一个未知的特异结合雌激素效应元件编码链的单链结合…

本文介绍一个不是雌激素受体却能专一地结合雌激素效应元件编码单链的单链结合蛋白,对此蛋白在细胞中的定位,组织中的分布,热稳定性,同二价金属离子的关系作一初步研究。发现其受雌激素负调控。此蛋白在人病理样品２８例乳癌中同ＥＲ的含量似有一定的负相关关系,讨论了上述结果的意义。     

结合水分子参与雌激素受体和雌激素效应元件的体外结合

研究证明在许多生物大分子之间的相互作用中都有水分子的参与，但水分子理否参与真核基因转录调控中反式作用因子和顺式作用元件之间的结合尚未报道。本文以雌激素受体（ＥＲ）同３２ｂｐ雌激素效应元件（ＥＲＥ）体外结合为模型，对结合水分子的参与进行探索性研究。在凝胶阻滞分析反应系统中加入不同浓度的渗透剂甘油、蔗糖、二甲基甲酰胺、二甲基亚砜，以调节反应系统的渗透压，随着渗透剂浓度的增大，ＥＲ－ＥＲＥ的结合也随着增     

核因子增强雌激素受体与雌激素效应元件的结合

利用体外翻译系统,翻译了能与雌激素效应元件（ＥＲＥ）结合的全长的人雌激素受体（ｈＥＲ）。制备了切除卵巢的雌性大鼠子宫核抽提物,在雌激素存在下,此核抽提物能增强ｈＥＲ与ＥＲＥ的结合。此核抽提物在５０℃保温１５ｍｉｎ后,明显减弱了增强ｈＥＲ－ＥＲＥ结合的作用。提示了核抽提物中存在着能增强ｈＥＲ－ＥＲＥ结合的雌激素依赖的热敏感性的辅助因子。在大肠杆菌中表达了谷胱甘肽转硫酶（ＧＳＴ）融合的雌激素受体的ＤＮ     

铁效应元件结合蛋白2的特性

铁效应元件结合蛋白２的特性李昕权,郑敏（华西医科大学附属二院血液研究室,成都６１００４１）关键词铁效应元件结合蛋白２铁效应元件结合蛋白（ｉｒｏｎｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅｅｌｅｍｅｎｔｂｉｎｄｉｎｇｐｒｏｔｅｉｎ,ＩＲＥ－ＢＰ）在细胞内铁代谢平衡的转录后调...     

铁效应元件结合蛋白的双重功能

铁效应元件结合蛋白的双重功能李昕权,郑敏（华西医科大学附属二院血液研究室,成都６１００４１）关键词　铁效应元件结合蛋白,顺乌头酸酶铁代谢平衡调节中,铁效应元件结合蛋白（ｉｒｏｎｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅｅｌｅｍｅｎｔｂｉｎｄｉｎｇｐｒｏｔｅｉｎ,ＩＲＥ－Ｂ...     

腾冲嗜热菌单链 DNA 结合蛋白 SSB2 和 SSB3 新的单链 DNA 结合特性

摘要：【目的】揭示腾冲嗜热菌中两个单链DNA结合蛋白SSB2和SSB3的全新的底物结合功能及其不同的体内表达模式。【方法】利用腾冲嗜热菌复制起始位点附近的长度较短的单链DNA为底物,采用非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳及western blot方法,研究SSB2和SSB3体外单链DNA结合特征和体内表达模式。【结果】SSB2 与35nt的复制起始区单链DNA（ssDNA）结合, 形成单个SSB2-DNA复合物;当与59 nt ssDNA结合时,可以随着蛋白浓度的递增形成一个或两个SSB2-DNA复合物;而与70n     

