植物低温保护剂对番茄幼苗抗寒力的影响

采用由我们研制的植物低温保护剂对番茄幼苗抗寒力的影响。用植物低温保护剂处理番茄幼苗,超氧物歧化酶（ＳＯＤ）、过氧化物酶（ＰＯＤ）、过氧比氢酶（ＣＡＴ）活性升高,丙二醛（ＭＤＡ）含量及电导率降低。脯氨酸、可溶性总糖和叶绿素含量增加;根和叶的ＴＴＣ还原率同步增大,电导率同步降低;抗寒力鉴定结果表明：番茄幼苗可抵抗－２℃─－５℃［－２℃（５ｈ）─－３℃（３ｈ）－─４℃（３ｈ）─－５℃（１ｈ）］长达１２小时的低温,田间结果表明,番茄幼苗可抵抗－２℃─４℃低温长达一周。     

低温保护剂加入/取出过程中细胞体积的极值

低温保护剂是细胞低温保存过程中必不可少的,其加入／取出过程受到细胞体积变形极限的限制．在两参数细胞渗透模型的基础上,得到了细胞在低温保护剂加入／取出过程中细胞内水体积和细胞体积极值的解析解,分析了低温保护剂的渗透性和初始浓度差对细胞体积极值的影响。     

培养和冷冻对新生大鼠胰岛活性的影响

新生大鼠胰碎片在MEM、DMEM、M-199和RPMI-1640中培养,比较培养不同天数冷冻保存,不同条件处理及液氮贮存不同时间的实验结果。表明新生大鼠胰碎片在RPMI-1640中培养胰岛素分泌量最高,随着培养时间的延长,胰岛素分泌量逐渐升高。培养6d进行冷冻保存为宜。新生大鼠胰碎片在液氮中贮存12个月分泌功能无明显变化。     

联合应用大鼠血管内皮细胞和胰岛培养对胰岛功能的影响

目的 探讨通过体外共培养胰岛和血管内皮细胞能否改善胰岛的功能.方法 SD 大鼠分离纯化出胰岛细胞,分为两组:A 组胰岛单纯培养组,B 组胰岛和内皮细胞共培养组.从大鼠的胸主动脉分离纯化出血管内皮细胞,胰岛分离纯化后通过AO/PI 染色和胰岛素释放实验来判断两组胰岛的活性.结果 共培养组胰岛在7 d 内维持正常的形态,9...     

联合应用大鼠血管内皮细胞和胰岛培养对胰岛功能的影响

目的 探讨通过体外共培养胰岛和血管内皮细胞能否改善胰岛的功能.方法 SD 大鼠分离纯化出胰岛细胞,分为两组：A 组胰岛单纯培养组,B 组胰岛和内皮细胞共培养组.从大鼠的胸主动脉分离纯化出血管内皮细胞,胰岛分离纯化后通过AO/PI 染色和胰岛素释放实验来判断两组胰岛的活性.结果 共培养组胰岛在7 d 内维持正常的形态,90﹪的胰岛通过AO/PI 染色显示良好的活性;胰岛素释放实验显示第7 天（2.21 ± 0.21）和第14 天（2.53 ± 0.21）共培养组和单纯培养组（1.94 ± 0.15,1.71 ± 0.19）刺激指数差异有统计学意义（P 〈 0.05）.结论 应用大鼠血管内皮细胞和胰岛共培养能够改善胰岛的存活及分泌功能.     

不同降温速率对脐血干细胞冷冻复苏后生物学特性的影响

考察了不同降温速率对脐血造血干细胞各种生物学特性的影响。在4℃～-40℃的降温范围内,分别选择-0.5℃/min, -1℃/min, -5℃/min的降温速率进行降温,对复苏后的脐血单个核细胞的回收率、活性和CD34+含量的变化以及BFU-E、CFUGM和CFU-MK集落的回收率进行了考察,发现在-1℃/min的降温速率下,脐血MNC回收率可达93.3%±1.8%,活性可达95.0%±3.9%, CD34^＋细胞回收率达80.0%±17.9%,BFUE回收率为87.1%±5.5%,CFUGM回收率达88.5%±8.9%,CFUMK的回收率也达到86.2%±7.4%。并且对复苏后的细胞进一步进行体外培养,发现在-1℃/min的降温速率下复苏的细胞仍然具有与未经冷冻细胞相似的扩增能力,而-0.5℃/min和-5℃/min这两种降温速率条件下复苏的细胞与未经冷冻的细胞相比差距较大。因而-1℃/min的降温速率对冻存脐血干细胞比较合适。     

