蛋白质精氨酸甲基转移酶1促进胰腺癌细胞的增殖和迁移能力（英文）

该文探讨了蛋白质精氨酸甲基转移酶1(protein arginine methyltranserase 1,PRMT1)对胰腺癌细胞迁移和增殖的影响。在数据库中分析了PRMT1在正常胰腺组织和胰腺癌组织中的表达。用Western blot和Real-time PCR实验检测不同胰腺癌细胞中PRMT1的基础表达量。在Pa Tu8988和Bx PC3细胞中干扰PRMT1,Western blot、q PCR检测sh RNA干扰效率;CCK-8检测细胞增殖活性;平板克隆法检测细胞克隆形成能力;Transwell迁移实验检测细胞迁移能力;Western blot检测细胞EMT(epithelial-mesenchymal transition)相关蛋白变化。相反,在SW1990细胞中过表达PRMT1,并做上述同样的实验进行检测。结果显示,PRMT1在胰腺癌组织中的表达明显高于正常胰腺组织。在胰腺癌细胞中下调PRMT1的表达,可以抑制细胞的增殖和迁移能力,增高上皮标志物E-钙黏蛋白的水平,降低间质标志物N-cadherin钙黏蛋白的水平。上调PRMT1的表达得到相反的结果。结果表明,PRMT1能促进胰腺癌细胞的增殖和迁移能力,并影响EMT标志物蛋白质水平。该研究为进一步研究体内PRMT1的作用提供基础。     

甲基化CpG结合域蛋白MBD2对胰腺癌细胞增殖和迁移的影响

该文探讨甲基化Cp G结合域蛋白2(methyl-Cp G-binding domain protein 2,MBD2)对人胰腺癌细胞增殖和迁移的影响。将干扰质粒MBD2 sh RNA转染入MBD2高表达的Pa Tu8988细胞和SW1990细胞中,运用CCK-8法检测细胞的增殖活性并绘制生长曲线,克隆形成实验检测细胞克隆形成率,Transwell检测细胞迁移率。结果显示,下调MBD2后,Pa Tu8988细胞中MBD2基因的表达量明显降低,细胞增殖减慢,克隆形成率降低,细胞迁移率减少;在SW1990细胞中下调MBD2基因后,得到类似结果。由此说明,沉默MBD2基因可以抑制胰腺癌细胞Pa Tu8988和SW1990的增殖和迁移,为进一步研究MBD2在胰腺癌细胞增殖与迁移中的作用机制奠定了基础。     

UPF1在乳腺癌细胞中的表达与作用的研究

目的：观察UPF1在乳腺癌中的表达,对人乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖、迁移和侵袭的影响,及其可能的作用机制。方法：使用生物信息学方法分析UPF1在乳腺癌组织中的表达及作用,构建UPF1小干扰RNA(siRNA)并转染乳腺癌MDA-MB-231和MCF-7细胞株,构建外源性的UPF1低表达的重组细胞,通过实时荧光定量PCR法和蛋白质印迹法检测重组细胞中UPF1的表达水平;CCK-8法检测细胞的增殖;划痕愈合实验及Transwell小室法分别检测细胞横向和纵向迁移以及侵袭能力;实时荧光定量PCR法检测基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinase, MMP9)以及上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition, EMT)标志物E-钙黏着蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(vimentin)mRNA表达量的变化;蛋白质印迹法检测MMP2、E-cadherin、Vimentin蛋白表达量的变化。结果：生物信息学分析表明UPF1在乳腺癌肿瘤组织中高表达,与免疫细胞浸润相关,并与抑癌基因表达呈正相关,mRNA水平进一步验证UPF1在...     

