TRAP(tartrate resistant acid phosphatase)染色检测共培养体系中破骨细胞数目的改变。结果表明,双荧光素酶报告提示,mi R-181a的靶分子为OPG m RNA,上调mi R-181a(mimics组)水平后,破骨细胞数目较对照组显著增多(P0.05);下调mi R-181a(inhibitor组)水平后,破骨细胞数目较对照组显著降低(P0.05)。研究结果显示,mi R-181a可以负调控OPG的蛋白水平,进而影响破骨细胞活性。     

miR-10a对类风湿性关节炎滑膜细胞侵袭、迁移能力的影响及机制

目的:以类风湿性关节炎(RA)患者滑膜细胞为研究对象,明确mi R-10a对滑膜细胞侵袭、迁移能力的影响及机制。方法:首先用q RT-PCR对筛选得到的异常表达mi RNA进行验证,进而利用生物信息学分析结合报告基因、Western印迹方法,明确mi R-10a的靶基因,最后采用Transwell、划痕实验考察mi R-10a对RA成纤维细胞样滑膜细胞(FLS细胞)侵袭能力的影响。结果:mi R-10a在RA患者滑膜组织及细胞中低表达;TAK1和BTRC是mi R-10a的靶基因;mi R-10a可促进IL-6、IL-8等炎症因子的表达;mi R-10a可促进FLS细胞的侵袭、迁移。结论:mi R-10a可通过调节NF-κB的活性影响RA FLS细胞的侵袭、迁移。     

血清LncRNA XIST与miR-33a在膀胱癌中的表达及临床意义

目的:探究血清长链非编码RNA X染色体失活特异转录本(Lnc RNA XIST)与微小RNA-33a(mi R-33a)在膀胱癌中的表达及临床意义。方法:选择2017年4月至2019年8月青岛大学附属医院诊治的95例膀胱癌患者作为膀胱癌组,选择同期体检的95例健康者作为健康组。采用荧光定量PCR检测两组的血清LncRNA XIST与mi R-33a表达水平,分析患者的临床病理参数与血清LncRNA XIST、mi R-33a表达水平的关系,采用受试者工作特征曲线(ROC)分析血清LncRNA XIST与mi R-33a对膀胱癌的预测价值。结果:与健康组相比,膀胱癌组的血清LncRNA XIST表达水平明显升高(P0.05),而血清mi R-33a表达水平明显下降(P0.05)。血清LncRNA XIST与mi R-33a表达均与膀胱癌患者的TNM分期和淋巴结转移情况相关(P0.05)。血清LncRNA XIST联合mi R-33a(AUC=0.830,敏感性=90.47%,特异性=89.85%)预测膀胱癌的临床价值明显高于血清LncRNA XIST(AUC=0.716,敏感性=81.36%,特异性=80.74%)及血清mi R-33a(AUC=0.736,敏感性=82.19%,特异性=81.09%)单独检测。结论:血清LncRNA XIST表达异常升高、血清mi R-33a表达降低与膀胱癌发生密切相关,联合检测有助于预测膀胱癌发生的风险,从而为临床制定针对性干预和治疗方案提供参考。     

miR-183家族在肿瘤中作用机理的最新进展

micro RNA是真核生物中一类长约18~25个核苷酸的小分子非编码RNA,它们可以与m RNA的3′-UTR结合在转录后水平调控基因的表达。很多报道表明,mi RNA参与了肿瘤的发生发展调控。mi R-183家族的三个成员mi R-183、mi R-96和mi R-182都与肿瘤密切相关。研究发现,在前列腺癌、肺癌、结肠癌、乳腺癌等肿瘤中mi R-183家族表达异常,其机制是通过调控多种靶基因参与其中。本文综述了mi R-183家族在常见高发肿瘤中的研究现状。     

