腺苷酸环化酶毒素在无细胞百日咳疫苗中的免疫保护效果评价

目的 利用小鼠百日咳感染模型评估在无细胞百日咳疫苗中加入腺苷酸环化酶毒素的C端结构域(RTX751),能否提升无细胞百日咳疫苗的免疫保护效果.方法 ①用腺苷酸环化酶毒素的C端结构域与百日咳毒素(pertussis toxin,PT)、丝状血凝素(filamentous hemagglutinin,FHA)、百日咳黏附素...     

百日咳类毒素的分子工程

<正>本文综述了毒素产生的基因修饰和选择性位点特异性类似物分析以及它们用于制备高限性、非反应原性重组全类毒素菌苗的可能性。 许多研究工作者认为,PTX是百日咳菌苗的一种重要成分。也已公认化学或热处理的脱毒方法能消除PTX的反应原物质并导致保护性免疫原性的丧失。我们相信能够消除这种变性的蛋白结构基因工程,在合理设计新百日咳类毒素方面能具有极有意义的影响。     

鲍特氏百日咳杆菌纯组分在测试百日咳菌苗毒性的体重增加试验中的作用

<正>大多数通用的百日咳菌苗是灭活的全细胞制剂,这种制剂中的百日咳杆菌已通过加热或用适当的化学试剂处理过。所以这些菌苗含有许多百日咳杆菌的组分,如百日咳毒素(PT)、脂多糖(LPS)和丝状血凝素(FHA)。百日咳毒素是一种具有广泛生物活性的物质,它曾被命以不同的名称:淋巴细胞增多促进因子、胰岛激活蛋白、组氨敏感因子、百日咳原及百日咳毒素。     

一株减毒百日咳鲍特菌的构建及生物学特性分析

百日咳是传染性强、感染率高的急性呼吸道传染病,主要感染婴幼儿,是婴儿死亡的主要原因之一。百日咳鲍特菌（Bordetella pertussis）是引起百日咳的最主要病原菌。近年来世界各地多次出现百日咳暴发,迫切需研制更加有效的新型百日咳疫苗。本研究构建了一株减毒百日咳活疫苗BPTM1,利用同源重组方法敲除编码百日咳鲍特菌主要毒力因子百日咳毒素（pertussis toxin,PTX）和皮肤坏死毒素（dermonecrotic toxin,DNT）的基因,并用大肠埃希菌的同源基因置换了负责气管细胞毒素（tracheal cytotoxin,TCT）转运的基因ampG。通过聚合酶链反应验证了毒素及相关基因的敲除和置换,蛋白免疫印迹法检测表明PTX的S1亚基未表达。体外生长曲线和体内定植曲线均表明,相比于野生型百日咳鲍特菌BPMM,减毒BPTM1的生长和定植能力未受影响,其所致肺部病理效应减轻,而所诱导的百日咳鲍特菌特异性IgG、IgG1、IgG2a抗体保持高水平。本研究表明,减毒百日咳鲍特菌BPTM1有可能成为百日咳疫苗的候选疫苗。     

表达百日咳杆菌丝状血凝素的活aroA都柏林沙门氏菌重组菌株的抗体应答

<正>一种已经证实而且并不昂贵的百日咳菌苗是我们最为期望的。特别是对不发达国家。由毒性或潜在性毒性成份诸如内毒素、皮肤坏死毒素、百日咳毒素、腺甙酸环化酶和气管细胞毒素等中分离出具有保护性但无毒性的百日咳菌抗原如象丝状血凝素(FHA),已经使得含有大量脱毒的百日咳毒素和FHA的新型亚单位菌苗有了发展。FHA是百日咳杆菌极大的一种表面蛋白质,它对小鼠鼻腔内攻击具有保护性免疫力。在最近的一次现场试验中,分别     

美国用基因操作改进百日咳疫苗

美国国立卫生研究所(NIH)的Camille L.和Jerry M.K.鉴定了百日咳毒素基因的克隆和碱基序列。这一结果向开发安全的百日咳疫苗迈进了重要的一步。详文请参考“Science”第232卷1258—1259页。百日咳毒素是由百日咳病原菌百日咳博德特氏菌(Bordatclla pcrtussis)产生的。给儿童注射百日咳疫苗之所以常有副作用,推测其原因就是此毒素引起的。     

百日咳杆菌的抗原

鲍特氏菌属的抗原共发现３大类：凝集原,丝状血凝素（ＦＨＡ）及毒素。在凝集原中只有７是百日咳,副百日咳及支气管败血症菌所共有,其他１３种各异。ＦＨＡ与百日咳毒素（ＰＴ）为无细胞苗的主要成分。毒素有５种,最主要的是ＰＴ,其他有不耐热毒素,气管细胞毒（ＴＣＴ）,脂多糖（ＬＰＳ）内毒素及腺嘌呤环化酶毒素（ＡＣＴ）。     

重组百日咳─破伤风毒素融合蛋白诱生的抗百日咳和破伤风中和抗体及其免疫保护

重组百日咳─破伤风毒素融合蛋白诱生的抗百日咳和破伤风中和抗体及其免疫保护本文作者将含有编码百日咳毒素（ＰＴＸ）重组Ｓ１亚单位突变基因的质粒（ｐＴＸＳ１１－Ｅ１２９Ｄ）和含有编码破伤风毒素（ＴＴＸ）ｃ片段基因的质粒（ｐＳＳ１２６１）,分别经过酶的消化与...     