卵巢癌组织中UHRF1蛋白的表达及其与卵巢癌细胞增殖和侵袭的关系

目的:研究卵巢癌组织中泛素样含PHD和环指域1(Ubiquitin-like with PHD and ring finger domains 1,UHRF1)蛋白的表达及UHRF1对卵巢癌细胞增殖、侵袭的影响。方法:选取卵巢癌组织和癌旁正常组织,采用蛋白印迹法(Western blot)检测其UHRF1的蛋白表达。体外培养卵巢癌SKOV-3细胞株,分别转染UHRF1的si RNA和阴性对照si RNA,采用CCK-8检测细胞活力,Transwell检测细胞侵袭能力,荧光定量聚合酶链式反应法(FQ-PCR)检测Cyclin D1、CDK6、MMP2和MMP9的m RNA表达。结果:卵巢癌组织中UHRF1蛋白表达水平显著高于癌旁正常组织(P0.05);与转染阴性对照si RNA的SKOV-3细胞相比,转染UHRF1的si RNA的SKOV-3细胞活力明显降低、侵袭细胞数目明显减少(P0.05),且细胞中Cyclin D1、CDK6、MMP2和MMP9基因的m RNA表达水平显著降低(P0.05)。结论:UHRF1蛋白在卵巢癌组织中呈高表达状态,且可促进卵巢癌细胞的增殖和侵袭。     

HIF-1α/MMP9信号通路介导低氧诱导的人视网膜母细胞瘤HXO-RB44细胞侵袭

目的:探究低氧条件下人视网膜母细胞瘤细胞侵袭能力的变化及其调控机制。方法:将人视网膜母细胞瘤HXO-RB44细胞株于常氧(21%O_2)和低氧(1%O_2)条件下培养,采用Transwell侵袭实验检测细胞侵袭能力,real time-PCR和Western blot法检测细胞中HIF-1α及MMP9 m RNA和蛋白的表达水平,荧光素酶报告基因分别检测低氧对HIF-1α、HIF-1α对MMP9启动子区域的调控作用。并进一步使用HIF-1α及MMP9特异性si RNA阻断其表达,并检测低氧对细胞侵袭能力的影响。结果:低氧组Transwell下室HXO-RB44每高倍视野细胞数目、HXO-RB44HIF-1α和MMP9 m RNA和蛋白表达均较常氧组显著上调(P0.05)。转染HIF-1α过表达质粒组的MMP9活性较空载组相比明显增加(P0.05),低氧处理24小时的HXO-RB44细胞的HIF-1α启动子活性较常氧组明显增强(P0.05)。HIF-1αsi RNA组的HIF-1α及MMP9的m RNA和蛋白表达水平较NC组明显降低(P0.05),MMP9 si RNA组的HIF-1αm RNA和蛋白无明显改变,分别转染HIF-1αsi RNA组MMP9 si RNA组下室HXO-RB44每高倍视野细胞数目显著减少(P0.05)。结论:低氧能够促进HXO-RB44细胞株的侵袭转移,而可HIF-1α/MMP9轴在这一过程起关键作用。     

LRP16通过调控E-钙粘合素的表达促进MCF-7细胞的侵袭生长

LRP16在原代乳腺癌组织中表达水平与雌激素受体α（ERα）表达状态以及腋窝淋巴结侵袭数目密切相关.为研究LRP16基因对乳腺癌MCF-7细胞侵袭生长的影响,并探讨涉及的分子机制,采用基质胶黏附实验与Transwell方法,检测内源性LRP16表达抑制MCF-7细胞的体外黏附、侵袭生长与迁移特征.结果表明,抑制LRP16在MCF-7细胞中的表达,降低了细胞的体外黏附、侵袭与迁移能力;采用FVB小鼠进行的实验性转移试验结果显示,抑制LRP16显著降低了MCF-7细胞的肺转移结节数目;为探索可能的分子机制,采用Western印迹方法,检测了LRP16对乳腺癌转移相关分子MMP-2, MMP-9, CD44和E-钙黏着蛋白表达的影响,结果在LRP16抑制的MCF-7细胞中只有E-钙黏着蛋白蛋白表达上调.进一步的Northern印迹与免疫组化实验结果表明,抑制LRP16可上调MCF-7细胞中E 钙黏着蛋白基因的mRNA与蛋白表达水平;共转染与双荧光素酶方法检测LRP16对E-钙黏着蛋白基因启动子的表达调控效应,结果显示,LRP16抑制E 钙黏着蛋白基因基因5′-近端启动子的转录激活,该抑制效应选择性存在于内源性ERα阳性细胞,并且依赖于雌激素的存在;染色质免疫共沉淀方法（ChIP）检测ERα与E-钙黏着蛋白基因启动子的相互作用,结果显示,在LRP16基因表达缺陷的MCF-7细胞中,ERα抗体沉淀到E-钙黏着蛋白基因启动子的DNA序列;上述研究结果表明,抑制LRP16基因表达,削弱了激素依赖型乳腺癌细胞的侵袭生长能力,其分子机制涉及了LRP16通过ERα介导对E-钙黏着蛋白基因基因转录激活的调控.     