外源性胰高血糖素对大鼠胰岛B细胞形态和功能的影响

探讨溃疡自愈过程中胰高血糖素对胰岛B细胞调节作用改变的可能机理,同时从形态学方面为IAPP和胰岛素相伴释放及其调节提供依据。给大鼠皮下注射胰岛高血糖素后,取胰腺用免疫组织化学、原位杂交和图像分析方法观察Ins-和I－APP-IR细胞及proIns mRNA表达的变化。结果显示;给予外源性胰高血糖素后,与对照组比较,Ins-IR细胞的场面积明显减少,而IAPP－IR细胞的场面积减少不明显,胰岛B细胞内proIns mRNA杂交信号的平均光密度明显减低。以上结果提示：（1）外源性胰高血糖素促进胰岛素和IAPP相伴释放;但促胰岛素释放作用更明显。（2）外源性胰高血糖素抑制proIns mRNA的表达。     

同种冷冻乳鼠胰腺胰岛移植对大鼠实验性糖尿病的影响

本实验研究了同种乳胰胰岛移植对链脲佐菌素(STZ)所致大鼠药物性糖尿病的影响。经16周观察发现,新鲜乳胰、组织培养的乳胰和冷冻保存的乳胰,移植于糖尿病大鼠肾被膜下第3天后,宿主血糖下降、血清胰岛素上升、肾被膜下移植组织中免疫金银染色(IGSS)切片可见黑色胰岛素反应阳性细胞,细胞内免疫金银(IGS)含量明显高于糖尿病对照组胰岛中阳性细胞中的含量,逆转糖尿病的有效率为30％～50％。经过组织培养后再冷冻保存的乳胰移植组宿主的体重和血清胰岛素含量上升,血糖浓度下降,其数值均明显地优于其它3个移植组(p<0.01),移植组织中黑色胰岛素反应阳性细胞较多,细胞内IGS含量和逆转糖尿病的有效率(100％)均明显高于其它3个移植组(p<0.01)。     

冷冻保护剂及预冷时间对河蟹精子体外冷冻保存的影响

本文以甘油、二甲亚砜（DMSO）为冷冻保护剂,采用两步降温法,以精子存活率和DNA损伤程度为检验其冷冻效果的评价指标,研究了冷冻保护剂和预冷时间对河蟹Eriocheir sinensis精子冷冻保存效果的影响。胰蛋白酶消化法获得河蟹游离精子,液氮冷冻保存8h以上,精子保存密度为10^7个／mL,伊红染色法检测精子存活率,单细胞凝胶电泳（SCGE）检测精子DNA损伤。实验共设置10个组,分别为不同浓度的单一冷冻保护剂（每种保护剂的体积百分比分别为5％、10％、12．5％、15％）和两种保护剂组合（两种保护剂在同一实验组巾的体积百分比含量均为5％、10％）。结果显示,12．5％甘油的保存效果最佳,精子存活率达到62．60％。在此基础上,以10％甘油作为冷冻保护剂,设置5、10、20、30、40min5个时间梯度,研究了预冷时间对精子冷冻保存效果的影响。结果显示预冷时间的长短对精子冷冻保存效果的影响显著,当预冷时间低于20min时,精子大量死亡,且精子DNA严重损伤;当预玲时间超过30min时,精子存活率明显提高,精子DNA损伤明显减弱。     

高浓度葡萄糖对体外培养大鼠胰岛细胞凋亡的影响

目的:探讨高浓度葡萄糖对体外培养大鼠胰岛细胞凋亡的影响及作用机制。方法:SD大鼠胰岛细胞原代培养,不同浓度的葡萄糖处理后,采用MTT比色法检测细胞存活率,Hoechst-PI染色观察细胞凋亡,电镜观察细胞超微结构改变,RT-PCR方法检测Bax及Bcl-2相关基因mRNA表达水平。结果:5.5 mmol·L~(-1),11.1 mmol·L~(-1)和22.2 mmol·L~(-1)葡萄糖处理后,胰岛细胞活性分别下降到78.08%±2.29%、58.39%±3.13%和36.05%±2.63%,与阴性对照组比较差异具有统计学意义(P0.05);Hoechst-PI染色结果显示随着葡萄糖作用浓度的增加,凋亡细胞数量也增加;RT-PCR显示胰岛细胞经不同浓度葡萄糖处理后,Bax mRNA的表达明显上调,Bcl-2 mRNA表达下调(P0.05);电镜观察结果显示随着葡萄糖作用浓度的增加,胰岛细胞超微结构损害程度依次加重。结论:高浓度葡萄糖能明显引起胰岛细胞活性的下降,诱导凋亡反应的发生,凋亡机制与Bcl-2家族蛋白相关。     