固有免疫信号分子hsa-miR-146b调控脑卒中关联信号分子的生物信息学分析与实验研究

该研究旨在运用生物信息学方法预测固有免疫信号分子hsa-mi R-146b与脑卒中关联的分子调控网络。实验运用UCSC基因组浏览器、人类mi RNA疾病数据库、TF-mi RNA调控数据库、mi RNA靶基因预测验证数据库和Genecards数据库研究hsa-mi R-146b的上游转录因子、下游靶基因及信号通路的多个调控途径,绘制hsa-mi R-146b的核心调控网络图。采用脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)刺激慢病毒感染的小胶质细胞BV2细胞,采用实时定量PCR检测早期生长反应基因1(early growth response 1,EGR1)、Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)、mi R-146b、脑源性神经营养因子(brain derived neurotrophic factor,BDNF)和基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinase 9,MMP9)的m RNA水平变化,对hsa-mi R-146b调控网络进行验证。UCSC数据库中显示,hsa-mi R-146b在多个物种中具有高度保守性。生物信息学分析显示,hsa-mi R-146b受转录因子EGR1调控的同时,又调控下游TLR4、BDNF和MMP9等39个靶基因。所有基因构成一个以hsa-mi R-146b为核心的调控网络,在脑卒中的发生与发展中起着重要作用。在LPS刺激的BV2细胞中,EGR1、TLR4、mi R-146b、BDNF和MMP9m RNA水平升高,而RNA慢病毒技术干扰小胶质细胞中的EGR1的表达后,TLR4、mi R-146b和MMP9 m RNA水平降低,BDNF升高,表明EGR1是调节mi R-146b表达和下游信号分子TLR4、BDNF和MMP9的关键信号分子。综上所述,生物信息学方法预测并初步验证了hsa-mi R-146b分子在脑卒中疾病中的调控网络,为深入阐明hsa-mi R-146b在脑卒中疾病中的机制奠定了实验基础。     

非小细胞肺癌患者血清miR-146a、miR-141的表达及临床意义

目的:研究非小细胞肺癌(NSCLC)患者血清微小RNA-146a(mi R-146a)、mi R-141的表达及临床意义。方法:选取2015年1月至2018年1月我院收治的106例NSCLC患者记为NSCLC组,另选取同期于我院进行体检的40例健康体检者记为健康对照组。采用荧光实时定量PCR(qRT-PCR)检测两组血清mi R-146a、mi R-141的表达水平,分析NSCLC患者血清mi R-146a、mi R-141表达水平与临床病理参数的关系,比较血清mi R-146a、mi R-141单一诊断及联合诊断NSCLC的曲线下面积(AUC)、灵敏度、特异度。结果:NSCLC组患者的血清mi R-146a、mi R-141表达水平高于健康对照组(P0.05)。NSCLC患者血清mi R-146a表达水平与病理分期有关(P0.05),与年龄、性别、吸烟史、病理类型、病理分级、肿瘤直径及是否伴有淋巴结转移无关(P0.05)。NSCLC患者血清mi R-141表达水平与病理分期、病理分级及是否伴有淋巴结转移有关(P0.05),与年龄、性别、吸烟史、病理类型、肿瘤直径无关(P0.05)。血清mi R-146a、mi R-141单一诊断及两者联合诊断NSCLC的AUC分别为0.841、0.772、0.921,敏感度分别为85.1%、80.5%、93.5%,特异度分别为84.2%、75.3%、89.8%。结论:NSCLC患者血清mi R-146a、mi R-141表达水平升高,且与部分临床病理参数有关,两者联合检测对NSCLC诊断具有较高的诊断价值。     

小鼠精子发生早期microRNA的表达谱和调控模式——miRNA在小鼠精子发生中的作用

精子发生是一个依赖于精原干细胞自我更新和精原细胞分化的精确而又复杂的调控过程,目前对这一过程知之甚少.mi RNA作为转录和转录后基因沉默的关键调节子,参与很多生物的多种发育过程.本研究采用高通量小RNA测序系统研究了mi RNA在小鼠B型精原细胞(BSc)和初级精母细胞(PSc)中的表达谱.结果显示,在这2种细胞类型中let-7mi RNA家族的表达水平都相当高.并且在BSc向PSc的转化过程中,mi R-21,mi R-140-3p,mi R-103,mi R-30a,mi R-101b和mi R-99b的表达水平明显降低.这些mi RNA参与调控与细胞凋亡、细胞增殖和分化、连接组装和细胞周期调控相关的诸多基因的表达.上述结果表明,mi RNAs在精子发生过程中发挥着不可替代的作用.     

DLX6-AS1通过竞争性结合miR-15上调Caspase-1诱导巨噬细胞焦亡

为探讨长链非编码RNA (long noncoding RNA, lncRNA) DLX6-AS1在巨噬细胞焦亡中的作用及相关机制,采用生物信息学分析、实时荧光定量PCR和双荧光素酶报告基因实验等,在THP-1巨噬细胞中分析并验证lncRNA DLX6-AS1下游微RNA (microRNA, mi RNA)及mi RNA的下游靶基因;通过免疫荧光染色等实验检测DLX6-AS1/miR-15/caspase-1轴对巨噬细胞焦亡的影响。结果显示, DLX6-AS1在焦亡巨噬细胞中表达上调,敲降DLX6-AS1可抑制巨噬细胞焦亡,但这种抑制作用被mi R-15抑制剂逆转; mi R-15通过调控其靶基因caspase-1表达,抑制巨噬细胞焦亡。本研究表明, DLX6-AS1通过竞争性结合mi R-15,解除mi R-15对其靶基因caspase-1的抑制作用,从而诱导巨噬细胞焦亡,这将丰富lncRNA调控巨噬细胞焦亡的理论基础。     