LIN28基因对人胰腺癌细胞PANC1和SW1990增殖和迁移的影响

该文目的为研究LIN28基因对人胰腺癌细胞增殖和迁移的影响,揭示其在胰腺癌发生发展中的作用。实验发现,胰腺癌细胞中LIN28的表达模式与细胞增殖和迁移能力有关,将干扰质粒LIN28 sh RNA转染入LIN28高表达的PANC1细胞,将过表达载体3×Flag-LIN28转染入低表达的SW1990细胞中,采用RT-PCR和Western blot实验验证基因沉默或过表达的效果,并运用CCK-8法分析细胞的增殖能力并绘制细胞生长曲线,Transwell实验检测细胞迁移率。结果显示,下调LIN28后,PANC1细胞中LIN28基因的表达量明显降低,细胞增殖减慢,迁移减少;而上调LIN28后,SW1990细胞中LIN28基因的表达量明显增高,细胞增殖加快,迁移增加。由此说明,沉默LIN28基因可以抑制PANC1细胞增殖和迁移,过表达LIN28基因可以促进SW1990细胞增殖和迁移,这为阐明LIN28在胰腺癌演化过程中的机制奠定了实验基础。     

Janus激酶3通过影响钙池操纵性钙通道促进乳腺癌细胞的迁移

本研旨在探讨Janus激酶3 (JAK3)对乳腺癌细胞迁移能力的影响以及其作用机制。利用si RNA (si JAK3)沉默乳腺癌MCF-7细胞JAK3的表达,用划痕实验检测细胞迁移能力,用荧光钙成像技术检测钙池操纵性钙通道(store-operatedcalcium channel,SOCC)活性,用Westernblot和RT-PCR检测钙池操纵性钙内流(store-operatedcalciumentry,SOCE)过程中的重要分子Orai1和STIM1表达水平。结果显示,SOCC抑制剂2-APB对MCF-7细胞的迁移能力有抑制作用。si JAK3转染可显著抑制MCF-7细胞的迁移能力,降低SOCC活性,下调Orai1和STIM1的m RNA和蛋白表达水平。在JAK3沉默细胞中过表达Orai1或STIM1,可使MCF-7细胞迁移力恢复。上述结果提示,JAK3通过影响SOCC促进乳腺癌细胞的迁移。     

Janus激酶3通过影响钙池操纵性钙通道促进乳腺癌细胞的迁移北大核心CSCD

本研旨在探讨Janus激酶3 (JAK3)对乳腺癌细胞迁移能力的影响以及其作用机制。利用si RNA (si JAK3)沉默乳腺癌MCF-7细胞JAK3的表达,用划痕实验检测细胞迁移能力,用荧光钙成像技术检测钙池操纵性钙通道(store-operatedcalcium channel,SOCC)活性,用Westernblot和RT-PCR检测钙池操纵性钙内流(store-operatedcalciumentry,SOCE)过程中的重要分子Orai1和STIM1表达水平。结果显示,SOCC抑制剂2-APB对MCF-7细胞的迁移能力有抑制作用。si JAK3转染可显著抑制MCF-7细胞的迁移能力,降低SOCC活性,下调Orai1和STIM1的m RNA和蛋白表达水平。在JAK3沉默细胞中过表达Orai1或STIM1,可使MCF-7细胞迁移力恢复。上述结果提示,JAK3通过影响SOCC促进乳腺癌细胞的迁移。     