固醇调节元件结合蛋白的研究

细胞膜中的胆固醇浓度保持动态平衡有赖于固醇调节元件结构蛋白（SREBPs)。SREBPs是DNA结合蛋白,当细胞内固醇减少时,SREBPs裂解激活蛋白（SCAP）能感受到,SCAP与SREBPs形成复合物,护送SREBPs从内质网到高尔基体,再经过两个顺序性的蛋白裂解,SREBPs的N端结构域从膜上释放出发,含有bHLH-Zip的该结构域进入到细胞核,与固醇调节元件相结合,进而激活编码胆固醇生物合成的酶和LDL受体基因的转录;当胞内固醇超载时,SCAP不再护送SREBPs到高尔基体进行蛋白裂解,核内SREBPs的N端结构域也发生降解,胆固醇合成停止。若此信号传导中任一环节有误,会导致体内固醇代谢紊乱,引起高脂血症。     

一个未知的子宫雌激素反应蛋白ULF-250的鉴定研究

摘要 鉴定一个未知的子宫雌激素反应蛋白（ULF-250）。去卵巢大鼠补充给予雌二醇造成子宫产生大量宫腔液（ULF）,受雌激素调节的蛋白分泌其中。收集ULF分别进行SDS-PAGE和双向电泳（2-DE）分离;通过Western 和2D-Western确认抗ULF-250抗体识别的蛋白成分并与凝胶上的条带或斑点相对应;对目标蛋白分别用MALDI-TOF-MS和HPLC-ESI-MS/MS两种方法进行质谱分析并获得肽段序列数据;与蛋白数据库比对及文献检索鉴定未知蛋白。2D-Western显示抗ULF-250抗体特异识别的蛋白成分。从2D胶上切下对应的蛋白斑点进行MALDI-TOF-MS。 结果提示：ULF-250是ebnerin/DMBT1。另外,经SDS-PAGE分离的250 kD蛋白条带进行液-质联用分析。结果同样提示：ULF-250是ebnerin/DMBT1。与文献报道比较,ULF-250与ebnerin/DMBT1在子宫的组织定位和调节是相同的。因此,我们认为ULF-250是子宫表达的ebnerin/DMBT1。通过2-DE结合质谱分析以及查阅文献确认未知的雌激素反应蛋白ULF-250是ebnerin/DMBT1。此外,我们的研究提示,该蛋白不仅在子宫上皮细胞表达而且分泌到子宫腔液中,其功能值得进一步研究。     

cAMP应答元件结合蛋白与痛觉调制

cAMP应答元件结合蛋白（cAMP response element binding protein,CREB）是刺激诱导的一种转录因子,通过磷酸化实现调节转录功能。疼痛和痛觉过敏是组织损伤或炎症时常伴有的生理病理过程,谷氨酸、P物质等神经递质或神经肽以及细胞内的信号转导途径参与此过程。近年来研究发现CREB通过自身磷酸化,在炎症、神经损伤等诱发的自发性疼痛、痛觉过敏及痛觉超敏中具有重要作用。本文从CREB的一般特性及其在脊髓水平的痛觉调制中的作用等方面予以综述。     

超级杂交稻乙烯反应元件结合蛋白cDNA的生物信息学分析与克隆

目的：从超级杂交稻中克隆乙烯反应元件结合蛋白（EREBP）的cDNA。方法：利用模式植物拟南芥中编码乙烯反应元件结合蛋白的cDNA,对现有的水稻基因组数据库进行搜索,获得一条高同源的未知序列。对这条未知序列的核酸序列蛋白质序列及其结构、性质、功能等进行生物信息学分析后,以超级杂交稻为材料,用未知序列设计一对简并引物,用RTPCR技术扩增后进行T-A克隆。结果：生物信息学分析结果表明,这个未知序列应为水稻中编码EREBP的cDNA;克隆后经测序获得一条915bp的cDNA,BLAST表明这条cDNA序列与未知序列的部分核酸序列的同源性达到了99％;提NCBI的GenBank后被接受,登录号为EF507537。结论：以生物信息学分析为基础,结合RT-PCR和T-A克隆技术,成功地从超级杂交稻中克隆了EREBP cDNA。     