游离脂肪酸对大鼠胰岛细胞胰岛素信号转导蛋白表达的影响

目的 :探讨游离脂肪酸是否对大鼠胰岛细胞某些胰岛素信号转导蛋白的表达产生一定的影响。方法 :分离、培养新生SD大鼠胰岛细胞 ,分别与软脂酸 (0 .2 5mmol/L)或油酸 (0 .12 5mmol/L)孵育 12、2 4、36h ,提取蛋白后用Western印迹法检测胰岛素信号转导蛋白 (cPKCα、Grb2、ERK2 )的水平。结果 :软脂酸和油酸孵育 12h后 ,大鼠胰岛细胞cPKCα、Grb2和ERK2的蛋白水平同对照组相比均未发生显著变化 (P >0 .0 5 ) ;孵育 2 4h后胰岛细胞Grb2的蛋白水平同对照组相比未发生显著变化 (P >0 .0 5 ) ;cPKCα的蛋白水平同孵育 12h后相比显著上调 (P <0 .0 5 ) ;ERK2的蛋白水平同对照组相比明显下降 (P <0 .0 5 )。软脂酸和油酸孵育 36h后大鼠胰岛细胞cPKCα的蛋白水平同对照组及孵育 12h后相比显著上调 (P <0 .0 5 ) ;而Grb2和ERK2的蛋白水平同对照组及孵育 12h后相比均明显下降 (P <0 .0 5 )。结论 :游离脂肪酸可通过上调cPKCα和降低Grb2和ERK2的蛋白水平来阻滞胰岛素的信号转导 ,这可能是游离脂肪酸引起胰岛素抵抗的机制之一     

间皮素Mesothelin对大鼠胰岛结构形成和重塑作用的研究进展

大鼠胰腺发育的过程分为以细胞增生、分化为主的早中期及以结构形成、功能完善为主的后期这两个阶段,后期涉及胚胎后期胰岛结构形成和生后胰岛结构重塑.而β细胞的功能完善需要多种细胞迁移和细胞间支持黏附因子的介导,其中表达于β细胞的问皮素(Mesothelin)对细胞间的信号识别以及相互黏附有重要的作用.Mesothelin也是胰腺癌等多种恶性肿瘤的细胞表面标记物.有关Mesothelin在大鼠胰岛结构形成和结构重塑过程中的作用及其与胰腺癌形成关系的作用正处于研究之中.     

DMSO浓度及降温速率对组织工程化真皮超低温保存效果的影响

组织工程化真皮的超低温保存技术是皮肤组织工程的重要组成部分,对皮肤组织库的建立有重要意义。低温保存与低温保护剂的种类、浓度、降温复温程序及低温保护剂的添加与去除方式有着密切的关系。实验目的：研究DMSO浓度及降温速率对组织工程化真皮超低温保存效果的影响。实验方法：以培养一定时间的组织工程化真皮为试材,以不同浓度的DMSO溶液为低温保护液,以不同的降温速率降温保存,以四唑盐(MTT)比色法检测细胞存活率,辅以光学显微镜和扫描电镜观察分析。实验表明：降温速率为1℃／min,DMSO浓度为1．4mol／L时可获得在实验范围内较高的细胞存活率,为75％,超低温保存后的扫描电镜照片表明其细胞形态最为接近新鲜状态,细胞与支架材料的黏附也很紧密,这与细胞存活率的研究结果有很好的相关性。     

重组人胰岛新生相关蛋白的表达、纯化及免疫活性研究

摘要 目的：对胰岛新生相关蛋白（Islet neogenesis associated protein ,INGAP）进行表达、纯化,并检测其免疫活性。方法： INGAP基因片段插入表达载体pET22b(+),在E.coli BL21(DE3)中表达。包涵体经洗涤并用8M尿素溶解,Heparin Agrose亲合柱层析为第一步纯化,Superdex75凝胶过滤层析作为第二步精细纯化,HPLC测定INGAP蛋白的浓度,将纯化的INGAP蛋白经注射途径免疫家兔,制备兔抗INGAP血清,采用免疫双扩、ELISA及Western Blot分析INGAP的免疫活性。结果INGAP以包涵体形式表达,表达产量高达总菌体蛋白的40%左右,经Heparin Agrose亲合柱层析和凝胶过滤层析二步组合纯化目的蛋白,经HPLC测定目的蛋白的最终纯度为98.81%,表达及纯化的INGAP具有良好的免疫活性。     

5℃夜间低温对红树幼苗光合速率和蒸腾速率的影响

5℃夜间低温处理温室栽培红海榄（Rhizophora stylosa和银叶树（Heritiera littoralis)幼苗,白天20℃室温分别恢复1h和4h,测定功能叶的净光合速率、气孔导度、胞间CO2浓度、蒸腾速率和叶绿素含量。结果表明：夜间低温明显降低红海榄和银叶树的净光合速率、气孔导度、蒸腾速率和水分利用率,促进胞间CO2浓度增加,而叶绿素含量变化不大。白天空温恢复时间增长,净光合速率、气孔导率和蒸腾速率回升,胞间CO2浓度下降,红树幼苗对低温有一定的适用能力。低温处理2d,红海榄叶净光合速率的抑制程度大于1d处理,而银叶树叶净光合速率的抑制程度则有所减轻。两种红树叶气孔导度与净光合速率和蒸腾速率均呈线性关系,气孔导度是控制叶片光合成和蒸腾水分丢失动态平衡的主要因素。     

