PPARγ对TGFβ/smad信号通路阻遏子c-Ski的上调作用

本文旨在研究过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisome proliferator-activated receptorγ,PPARγ)对动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)形成中关键信号通路TGFβ/smad途径的阻遏子c-Ski的调控作用,探讨PPARγ抗AS的分子机制。通过高脂饮食制作大鼠AS模型,检测AS斑块中c-Ski的mRNA及蛋白的表达变化;在体外培养的大鼠血管平滑肌细胞(vascular smooth musclecell,VSMC)中转染重组c-Ski质粒,并观察其对VSMC增殖及胶原分泌影响;采用real-timePCR和Western blot检测PPARγ激动剂和拮抗剂对c-Ski表达的调节,进而利用在线程序NUBIScan及荧光素酶报告基因检测明确PPARγ对c-Ski的调控机理。结果显示:AS大鼠动脉斑块中c-Skim RNA和蛋白表达显著降低;重组c-Ski转染显著抑制大鼠VSMC增殖及胶原分泌;PPARγ激动剂罗格列酮可明显上调大鼠VSMC中c-Ski表达,且这种上调可以被PPARγ拮抗剂GW9662所阻断。生物信息学分析表明c-Ski启动子区有可能的PP...     

miRNA-145对血管平滑肌细胞功能调节与心血管疾病研究进展

血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell,VSMC)是血管壁主要细胞类型,在维持血管正常生理功能过程扮演重要角色,其在正常环境下是一种具有调节血管壁张力、维持血压等功能的高度分化型细胞(收缩型)。在血管增殖性疾病的发展过程中,VSMC由分化型转化为具有合成和分泌多种基质蛋白能力的未分化型(合成型),导致自身肥大、血管内膜增厚、血管狭窄等病理结果,这些是形成高血压、动脉粥样硬化等血管增殖性疾病的病理基础。近年来发现miRNAs参与心血管生理、病理过程的调控并且与VSMC密切相关,其中miR-145经证实是正常动脉壁表达最为丰富的micoRNAs,其在VSMC功能调节中起着非常重要的作用,这可能为治疗高血压、动脉粥样硬化等血管增殖性疾病提供新的诊断、治疗依据。本文就miR-145对VSMC功能调节以及心血管疾病病理生理学意义作一综述。     

血管损伤的新靶点：平滑肌22 alpha

血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell,VSMC)表型转化是血管损伤性疾病动脉粥样硬化、高血压和血管成形术后再狭窄等的共同病理生理过程.平滑肌22 alpha (smooth muscle 22 alpha, SM22α) 是一种VSMC分化标志物,其表达具有平滑肌组织特异性和细胞表型特异性. 该蛋白不仅作为一种肌动蛋白细胞骨架相关蛋白参与VSMC骨架组构和收缩调节,它还参与VSMC的增殖、炎症和氧化应激等进程. 本文就SM22α 的结构特征及其在VSMC血管损伤中的作用机制进行综述.     

固醇调节素结合蛋白调节他汀类药物对血管平滑肌细胞作用

他汀类药物具有抗动脉粥样硬化的多向作用.其多向作用机制与他汀分子结构及其代谢过程有关,固醇调节素结合蛋白(SREBP)参与调节.他汀抑制血管平滑肌细胞(VSMC)的增生和迁移,激活VSMC的SREBPs,抑制VSMC对血管内皮生长因子(VEGF)的表达.本文综述SREBP调节他汀类药物对VSMC的作用.     

内皮素促进下丘脑—垂体—卵巢激素的释放

最近发现,内皮素(endothelin,ET)不仅具有强烈的血管活性作用,还可能作为激素调节肽参与性激素的调节。在下丘脑-垂体-卵巢轴的器官和胎盘都有丰富的ETmRNA和ET受体存在。Kanyicska等在培养的雌性大鼠垂体前叶细胞,应用ET-3(10~(-14)～10~(-6)mol/L)明显抑制垂体前叶细胞分泌催乳素(PRL),增加促黄体生成素(LH)、促卵泡素(FSH)和促甲状腺素(TSH)的释放。ET的刺激效     

瘦素对大鼠主动脉血管平滑肌细胞增殖和移行的影响

目的本实验旨在研究瘦素(Leptin)对大鼠主动脉血管平滑肌细胞(VSMC)增殖和移行的影响。方法采用原代细胞培养方法建立VSMC细胞模型;以四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法、免疫细胞化学染色等方法观察瘦素对VSMC增殖的影响;采用细胞移行实验观察瘦素对VSMC移行的影响;采用MAPK的抑制剂SB203580观察瘦素对VSMC增殖的抑制作用以探讨MAPK在瘦素促VSMC增殖中的信号转导机理。结果瘦素能显著促进VSMC增殖和移行,而MAPK的抑制剂SB203580可显著抑制瘦素对VSMC的增殖效应。结论瘦素具有明显的促VSMC增殖和移行的作用,其作用机制与激活MAPK信号途径有关。     