唇腭裂患儿下调表达的miRNA相关研究

目的:唇腭裂是口腔颌面部最常见的先天性畸形,危害严重。mi RNA在细胞分化,生物发育及疾病发生发展过程中发挥巨大作用,越来越多的受到科研人员的关注。本课题对唇腭裂患儿下调表达的mi RNA与唇腭裂相关性进行验证研究,为mi RNA应用在唇腭裂防治中奠定一定的基础。方法:通过芯片分析方法检测唇腭裂患儿表达下调的mi RNA,利用MIRDB、TARGETSCAN-VERT和RNA22-HSA这三个生物信息学软件对唇腭裂患儿表达下调的mi RNA进行靶基因预测分析,验证候选mi RNA与唇腭裂具有相关性。结果:得出唇腭裂患儿中出现差异表达下调的mi RNA有hsa-mi R-3119,hsa-mi R-3915等73个,其中hsa-mi R-3611对应的靶基因GABRB3和hsa-mi R-764对应的靶基因F13A1有文献报道与唇腭裂具有相关性。结论:hsa-mi R-3611,hsa-mi R-764可能与唇腭裂的发生存在关联。     

抑癌因子miR-10a抑制Tiam1表达对胃癌细胞凋亡和迁移的影响

目的:探讨miR-10a抑制Tiam1表达对胃癌细胞凋亡和侵袭的影响。方法:获取胃上皮组织细胞及胃癌组织细胞,利用q PCR及Western blot实验检测两种细胞中mi R-10a表达与Tiam1的m RNA及蛋白表达水平,同时检测胃癌细胞S746T及正常胃粘膜细胞RGM-1和NGEC中mi R-10a表达与Tiam1蛋白表达水平。通过将mi R-10a mimic和mi R-10a inhibitor转染HS746T细胞,利用流式细胞术检测HS746T的细胞周期和细胞凋亡,TranswellTM实验检测HS746T细胞的侵袭能力,qPCR及Western blot实验检测凋亡相关蛋白caspase3、caspase9和Bax以及周期相关蛋白P21表达水平;荧光素酶活性分析实验检测Tiam1是mi R-10a的作用靶点。已构建的Tiam1高表达的Tiam1-pcDNA3.1质粒和敲除Tiam1基因的PX458质粒分别转染HS746T细胞,通过流式细胞术及TranswellTM实验检测HS746T细胞的凋亡及侵袭能力。结果:与胃上皮组织细胞相比,早期胃癌临床组织细胞中mi R-10a表达降低,Tiam1的m RNA及蛋白表达升高;mi R-10a的表达与早期胃癌患者的肿瘤转移密切相关,与年龄、性别和肿瘤分期无关;与正常胃粘膜细胞RGM-1和NGEC相比,胃癌细胞HS746T中的mi R-10a表达降低,而Tiam1蛋白表达升高;mi R-10a可抑制HS746T细胞侵袭,促进细胞凋亡,使其停滞于G0/G1期;mi R-10a靶向作用于Tiam1基因的3'非翻译区(3'UTR),减少Tiam1的蛋白表达;Tiam1可抑制HS746T细胞凋亡,促进HS746T细胞侵袭。结论:mi R-10a靶向作用于Tiam1基因的3'UTR,抑制HS746T细胞的增殖及侵袭,促进HS746T细胞凋亡。     