百日咳杆菌69KD外膜蛋白的研究进展

<正>百日咳是由百日咳杆菌引起的一种急性呼吸道传染病,严重威胁婴幼儿健康,对它的控制迄今主要依赖于菌苗预防。目前认为,百日咳杆菌有许多生活学活性成份,包括白细胞增多促进因子(LPF)[又称百日咳毒素(PT)]、丝状血凝素(FHA)、腺苷酸环化酶(AC)、外膜蛋白、脂多糖、不耐热毒素等。其中LPF、FHA、69KD外膜蛋白作为保护性抗原成份,是目前国内外学者研究的热点。     

百日咳毒素单克隆抗体在抗感染中的应用

百日咳毒素（ＰＴ）单克隆抗体（ＰＴ－ＭｃＡｂ）具有特异性中和体外和体内百日咳毒素的促进白细胞增多（ＬＰ）、组胺敏感（ＨＳ）、胰岛激活（ＩＡ）、腺苷三磷酸核糖基转移酶（ＡＤＰ－Ｒ）、ＣＨＯ细胞簇聚等多种生物学活性的特性,同时亦具有防御百日咳杆菌脑内和气溶胶攻击的保护作用。     

用合成肽标定百日咳杆菌毒素S_1亚单位的抗原位置

<正>最近已报道了百日咳毒素基因的整个序列及氨基末端序列,一级结构的明确使合或携带自然毒素抗原决定簇的肽链成为可能。短肽的抗体与天然蛋白常常结合得很好,因为这种蛋白提供的短肽序列是暴露在分子表面的。百日咳毒素由5个不同的亚单位组成,S_1—S_5。我们和其它学者已经发现,具有酶活性的亚单位S_1是免疫显性的。本研究用接种过全细胞百日咳菌苗或只含百日咳毒素菌苗的人和动物血清,对包含S_1亚单位抗原决定簇的5种多肽序列的鉴定及合成作了阐述。     

肉毒毒素中和抗体的研究进展

肉毒毒素是目前已知毒性最强的细菌蛋白质,极少量便可以致人死亡,我国每年都有散发病例出现,并且它极有可能被用于恐怖行动或被一些国家用作生物战剂。肉毒毒素中和抗体是肉毒毒素中毒后惟一有效的药物。与马源的抗毒素血清相比,重组基因工程中和抗体具有很多优势,是目前肉毒毒素预防和治疗研究的主要方向。简要综述了肉毒毒素基因工程中和抗体研究现状、保护性抗原选择、体内外中和活性检测方法及研发难点、解决方法等。     

百日咳杆菌去内毒素及保护性抗原的纯化

内毒素(Endotoxin,简称ET)是百日咳全菌苗(Bordetellapertussis vaccine)产生副作用的主要毒素之一,且不易除去。现有的分离方法,如蔗糖密度梯度离心法,较繁琐,成本高。本文采用Sepha-cryl S-300凝胶层折法可以简便有效的去除大部分内毒素。初步毒素试验结果表明:已达到日本生物制品规格的要求。两种保护性抗原FHA和LPF-HA也得到进一步分离纯化,为今后研制高效的百日咳组分菌苗提供了实验条件。     

百日咳毒素对棉铃虫神经细胞电压门控钠、钙通道的调节作用

用膜片钳技术研究了百日咳毒素对离体培养的棉铃虫幼虫中枢神经细胞电压门控钠、钙通道的影响。结果表明,对照组细胞钠通道在-50～-40mV激活,在-20mV左右电流达到最大值,在记录的20min内、电流．电压关系曲线(I-V)和电流幅值未有明显变化;细胞与百日咳毒素预孵后,钠通道在-40mV左右激活,电流在0mV左右达到最大值,在记录过程中,激活电压和峰值电压继续向正方向移动约10mV、电流持续下降。对照组钙通道在-40～-30mV激活,在0mV左右电流达峰值;经百日咳毒素处理后,I-V曲线向负电位方向移动约10mV,在记录过程中,I-V曲线继续向负电位方向移动,电流的衰减(rundown)现象比对照组严重．此外,百日咳毒素处理引起钙电流达到峰值的时问显著延长。结果提示,百日咳毒素敏感的G蛋白(Gi)可能通过直接途径或间接途径调节棉铃虫神经细胞钠、钙通道的电压敏感性和开放几率以及钙通道由备用态向激活态转化的速度。同时,经百日咳毒素处理后钠通道的,I-V曲线与抗性棉铃虫I-V曲线非常相似,可能暗示Gi蛋白在棉铃虫抗药性形成中发挥作用。     