心钠素对内皮素促大鼠心肌细胞增殖的影响

内皮素(endothelin,ET)是新近发现的血管活性多肽,具有强大的缩血管作用。近年来的大量研究表明,ET还有强效的促进血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的作用,在高血压、动脉粥样硬化发病过程中有重要意义。心钠素(atrial natriuretic peptide,ANP)亦是近年发现的血管活性多肽,有明显的利钠、利尿     

维生素E抑制细胞的增殖

维生素E(VE)是生物抗氧化剂,具有重要的生理和药理作用,因此被广泛应用于临床。最近,Boscoboinik等发现,VE还可抑制细胞增殖,这可能是通过非抗氧化途径实现的。他们研究了VE对培养的大鼠主动脉平滑肌细胞(VSMC)、人的骨肉瘤细胞、成纤维细胞和神经母细胞瘤细胞增殖抑制作用,其中对VSMC的增殖抑制作用最为明显。在培养基中加入血小板衍生因子(PDGF)和内皮素(ET)可使[~3H]-胸腺嘧啶核苷掺入VSMC的量及细胞数量明显增加,此增殖效应可被α-生育酚     

血管平滑肌细胞表型调节机制的研究进展

血管平滑肌细胞（VSMC）的增殖和迁移是动脉粥样硬化斑块形成、高血压和血管再狭窄的共同病理特征,而VSMC表型转化是VSMC增殖和迁移的基础,研究VSMC表型调节的分子机制,对上述疾病的防治具有重要意义。本文对VSMC表型转化的影响因素、信号转导途径和转录因子的研究进展作一综述。     

血小板源生长因子-AA对高血压血管平滑肌细胞钙信号的影响

目的 :明确自发性高血压大鼠血管平滑肌细胞 (SHR VSMC)增殖与血小板源生长因子 AA(PDGF AA)、PDGF α受体表达的关系及钙信号在其中的作用。方法 :在培养的血管平滑肌细胞模型中 ,采用免疫印迹 (Westernblot)、3 H TdR及3 H Leu掺入、荧光探针标记测定单细胞内钙浓度等方法 ,观察不同来源大鼠 (SHR/WKY)VSMC ,PDGF AA、PDGF α受体和PDGF β受体表达的差异性以及在PDGF AA刺激下 ,VSMC增殖肥大反应、胞内 [Ca2 ]i变化和钙离子阻断剂 (nimodipine)对其的影响。 结果 :与WKY VSMC相比SHR VSMC中PDGF AA、PDGF α受体蛋白表达明显增加 ,而PDGF β受体蛋白表达在SHR VSMC与WKY VSMC无明显变化。在PDGF AA刺激下 ,增殖细胞核抗原 (PCNA)、3 H掺入率及胞内 [Ca2 ]i浓度在SHR VSMC明显增强 ;钙离子阻断剂 (nimodipine)明显抑制PCNA表达及3 H掺入 ,胞内 [Ca2 ]i浓度明显下降。结论 :自发性高血压大鼠VSMCPDGF A链及其α受体的自发性增高 ,可能是导致SHR VSMC异常增殖、肥大 ,从而触发血管反应性和血管构型变化的重要原因之一 ;细胞膜钙通道在调控VSMC的钙内流时起主要作用     

酸化环境对血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的影响及姜黄素对此的作用

探讨姜黄素对缺血缺氧引起细胞外环境酸化下血管平滑肌增殖的影响及可能机制。在pH 6.9的环境下体外培养大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞(VSMC),分别以姜黄素、PCTX-1等处理细胞,并设置空白对照组;采用Western-Blot法测定ASICS 1a蛋白及磷酸化ERK1/2蛋白表达,CCK-8法测定各处理组对VSMC增殖影响。结果显示pH 6.9组显著刺激VSMC的ASICS 1a和ERK1/2磷酸化表达,并促使VSMC增殖;而姜黄素显著抑制大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞上ASICS 1a及细胞内磷酸化ERK1/2蛋白表达,从而抑制VSMC增殖。在缺血缺氧所致酸化环境下,大鼠胸主动脉血管平滑肌上的ASIC 1a表达增多,引起细胞内ERK1/2磷酸化,从而对血管平滑肌的增殖进行调控,而姜黄素则表现出抑制作用。     

固醇调节素结合蛋白与动脉粥样硬化关系的研究进展

动脉粥样硬化(Atherosclerosis,AS)的发生与血浆胆固醇水平、血管平滑肌细胞(Vascular smooth muscle cell,VSMC)密切相关.经研究证明,血浆胆固醇水平和VSMC是AS发病的关键因素.血浆胆固醇水平过高会促进AS的发生、发展;VSMC、向内膜迁移、增殖形成新生内膜也在AS的发生、发展中起重要作用.固醇调节素结合蛋白(Sterol regulatory element binding protein,SREBP)在调节胆固醇合成及代谢的平衡和稳态中起独有的重要作用,其过度表达将引起脂代谢的紊乱,造成非脂肪组织的脂质积聚,促进AS的发生和发展;而且,SREBP与VSMC之间存在一定的相互关系,SREBP在VSMC表达并参与VSMC盼迁移和增殖,在AS中发挥了重要作用.     