远端上游元件结合蛋白1的生物学功能

远端上游元件结合蛋白1（far upstream element binding protein 1, FUBP1）通过特异性结合远端上游元件（upstream element, FUSE）调控原癌基因c-Myc的转录。FUBP家族包括FUBP1、FUBP2、FUBP3及FUBP4,其序列具有高度同源性,但功能各不相同。FUBP1蛋白由3个结构域构成,具有两亲性螺旋结构的N端、富含酪氨酸的C端以及1个DNA结合区域。生理状态下,FUBP1蛋白定位于细胞核。除了调控c-Myc转录外,FUBP1还可结合RNA,参与调控mRNA稳定性、病毒复制及RNA的剪接。     

cAMP反应元件萤光素酶报告基因载体的构建简

目的：构建含有cAMP反应元件（CRE）的萤光素酶报告基因载体。方法：以含有ga14位点的萤光素酶报告基因质粒为模板,利用PCR方法,在去除ga14位点的同时,连入4个CRE元件得到pCRE-luc;将该载体与G蛋白偶联受体（GPCR）共转染人胚肾细胞HEK293,测定萤光素酶活性;应用蛋白激酶A（PKA）抑制剂确认CRE的活性是否与Gs通路相关。结果：pCRE-luc的活性直接相关于GPCR的激活程度,并依赖Gs信号通路。结论：CRE萤光素酶报告基因载体构建成功,可用于检测Gs偶联GPCR的活性,为基于GPCR的高通量药物筛选奠定了基础。     

视黄醇结合蛋白RBP4可与多种核受体相互作用

视黄醇结合蛋白 (retinolbindingprotein ,RBP4 )是体内一种重要的转运蛋白 ,主要负责结合、转运全反式视黄醇 (维生素A ,VitA ) .VitA及其衍生物如11 cis 视黄醛、all trans 视黄酸等 ,均是体内非常重要的疏水分子 ,与视觉循环、胚胎发育等多种过程有关 .RBP4的功能障碍会导致     

双剪接型2.2kb乙型肝炎病毒基因组剪接变异体编码蛋白可反式激活GAL4反应元件

为研究双剪接型2.2kb乙型肝炎病毒(HBV)基因组剪接变异体特异性新蛋白—yTPds的功能,以酵母双杂交系统的诱饵质粒pGBKT7克隆yTPds基因并转化酵母细胞AH109获得相应重组子,滤纸法及液相分析法测酵母转化子内β-半乳糖苷酶(-βgal)的活性,证实yTPds蛋白可反式激活酵母GAL4反应元件(GAL4 responsive ele-ment)。在此基础上,为进一步探讨该蛋白反式激活作用的功能区域,以pGBKT7分段克隆yTPds基因,分别编码yTPds蛋白N端47个氨基酸(yTPds-N47)、N端75个氨基酸(yTPds-N75)、中部28个氨基酸(yTPds-M28)、C端92个氨基酸(yTPds-C92)、C端64个氨基酸(yTPds-C64)以及去除中部28个氨基酸的融合蛋白(yTPds-Fusion)。各重组载体转化酵母细胞AH109获得相应转化子。滤纸法定性检测酵母转化子内-βgal活性,结果显示yTPds-N75、yTPds-M28、yTPds-C92蛋白可反式激活GAL4反应元件,液相分析法显示酵母转化子内-βgal活性强弱为yTPds-M28>yTPds-N75>yTPds-C92>yTPds,提示yTPds蛋白反式激活作用的功能区域是其中部28个氨基酸,该区域对应于HBV preS1蛋白反式激活功能域。此研究证实双剪接型2.2kb乙型肝炎病毒(HBV)基因组剪接变异体特异性新蛋白具有反式激活作用,提示其可能具有重要的致病意义。     