LRP16基因通过雌激素受体α介导抑制Ishikawa细胞中E-钙黏着素的转录活性

目的:既往研究表明LRP16基因过表达通过下调E-钙黏着素促进子宫内膜癌Ishikawa细胞的侵袭生长,本研究目的在于探讨LRP16基因下调E-钙黏着素的分子途径。方法:用免疫组化方法检测LRP16基因过表达的Ishikawa细胞中E-钙黏着素的表达;用共转染与荧光素酶实验检测LRP16基因对E-钙黏着素启动子转录活性的影响;用染色质免疫共沉淀实验检测雌激素受体α(ERα)与LRP16蛋白在E-钙黏着素启动子区的招募状况。结果:E-钙黏着素在LRP16过表达的Ishikawa细胞中的表达水平明显下调;LRP16抑制了E-钙黏着素启动子的转录活性,该效应呈现对雌激素(E2)存在的依赖性特征;LRP16本身没有与E-钙黏着素启动子区结合,但明显抑制了ERα与E-钙黏着素启动子区的结合。结论:LRP16通过抑制ERα对E-钙黏着素基因的转录激活活性,下调E-钙黏着素在Ishikawa细胞中的表达水平。     

MFN1在肝癌转移中的调控作用研究

目的:探讨线粒体融合蛋白MFN1(mito-fusion 1)在肝癌转移中的作用及其机制。方法:1).采用免疫组化实验检测15对肝癌转移灶组织与原发灶组织中MFN1的表达,以明确肝癌转移时是否伴有MFN1表达的改变。2).采用si RNA (small interference RNA)下调肝癌细胞中MFN1的表达后,提高Transwell迁移实验和Transwell侵袭实验分别检测其迁移和侵袭能力,通过实时荧光定量PCR (Quantitative Real-time PCR,qRT-PCR)和Western blot实验分别检测基质金属蛋白酶1 (matrix metalloproteinase 1,MMP1)、MMP2、MMP7及MMP9的m RNA和蛋白表达。结果:1)肝癌转移灶组织中MFN1表达显著低于原发灶组织(P0.05)。2).下调MFN1表达后,肝癌细胞的迁移和侵袭能力显著升高,MMP7的表达显著增加,而MMP1、MMP2与MMP9的表达无明显变化。结论:线粒体融合蛋白MFN1在肝癌转移组织中表达显著降低,可能通过激活MMP7表达,促进肝癌细胞侵袭和转移。     

ADAM17调控Hippo信号转导通路对人脑胶质瘤细胞增殖和迁移的影响

为探讨去整合素-金属蛋白酶17(disintegrin and metalloproteinase 17,ADAM17)对人胶质瘤细胞增殖和迁移的影响及其调控机制,该研究用ADAM17 sh RNA质粒转染ADAM17高表达的胶质瘤细胞U87MG、U251MG,用过表达ADAM17载体转染ADAM17低表达细胞SW1783,q-PCR和Western blot检测ADAM17表达水平的变化,同时检测ADAM17和Hippo信号通路中相关蛋白质表达水平,CCK-8法分析细胞增殖能力并绘制生长曲线,划痕实验检测细胞迁移率。结果表明,下调ADAM17后,U87MG、U251MG细胞增殖和迁移能力减弱,而Hippo信号通路中MST2、p-MOB1、p-YAP蛋白表达水平升高;上调ADAM17后,SW1783细胞增殖和迁移能力增强,而MST2、p-MOB1、p-YAP蛋白表达水平降低。结果说明,ADAM17在脑胶质瘤细胞的增殖和迁移中发挥了重要作用,这可能是通过抑制Hippo信号通路来实现的,MST2被抑制,p-MOB1水平降低,从而YAP的磷酸化水平也降低,促进了胶质瘤细胞的增殖和迁移。     