血管舒-缩肽在血管平滑肌细胞中的表达与调控

为探讨血管舒 缩肽表达的调控机制及血管平滑肌细胞 (VSMC)在该网络平衡中的地位 ,以血管紧张素Ⅱ (AngⅡ )为诱发因素刺激培养的大鼠VSMC ,用RT PCR和放射免疫分析观察内皮素 1(ET 1)、AngⅡ、心钠素 (ANF)和肾上腺髓质素 (ADM)在VSMC中的表达与释放及相互关系 ,用电泳迁移率改变分析 (EMSA)和染色质免疫沉淀 (ChIP)分析揭示其分子机制 .在被AngⅡ处理的VSMC中 ,4种血管活性肽的表达活性均升高 ,其中缩血管肽基因表达被迅速诱导 ,而舒血管肽则是先降后升 .但刺激前后舒 缩血管肽之间的平衡关系无明显改变 .放免分析证实 ,AngⅡ可程度不同地促进 4种血管活性肽合成 ,使胞内 4种活性肽水平升高 ;对培养液中 4种活性肽进行检测的结果显示 ,AngⅡ可促进ET 1、AngⅡ释放 ,抑制舒血管肽释放 ,尤以ANF的胞内水平明显高于胞外 .EMSA分析显示 ,在AngⅡ诱导 4种肽表达的同时 ,与细胞增殖有关的转录调控因子转录激活蛋白(AP 1)与 4种活性肽基因启动子的结合活性明显增强 .ChIP结果表明 ,AP 1在染色质靶位点的募集与血管活性肽基因的表达上调有直接关系 .结果提示 ,AP 1与特异DNA顺式作用元件的相互作用参与了血管活性肽的转录激活 .VSMC不仅作为它们的效应器 ,而且还通过调节AP 1与靶基因中的共有顺式元件——     

自发性高血压大鼠中血小板源生长因子—AA及其受体表达与血管平滑机细胞增殖的关系

为明确血小板源生长因子 AA(plateletderivedgrowthfactor AA ,PDGF AA)及PDGF α受体在自发性高血压大鼠 (spontaneouslyhypertensionrats,SHR)血管平滑肌细胞 (vascularsmoothmusclecells,VSMCs)增殖中的作用 ,采用Westernblot、[3 H]TdR及 [3 H]Leu掺入率等方法 ,观察在SHR和WKY大鼠VSMC中PDGF AA及PDGF受体表达的差异 ;在PDGF AA刺激下VSMC增殖和肥大反应的变化。结果显示 ,SHR VSMC中PDGF AA、PDGF α受体蛋白表达明显高于WKY VSMC(P <0 0 1) ,而PDGF β受体蛋白表达在SHR VSMC与WKY VSMC无明显差异 ;在不同浓度PDGF AA刺激下 ,增殖细胞核抗原 (PCNA)及3 H掺入率在SHR VSMC明显增强且呈剂量依赖性增加 (P <0 0 1)。本研究表明PDGF A链及其α受体的自泌性增高 ,可能是导致SHR VSMC异常增殖和肥大 ,并导致血管构型变化的重要原因之一     

黄芩苷对血管平滑肌细胞增殖的调控作用及相关信号通路研究

血管平滑肌细胞(VSMC)过度增殖是多种血管疾病发生的根本原因,黄芩苷作为一种传统植物天然药物,具有抗菌、消炎以及保护血管等多种功能。本研究采用细胞学及分子生物学手段,通过CCK-8法检测不同浓度的黄芩苷(0μmol/L,50μmol/L和100μmol/L)对VSMC增殖的作用,同时测定增殖细胞核抗原PCNA的转录水平,进一步对VSMC增殖进行基因水平上的验证。同时,对MAPK信号通路中的关键因子ERK的表达量进行定量检测,分析黄芩苷调控VSMC增殖的信号通路。结果显示黄芩苷对VSMC增殖具有抑制作用,且呈药物剂量依赖效应;此外,VSMC中ERK的表达水平也随黄芩苷使用浓度增大而降低,从而推测黄芩苷可能通过调控ERK介导的相关信号途径实现对VSMC增殖的阻抑,达到防止血管发生病变的目的。此研究对保护血管功能和开发治疗血管疾病新药物具有积极的意义,也为代谢工程在天然药物开发方面的应用提供理论依据和实践基础。     