子宫肌瘤差异表达microRNA的定量分析及靶基因鉴定

Micro RNA(mi RNA)是一类非编码单链小分子RNA,广泛参与人类各种生理、病理过程。最新研究提示,mi RNA在子宫肌瘤中起着重要调控作用,该研究试图对子宫肌瘤组织中差异表达mi RNAs进行表达验证及靶基因鉴定,结果发现,与瘤旁组织相比,mi R-363、mi R-490、mi R-135b等的表达水平在肌瘤组织中有着4~6倍的上调,而mi R-217、mi R-590、mi R-451则下调3~5倍。通过软件预测结合表达定量分析,发现其中mi R-363的靶基因为卵泡激素相互作用蛋白1基因(folliculin interacting protein 1,FNIP1)和溶质载体家族蛋白12成员5(solute carrier family 12 member5,SLC12A5)。mi R-135b的靶基因核受体亚科3 C组,成员2(nuclear receptor subfamily 3,group C,member 2,NR3C2)在肌瘤组织中表达有显著下降,而mi R-590的靶基因锌指蛋白367基因(zinc fi nger protein 367,ZFN367)和去泛素水解酶1基因(yeast OTU deubiquinating enzyme 1 homolog,YOD1)在肌瘤组织中的表达水平显著上升。进一步的报告基因分析发现,其中FNIP1、NR3C2、ZNF367的3′UTR能够与相应的mi RNA结合。分析相同肌瘤样品中表达水平的关系发现,这三个靶基因表达均与相应的mi RNA呈显著的负相关。该研究的发现为子宫肌瘤的分子机制研究和诊治提供了新的参考。     

翘嘴鳜miR-222的表达特征（英文）

为了解翘嘴鳜mi R-222的时空表达规律,研究利用实时荧光定量PCR的方法检测mi R-222在翘嘴鳜不同组织、胚胎发育及胚后发育中的相对表达丰度。研究结果显示,mi R-222在肌肉相关的组织中表达较高,特别是在成年翘嘴鳜的白肌中表达最高;胚胎发育阶段结果显示,mi R-222在胚胎发育的2细胞期就有表达,而表达量在心动期达到最高。不同组织及不同发育阶段的差异性表达结果表明,mi R-222很可能参与调控鳜鱼肌肉的生长发育。为研究合成代谢过程中mi R-222在肌肉生长调控中的表达规律,通过对翘嘴鳜幼鱼在饥饿一周后饱食一餐的实验处理下,利用实时荧光定量的方法测定mi R-222在骨骼肌中的相对表达变化。结果显示,mi R-222的表达量在恢复喂食后的1h显著上升(P0.05),表明mi R-222很可能是调节鱼类骨骼肌生长过程中,参与快速应答信号系统的一类mi RNA。研究为mi R-222在鱼类发育中的调控作用提供一些理论依据。     

miR-146a的功能及其靶基因的研究进展

微小RNA (micro RNA, mi RNA)是小分子非编码RNA中的一类,可与靶m RNA结合,降解或抑制该m RNA进行翻译,进而对细胞的生长、增殖、衰老等过程进行调控。mi RNA-146a(mi R-146a)与炎性因子所致的自身免疫性疾病以及肿瘤的侵袭和转移相关,其失调往往导致病情的加重。然而,目前相关疾病常用的临床诊断指标和治疗药物缺乏特异性。现以mi R-146a为切入点,为寻找相关的自身免疫性疾病以及肿瘤更加精准的早期诊断指标和治疗靶点提供线索。     

抑郁症患者血清miR-135a、miR-221表达水平与认知功能、事件相关电位P300和炎症细胞因子的相关性分析

目的:探讨抑郁症患者血清微小核糖核酸(mi R)-135a、mi R-221表达水平与认知功能、事件相关电位P300和炎症细胞因子的相关性。方法:选择2019年1月至2021年1月我院收治的216例抑郁症患者(抑郁症组)和同期于我院体检的200例健康志愿者(对照组)。检测血清mi R-135a、mi R-221表达水平及白细胞介素-6(IL-6)、超敏C反应蛋白(hs-CRP)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平。采用蒙特利尔认知评估量表(MoCA)、简易精神状态检查量表(MMSE)评估认知功能。采用全功能肌电诱发电位仪检测P3潜伏期和P3波幅。Pearson相关性分析mi R-135a、mi R-221表达水平与MoCA评分、MMSE评分、IL-6,hs-CRP,TNF-α、P3潜伏期和P3波幅的相关性。结果:抑郁症组血清mi R-221表达水平、P3潜伏期,血清IL-6、hs-CRP、TNF-α水平高于对照组(P<0.05),mi R-135a表达水平、MMSE评分、MoCA评分、P3波幅低于对照组(P<0.05)。mi R-221表达水平与P3潜伏期,血清IL-6、hs-CRP、TNF-α水平呈正相关(P<0.05),与MMSE评分、MoCA评分、P3波幅呈负相关(P<0.05);mi R-135a表达水平与P3潜伏期,血清IL-6、hs-CRP、TNF-α水平呈负相关(P<0.05),与MMSE评分、MoCA评分、P3波幅呈正相关(P<0.05)。结论:抑郁症患者血清mi R-135a表达水平降低,mi R-221表达水平增高,mi R-135a低表达和mi R-221高表达与抑郁症患者认知功能降低、机体炎症反应有关。