丹参酮ⅡA联合CASC2对甲状腺癌细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭的影响固有淋巴细胞在脂质代谢中的研究进展

为了研究丹参酮ⅡA联合长链非编码RNA(lnc RNA)癌易感性候选基因2(CASC2)对甲状腺癌细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭的影响,该研究采用实时荧光定量PCR(q RT-PCR)检测CASC2在甲状腺癌组织中的表达。将甲状腺癌SW579细胞分为pc DNA3.1组(转染pc DNA3.1质粒), pc DNA3.1-CASC2组(转染pc DNA3.1-CASC2质粒), con组(用与丹参酮ⅡA等量的二甲基亚砜处理),药物-1、2、3、4组(分别用1、2、4、8μg/m L丹参酮ⅡA处理),药物-4+pc DNA3.1组(转染pc DNA3.1质粒且用8μg/m L丹参酮ⅡA处理),药物-4+pc DNA3.1-CASC2组(转染pc DNA3.1-CASC2质粒且用8μg/m L丹参酮ⅡA处理)。分别用细胞计数试剂盒(CCK-8)和平板克隆检测细胞存活与克隆形成;流式细胞术检测细胞凋亡; Transwell检测细胞迁移、侵袭;蛋白质印迹法(Western blot)检测蛋白P21、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Caspase-3)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)和基质金属蛋白酶-2(MMP-2)的表达。结果显示,与癌旁组织相比,甲状腺癌组织中的CASC2表达量显著降低(P0.05)。过表达CASC2明显降低SW579细胞的存活率、克隆形成数、迁移细胞数、侵袭细胞数和MMP-2蛋白表达量,显著提高细胞凋亡率、P21、Caspase-3、E-cadherin蛋白表达量(P0.05)。丹参酮ⅡA明显降低SW579细胞的存活率、克隆形成数、迁移细胞数、侵袭细胞数、MMP-2蛋白水平,显著提高细胞凋亡率、P21、Caspase-3、E-cadherin蛋白表达水平,且均呈浓度依赖性(P0.05)。丹参酮ⅡA联合CASC2明显降低SW579细胞的存活率、克隆形成数、迁移细胞数、侵袭细胞数、MMP-2蛋白表达量,显著提高细胞凋亡率、P21、Caspase-3和E-cadherin蛋白水平(P0.05)。因此,丹参酮ⅡA联合CASC2可以抑制甲状腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭,以及诱导细胞凋亡。     

PARP-1对高糖诱导的心肌细胞增殖的影响及机制研究

目的:研究PARP-1对高糖诱导的心肌细胞增殖的影响及可能机制。方法:用高糖处理H9C2细胞,qRT-PCR和Western blot检测细胞中PARP-1 m RNA和蛋白水平。H9C2细胞转染PARP-1 si RNA和si RNA control,q RT-PCR和Western blot检测细胞中PARP-1 m RNA和蛋白水平。用高糖处理转染PARP-1 si RNA后的H9C2细胞,CCK-8检测细胞增殖情况,硫代巴比妥酸法检测丙二醛(MDA)水平,黄嘌呤氧化酶法检测超氧化物歧化酶(SOD)水平,Western blot检测增殖细胞核抗原(PCNA)、p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)、磷酸化的p38MAPK(p-p38MAPK)蛋白的表达。结果:高糖诱导的H9C2细胞中PARP-1 m RNA和蛋白水平明显高于正常培养的H9C2细胞(P0.05)。PARP-1 si RNA能够明显下调H9C2细胞中PARP-1 m RNA和蛋白水平。高糖处理后H9C2细胞存活率明显降低,细胞中MDA水平升高,细胞中SOD水平降低,细胞内的PCNA水平降低,p38MAPK磷酸化水平升高,与正常培养的H9C2细胞相比,差异均具有统计学意义(P0.05)。用高糖培养下调PARP-1的H9C2细胞,细胞存活率有所升高,细胞中MDA水平降低,细胞中SOD水平也升高,细胞中PCNA水平升高,细胞中p38MAPK磷酸化水平降低,与单纯高糖培养的细胞相比,差异均具有统计学意义(P0.05)。结论:PARP-1在高糖诱导的心肌细胞中表达上调,可能通过激活p38MAPK信号途径,增加细胞脂质氧化应激抑制心肌细胞增殖。     