胰岛α细胞对β细胞功能的影响

众多研究表明,胰岛移植的短期效果较显著,但长期效果仍不尽人意。在胰岛移植的早期,绝大多数病人可以获得明显的治疗效果,而后大多数的病人发生进行性的胰岛功能丧失,产生这种现象的原因至今仍不甚明了。如何解决移植胰岛的长期存活问题对于胰岛移植的临床应用至关重要。近年来人们对胰岛移植失败的原因进行了不断探索,发现胰岛移植后期的失败不仅与免疫反应有关,而且与移植物的细胞组成有密切关系,即胰岛细胞间的相互作用对移植物的功能维持可能有重要影响。因此,本文就胰岛α细胞及其分泌的胰高血糖素对β细胞功能的影响作一综述。     

低温胁迫对螺旋藻脱氢酶活性的影响

低温胁迫试验结果表明,处理的温度越低、天数越长,鄂尔多斯高原碱湖的钝顶螺旋藻S1、引进的钝顶螺旋藻S2和极大螺旋藻S3细胞内脱氢酶活性越低。在每一种处理下,脱氧酶活性高低的排列顺序均为S1〉S2〉S3。脱氢酶活性的Q10值变化范围排列为S1〈S2〈S3。S1的生理活动临界低温为5℃,S2和S3的为15℃。S1对低温有较强的适应性,为耐寒植物;S2和S3为冷敏感植物。     

保护剂对重组大肠杆菌NMN转移酶稳定性的影响

通过向NMN转移酶( Nmnat)中添加保护剂以提高其热稳定性及储存稳定性,扩大酶的使用范围。研究了固体醇类(山梨醇、甘露醇)、糖类(海藻酸钠、蔗糖、甘露糖)和有机溶剂( DMSO、丙二醇-单甲醚、乙醇、甘油)对Nmnat的稳定性的作用,通过正交实验得到一种复合保护剂,并研究复合保护剂对Nmnat最适反应温度、pH稳定性、储存稳定性的影响。结果表明,山梨醇、海藻酸钠和DMSO能够显著提高Nmnat的热稳定性。复合保护剂配方为山梨醇1.5 g/L,海藻酸钠1.0 g/L, DMSO 0.5%。复合保护剂的添加使Nmnat的最适反应温度从37℃提高到50℃;50℃保温2 h酶活提高了24.5%;pH使用范围由7.0~8.0扩大到6.0~8.0;4℃储存28 d后,酶活保留率提高了15.65%。     

低温对氯化钠胁迫下蓝藻固氮活性的影响

低温加剧氯化钠对蓝藻固氮的抑制,营养液中氯化钠浓度增高时,抑制程度更甚.能源受限(暗处理和加抑制剂时的光合受抑,N_2和Ar的厌氧下呼吸代谢受阻)和氧下固氮酶受到伤害时,低温处理使氯化钠对蓝藻固氮的抑制进一步加剧.在能源和还原剂供应,合成固氨酶蛋白的物质基础(如CO_2和N_2的加合).光合作用正常进行的条件得到改善和保证,以及供应CO_2、外源蔗糖和氮氧加合时,低温加剧氯化钠对蓝藻固氮的抑制程度明显变小.     

脱水速率和降温速率对葡萄柚种子超低温保存的影响

以新鲜葡萄柚(Citrus paradise)种子为材料,使用3种脱水速率处理至约20%含水量,然后用饱和盐溶液平衡至10种不同的含水量,再进行简化的二步法超低温保存;同时,以经过15 ℃、50%相对湿度(RH)条件脱水至含水量约12%的葡萄柚种子为材料,使用程序降温仪进行5个降温速率和3个预冷温度的传统二步法超低温保存。结果表明,葡萄柚种子对脱水敏感,种子含水量越低,成苗率越低。而且,脱水速率越快,对种子的损伤越大,成苗率呈现75% RH>50% RH>15% RH;冷冻处理对种子有进一步的伤害,含水量6%～8%的种子超低温保存效果最佳,但脱水速率对超低温保存的种子成苗率的影响不明显。用传统二步法超低温保存葡萄柚种子,与预冷对照相比,经液氮冷冻的种子成苗率都有明显下降。在预冷对照组中,-2.5 ℃·min^-1降温速率的种子成苗率最高,在冷冻保存中-0.5 ℃·min^-1和-0.25 ℃·min^-1的降温速率最有利于超低温保存。预冷温度从-40 ℃降至-60 ℃,未超低温处理种子的发芽率降低,但超低温处理种子的发芽率提高。