百日咳免疫保护相关机制及评价指标的研究进展

百日咳是目前世界上普遍采用疫苗可进行免疫预防策略的疾病之一。近十年来包括中国在内的许多国家出现的百日咳发病率上升的现象已引起了全球极大关注。其主要原因可能与疫苗接种尤其是无细胞百日咳疫苗(acellular pertussis vaccine, APV)诱导产生的免疫力不断衰减有关。血清中的抗百日咳毒素特异性IgG抗体检测是最重要的免疫力评价方法之一,但到目前为止,感染百日咳菌或接种百日咳疫苗后的免疫力保护相关机制及评价指标尚无统一的标准。现就国内外百日咳相关研究进展作一概述。     

百日咳毒素和丝状血凝素的纯制和检测现况

介绍了百日咳毒素和丝状血凝素的分离纯化及纯度、活性检定的方法,对影响分离纯化这两种活性物质的因素也作了一些分析     

无细胞百日咳菌苗纯度和生物学特性研究

本文对无细胞百日咳菌苗的纯度、免疫力和毒性进行了研究。实验证明菌苗中不仅含有百日咳毒素（ＰＴ）和丝状血凝素（ＦＨＡ）,而且还含有百日咳凝集素和百日咳粘着素。菌苗的纯度为５０％－９５．７％,菌苗中ＰＴ和ＦＨＡ的比例为１：１－１：１８。     

重组芋螺毒素His-Xa-MrVIB分泌表达研究

[目的]利用简单快速的基因工程法来生产富含二硫键的芋螺毒素Mr VIB,寻找有效合成具有天然活性芋螺毒素的新途径。[方法]人工设计合成芋螺毒素Mr VIB基因引物来构建表达载体p ET22b(+)/His-Xa-Mr VIB,将其转化大肠杆菌BL21(DE3)plys S进行诱导表达。再利用Ni-NTA琼脂糖柱进行亲和层析纯化重组蛋白,Tricine-SDS-PAGE电泳分析重组蛋白表达形式。[结果]重组芋螺毒素His-Xa-Mr VIB(r His-Xa-Mr VIB)在大肠杆菌中获得有效分泌表达,经一步亲和层析获得纯度大于90%的重组芋螺毒素。[结论]基因工程方法能够有效分泌表达芋螺毒素Mr VIB,解决化学合成芋螺毒素产量低、成本高、难以纯化等问题。     

百日咳丝状血凝素的纯化及初步鉴定

目的从百日咳鲍特菌中提纯百日咳丝状血凝素(filamentous hemagglutinin,FHA),并对其进行初步鉴定。方法采用珍珠岩吸附层析和羟基磷灰石吸附层析相结合的方法,从百日咳鲍特菌培养上清中纯化FHA;SDSPAGE电泳和PAGE电泳分析样品纯度,并经斑点免疫印迹法对其进行鉴定。结果纯化样品的纯度达到95%以上,斑点免疫印迹中和FHA单抗有反应斑点,与百日咳毒素(pertussis toxin,PT)单抗无反应斑点。结论珍珠岩吸附层析和羟基磷灰石吸附层析相结合的方法可作为一种快速有效的纯化手段提取纯度较高的FHA,有望作为参考品用于百日咳FHA抗原含量检测、抗FHA血清抗体滴度检测及抗原纯度检测。     

抗百日咳毒素单克隆抗体及其应用研究进展

疫苗是预防百日咳(pertussis)的最有效措施,但无细胞百日咳疫苗接种后免疫力的迅速衰退是近年来百日咳发病率上升的原因之一。百日咳毒素(pertussis toxin, PT)是由百日咳鲍特菌(Bordetella pertussis)分泌的主要毒力因子,具有多种生物学活性。在无细胞百日咳疫苗设计初期,为确保疫苗的有效性,抗PT的单克隆抗体(单抗)常被用来检测PT表面重要的抗原表位。研究表明,与天然PT特异性结合的部分单抗无法识别经化学方法脱毒后的PT,提示化学脱毒会改变疫苗中PT的一些抗原表位,进而影响疫苗保护效果。现结合单抗可用来研究抗体干扰PT功能的分子机制,对机体在感染百日咳后的保护性免疫机制进行综述,以期为无细胞百日咳疫苗的进一步改进及开发人源化抗PT单抗治疗百日咳提供科学依据。