地高辛对结直肠癌细胞株体外生长的影响

该文研究了地高辛(digoxin)对结直肠癌HT29、SW480和SW620细胞株增殖、迁移和侵袭能力以及上皮–间质转换(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的影响。采用MTT检测不同浓度地高辛分别作用于HT29、SW480和SW620细胞株24、48、72 h后的细胞增殖。采用划痕实验测量细胞的迁移率。采用Transwell侵袭实验测定细胞侵袭能力。采用Western blot测定相关上皮–间质转换标志物E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、SNAIL、Slug和波形蛋白(vimentin)以及VEGF蛋白质水平。RT-PCR检测地高辛干预细胞后VEGF mRNA水平。结果发现,地高辛能有效抑制HT29和SW480细胞的增殖,且具有浓度和时间依赖性,但对SW620细胞无显著抑制作用。地高辛能够抑制HT29和SW480细胞的迁移和侵袭能力,但对SW620细胞无显著作用。EMT标志物检测结果发现,与对照组相比,HT29和SW480细胞E-钙黏蛋白水平显著升高,N-钙黏蛋白、SNAIL、Slug、波形蛋白水平显著降低,SW620细胞E-钙黏蛋白水平显著升高,Slug蛋白质水平显著降低,但VEGF水平在SW620细胞无明显改变而在HT29和SW480细胞中显著降低。与对照组相比,地高辛干预HT29细胞后,细胞中VEGF mRNA水平明显降低,而SW620细胞无显著变化。结果提示,地高辛能够抑制结直肠癌细胞的增殖,抑制其EMT的发展,对治疗结直肠未转移癌具有更好的潜力。     

泛素偶联酶2C促进肺癌细胞增殖和迁移与抑制细胞衰老

泛素偶联酶2C与多种肿瘤细胞的增殖密切相关,但其与肺癌发生和发展的关系尚不明确。 本研究以肺癌A549细胞为材料,通过RT-PCR、Western印迹、免疫荧光、SA-β-Gal细胞衰老染色、细胞划痕和Trans-well实验,阐明UBE2C与肺癌细胞的增殖、衰老和迁移能力的关系。结果显示,UBE2C在肺癌细胞中的表达明显高于正常细胞。利用基因修饰技术瞬时过表达或靶向沉默UBE2C后,在肺癌A549细胞中,UBE2C的mRNA和蛋白质水平显著增加3.5倍或减少0.5倍,显著促进或抑制细胞增殖,进而减少或增加细胞的凋亡率。过表达UBE2C后,显著抑制细胞衰老;但沉默UBE2C后,则增加细胞衰老。此外,过表达UBE2C后,下调转移相关基因E-钙黏着蛋白的mRNA和蛋白质表达水平,且上调波形蛋白基因的表达水平,进而促进肺癌细胞的迁移。但靶向敲除UBE2C后,上调E-钙黏着蛋白,同时下调波形蛋白表达水平,进而抑制肺癌细胞的迁移。本研究的开展将明确UBE2C在肺癌中的作用及其机制,为以UBE2C为靶点,提高病人生存期提供了理论基础。     