Ligand Binding Mechanics of Maltose Binding Protein

In the past decade, single-molecule force spectroscopy has provided new insights into the key interactions stabilizing folded proteins. A few recent studies probing the effects of ligand binding on mechanical protein stability have come to quite different conclusions. While some proteins seem to be stabilized considerably by a bound ligand, others appear to be unaffected. Since force acts as a vector in space, it is conceivable that mechanical stabilization by ligand binding is dependent on the direction of force application. In this study, we vary the direction of the force to investigate the effect of ligand binding on the stability of maltose binding protein (MBP). MBP consists of two lobes connected by a hinge region that move from an open to a closed conformation when the ligand maltose binds. Previous mechanical experiments, where load was applied to the N and C termini, have demonstrated that MBP is built up of four building blocks (unfoldons) that sequentially detach from the folded structure. In this study, we design the pulling direction so that force application moves the two MBP lobes apart along the hinge axis. Mechanical unfolding in this geometry proceeds via an intermediate state whose boundaries coincide with previously reported MBP unfoldons. We find that in contrast to N-C-terminal pulling experiments, the mechanical stability of MBP is increased by ligand binding when load is applied to the two lobes and force breaks the protein-ligand interactions directly. Contour length measurements indicate that MBP is forced into an open conformation before unfolding even if ligand is bound. Using mutagenesis experiments, we demonstrate that the mechanical stabilization effect is due to only a few key interactions of the protein with its ligand. This work illustrates how varying the direction of the applied force allows revealing important details about the ligand binding mechanics of a large protein.     

雄激素应答元件假冒DNA对PSA基因启动子的抑制作用

研究雄激素应答元件假冒DNA(AREdecoy)对前列腺特异抗原 (PSA)基因启动子的抑制作用 .联合运用报告基因和假冒DNA策略 ,构建了含PSA基因 5′侧启动子区 6 40bpDNA的萤光素酶表达载体pGL3 PSA ,与人工合成的双链硫代ARE假冒DNA共转染前列腺癌细胞株PC3 M并作用不同的时间 (2 4h、4 8h、72h) .应用双萤光素酶测定系统 ,检测萤光素酶的表达活性 .结果显示 :AREdecoyDNA显著抑制报告基因萤光素酶的表达 ,抑制率可达 95 % ,而对照decoyDNA无此作用 .作用不同的时间对萤光素酶活性的抑制无显著性差异     

雌激素受体阳性乳腺癌中mTOR 蛋白的表达及与内分泌辅助治疗预后的关系

目的:研究雌激素受体阳性乳腺癌中m TOR蛋白的表达以及与内分泌辅助治疗预后的关系。方法:选取2010年6月到2011年8月我院收治的雌激素受体阳性乳腺癌且接受内分泌辅助治疗的患者110例,应用免疫组化法检测患者乳腺癌组织中的m TOR蛋白的表达,观察其与临床特征和预后的关系。结果:m TOR蛋白表达阳性者68例,m TOR蛋白表达阴性者42例,m TOR蛋白表达阳性者存在较多的组织学特征;m TOR蛋白表达阴性者无病中位生存期为(56.8±1.1)个月,显著优于m TOR蛋白表达阳性者的(32.8±2.1)个月,比较差异具有统计学意义(P<0.05);多因素分析显示,m TOR蛋白表达阳性者出现肿瘤复发转移的风险是m TOR蛋白表达阴性者的3.21倍,且是影响预后的独立性影响因子。结论:m TOR蛋白的表达阳性是雌激素受体阳性乳腺癌复发转移的独立因素,在临床上可以联合m TOR抑制剂来治疗。     

含三倍体葡萄糖反应元件的质粒的构建及序列分析

用酚氯仿抽提法提取SD大鼠肝脏的基因组DNA,PCR扩增单倍体葡萄糖反应元件（glre）。分别用SacⅠ酶单酶切glre、pUC118载体后,连接、转化,PCR筛选出含三倍体glre的质粒并测序。结果PCR扩增出51bp的目的DNA片段,与文献报道的葡萄糖反应元件glre的大小一致;连接转化后,经PCR筛选出三倍体glre,序列分析显示其基因序列和Genbank数据库中的glre基因一致。以上结果表明构建成功含三倍体glre的质粒,为构建具双向调节的胰岛素分泌调控基因质粒奠定了基础。