KLF5与c-Jun相互作用促进Ang II诱导的血管平滑肌细胞增殖

KLF5（Krüppel-like factor 5）是KLF家族转录因子中的成员,参与多种与增 殖相关基因的转录调节.通过体外培养大鼠血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cells, VSMC）,以Ang Ⅱ为增殖诱导因素,研究KLF5介导VSMC增殖的机制. 研究发现,Ang Ⅱ可剂量依赖性诱导VSMC增殖,并伴有KLF5和c-Jun蛋白表达水平的 升高.为了证实KLF5参与Ang Ⅱ诱导的细胞增殖过程,用siRNA敲低内源性KLF5的表达后,发现细胞增殖活力受到明显的抑制;交互免疫沉淀和GST pull down分析结果显示,KLF5与c-Jun在体内和体外存在物理学上的相互作用,并且Ang Ⅱ可诱导二者之间的相互缔合.这些结果表明,KLF5通过与c-Jun相互作用进而介导Ang Ⅱ诱导的VSMC 增殖.     

血管紧张素Ⅱ1型受体短发夹环RNA对大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响

目的:RNA干扰(RNAi)是一种新的高效特异地阻断基因表达的基因阻断技术.本研究旨在探讨血管紧张素Ⅱ1型受体(AT1R)的短发夹环RNA质粒(pAT1R-shRNA)对大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的影响.方法:构建pAT1R-shRNA质粒,并转染入鼠VSMC中,应用RT-PCR及Western blot检测血管平滑肌细胞AT1R的mRNA和蛋白表达的变化,验证pAT1R-shRNA是否具有RNAi作用;应用台盼蓝染色法和MTT法检测VSMC增殖情况.结果:构建的质粒pAT1R-shRNA经测序鉴定验证与预期相符.转染组AT1R的mRNA和蛋白表达明显减少,与对照组相比有显著性差异(P＜0.01);转染质粒同时加AngⅡ刺激的VSMC增生明显受到抑制,与对照组相比有显著性差异(P＜0.01).结论:构建的pAT1R-shRNA质粒具有RNAi作用,并对AngⅡ所诱导的VSMC增殖有抑制作用.     

IFN-γ参与右美托咪定在单关节炎大鼠模型中的镇痛作用

目的:探讨IFN-γ是否参与了右美托咪定在大鼠单关节炎模型中的镇痛作用。方法:选用完全弗氏佐剂(CFA)诱导的大鼠单关节炎模型,应用Von Frey纤毛检测大鼠造模以后以及造模并且鞘内连续给予右美托咪定后大鼠后足机械痛敏的变化。应用免疫荧光组织化学实验检测大鼠脊髓背角IFN-γ的定位;应用蛋白质免疫印迹检测大鼠脊髓背角IFN-γ表达的变化。结果:大鼠单关节炎模型建立后,脊髓背角IFN-γ的表达显著上调;大鼠脊髓IFN-γ定位于脊髓背角浅层;鞘内连续给予右美托咪定抑制了单关节炎大鼠的机械痛敏,并且减少了单关节炎大鼠脊髓背角IFN-γ的表达。结论:脊髓背角IFN-γ的表达水平与右美托咪定对单关节炎大鼠的镇痛作用有关。     

心钠素对培养兔血管平滑肌细胞钙内流的影响

心钠素(ANP)是由心脏分泌的具有利尿利钠降压作用的循环激素,参与体内水、电解质平衡的调节,这一作用是由细胞内第二信使两cGMP介导的。近年来发现ANP可影响细胞钙转运,具有天然钙通道阻断剂样作用,可能参与细胞钙稳态调节,但其机理尚不清楚。本工作在培养兔主动脉平滑肌细胞(VSMC)上,观察ANP对内皮素(ET)及高钙引起的细胞钙转运的影响,以探讨ANP和细胞钙转运的关系。     

苯扎贝特对培养的牛主动脉血管平滑肌细胞增殖的影响

目的探讨苯扎贝特对体外培养的牛血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMC)增殖的影响,以及可能的信号转导通路.方法采用改良的贴块法培养小牛胸主动脉VSMC,α-actin单克隆抗体免疫组织化学染色鉴定培养细胞.以MTT法反映VSMC增殖情况;用Westem Blot方法检测与细胞增殖有关的丝裂原激动蛋白激酶(MAPK)信号传导通路.结果苯扎贝特呈剂量依赖性抑制VSMC增殖,其抑制增殖的作用主要是通过MAPK传导途径.结论苯扎贝特通过抑制VSMC增殖可能参与延缓动脉粥样硬化及经皮冠状动脉腔内成行术(percutaneous transluminal coronaryangioplasty,PTCA)术后再狭窄的发生、发展.