沉默BCAT1对肺癌细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响

目的:研究BCAT1在肺癌细胞A549的增殖、迁移及侵袭能力中的作用。方法:通过小干扰RNA(si RNA)沉默A549细胞中BCAT1的表达,细胞分为对照组(Con)、BCAT1基因沉默组(si RNA-BCAT1)和si RNA阴性对照组(si RNA-NC)。利用Western blot检测si RNA对BCAT1的沉默效果;划痕愈合实验检测沉默BCAT1后A549细胞迁移能力的改变;Transwell小室侵袭实验检测沉默BCAT1后A549细胞侵袭能力的变化;MTT实验检测沉默BCAT1对A549细胞增殖能力的影响。结果:与Con组相比,si RNA-BCAT1组的BCAT1蛋白表达明显降低(P0.05),细胞划痕愈合率明显降低(P0.05),能够穿膜的细胞数明显减少(P0.05),而Con组和si RNA-BCAT1组细胞的增殖能力比较差异无明显统计学意义(P0.05)。结论:沉默BCAT1抑制A549细胞的迁移和侵袭能力,而对其增殖能力无影响。     

IFN-γ激活ERK/Jak2-STAT信号通路诱导乳腺癌细胞过表达PD-L1和上皮-间质转化

旨在探讨IFN-γ诱导乳腺癌细胞株MDA-MB-231表面程序性死亡配体(PD-L1)的表达、对上皮间质转化的影响及其分子机制。用不同浓度IFN-γ作用MDA-MB-231细胞后,利用蛋白质免疫印迹检测PD-L1、细胞迁移相关蛋白(E-钙黏蛋白、N-钙黏蛋白、波形蛋白)、ERK、p-ERK、Jak2及p-Jak2的表达水平;通过细胞划痕实验和Transwell实验检测细胞迁移能力;利用免疫荧光实验进一步检测细胞迁移相关蛋白的表达量。结果表明,IFN-γ可上调PD-L1的表达,使细胞划痕融合率显著增高,细胞迁移速率显著加快;波形蛋白和N-钙黏蛋白的表达量升高,E-钙黏蛋白表达量下降;ERK、p-ERK、Jak2及p-Jak2表达水平显著增加。加U0126后PD-L1、ERK及p-ERK表达水平下降,而加入AG490后,PD-L1、Jak2、p-Jak2表达水平下降。结果表明IFN-γ能上调乳腺癌细胞PD-L1表达水平,促进肿瘤细胞迁移,促使细胞从上皮向间质转化,而这一过程可能与ERK及Jak2-STAT信号通路相关。     

肌动蛋白结合蛋白对肝癌细胞迁移与侵袭能力的影响及其机制研究

该文旨在探讨肌动蛋白结合蛋白(actin-binding protein,ANLN)对肝癌细胞迁移与侵袭能力的影响。应用荧光定量PCR(q RT-PCR)检测ANLN在肝癌组织和癌旁组织中的表达差异,运用慢病毒介导sh RNA干扰技术靶向敲低肝癌细胞Huh-7中ANLN的表达,并通过q RT-PCR和Western blot方法验证敲低效率;通过细胞迁移实验和侵袭实验检测肝癌细胞的迁移与侵袭能力。进一步通过q RT-PCR和Western blot检测ANLN基因敲低对基质金属蛋白酶9(matrix metallopeptidase 9,MMP9)m RNA和蛋白质水平的影响。最后,分析MMP9在ANLN敲低调控的肝癌细胞迁移侵袭过程中的作用。结果显示,在20例肝癌组织样本和癌旁组织中,ANLN在肝癌组织中m RNA水平较癌旁组织显著增高(P0.001)。其中,在发生转移的肝癌组织中,ANLN m RNA水平较无转移的肝癌组织显著增高(P0.001)。慢病毒介导sh RNA能显著抑制肝癌细胞中ANLN的表达,ANLN基因敲低能抑制肝癌细胞的迁移能力,并能显著抑制肝癌细胞的侵袭能力。机制研究发现,ANLN的基因敲低能显著抑制MMP9的表达,MMP9的过表达能逆转ANLN基因敲低对肝癌细胞迁移侵袭能力的抑制作用。该研究结果提示,在肝癌组织中,ANLN m RNA水平明显增高,ANLN的表达水平与迁移侵袭能力密切相关。ANLN基因敲低可能通过调节MMP9的表达,从而抑制肝癌细胞的迁移侵袭能力。