癫痫模型大鼠海马原癌基因c-fos mRNA和蛋白质表达时程的研究

为了探讨癫痫发病机理与原癌基因的关系,将马桑内酯注入侧脑室,于大鼠癫痫发作后不同时间点取材海马,用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹杂交和Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹分析技术对海马ｃ－ｆｏｓｍＲＮＡ和Ｆｏｓ蛋白表达的动力学进行了定量研究,激光扫描仪定量分析表明：（１）ｃ－ｆｏｓｍＲＮＡ在０．５ｈ表达最高,依次渐减,至４ｈ几无表达;（２）Ｆｏｓ蛋白在１ｈ开始表达,２ｈ最多,以后渐少。以上结果表明：ｃ－ｆｏｓｍＲＮＡ和Ｆｏｓ蛋白的表达随癫痫的发生发展出现规律性变化,ｃ－ｆｏｓｍＲＮＡ是快速,一过性表达,Ｆｏｓ蛋白的表达滞后且延长。提示：ｃ－ｆｏｓ在癫痫发病的基因机制中发挥作用,本文对此进行了讨论。本实验为深入研究癫痫发病的分子机制奠定了基础。     

老年大鼠骨组织中c-fos和BMP表达的变化

目的：研究某些调节因子对骨组织老化过程的影响,方法：应用免疫细胞化学方法,检测大鼠骨组织骨形态发生蛋白（BMP）和细胞转录调节基因蛋白c-fos的表达和相互关系,以及BMP和c-fos蛋白表达的年龄关性变化。结果青年和老年大鼠股骨组织周围骨膜下的成骨细胞以及骨组织中的某些骨细胞BMP和c-fos蛋白呈阳性表达。而老年大鼠骨组织中,BMP和c-fos蛋白的表达明显下降。结论：老年大鼠BMP和c-fos蛋白的增龄性表达变化。可能会影响老年时期大鼠骨组织的形成和改建过程。     

大鼠面部伤害性刺激后纹状体边缘区内原癌基因c-fos和NOS的表达

为了研究纹状体边缘区和痛觉的关系,用c-fos和NADPH－d双标记方法研究了大鼠面部伤害性刺激后c-fos蛋白（Fos）和NOS在纹状体边缘区的表达。面部伤害性刺激后30分钟,边缘区中即出现Fos表达,刺激后3小时,Fos表达达最高峰,而且主要在边缘区部位表达。正常大鼠纹状体边缘区中有密集的NOS阳性神经元及纤维,面部伤害性刺激3小时后,纹状体其余部位的NOS阳性胞体及纤维减少或消失,但边缘区中仍保留,并可见少数Fos和NOS双标记细胞,提示纹状体边缘区可能和面部痛觉的调制有关。     

促肾上腺皮质激素对慢痛大鼠脊髓生长抑素、c-fos表达及痛反应的影响

本研究应用免疫组化、原位杂交和痛级均数测定法,探讨鞘内注射促肾上腺皮质激素（ＡＣＴＨ）对甲醛引起大鼠脊髓内生长抑素（Ｓｏｍ）、ｃｆｏｓ表达及痛反应的影响。结果表明,足底注射甲醛可使大鼠脊髓内ｃｆｏｓ样免疫反应（ＦＬＩ）、Ｓｏｍ样免疫反应（ＳｏｍＬＩ）、ＦＬＩ／ＳｏｍＬＩ及前Ｓｏｍ原ｍＲＮＡ（ＰＰＳｍＲＮＡ）神经元数目显著增多以及痛级均数（ＰＩＲ）显著升高。而鞘内注射ＡＣＴＨ可显著抑制甲醛引起的大鼠脊髓内ＦＬＩ、ＳｏｍＬＩ、ＦＬＩ／ＳｏｍＬＩ及ＰＰＳｍＲＮＡ增多和ＰＩＲ升高效应。鞘内预先注射赛庚啶可阻断ＡＣＴＨ的抑制效应,而荷包牡丹碱、纳洛酮则无影响。结果提示,５羟色胺受体可能参与ＡＣＴＨ抑制甲醛引起的痛反应。     

大鼠卵巢不同功能阶段时c-fos表达的动态变化

目的和方法：本文用免疫组织化学方法检测了成年大鼠卵巢于不同的功能阶段和未成年大鼠外源性激素诱导的卵巢于不同的功能阶段c-fos表达的变化以及与血清E2和P含量的相关关系。结果：在成年大鼠动情前期、动情期卵巢的间质腺和基质中及动情间期和妊娠期卵巢的黄体细胞和基质中有c-fos表达,c-fos蛋白阳性信号的表达范围和表达强度在动情前期卵巢较大,动情间期和动情期卵巢较低,妊娠期卵巢最大,这种变化与血清E2和P含量的变化呈明显的正相关关系。未成年大鼠,用DES使卵泡发育至窦前期时,在卵巢中未检测到有c-fos蛋白的表达,用PMSG使贸泡发育至排卵前期时在卵巢的间质腺和基质中有c-fos表达,用PMSG和hCG后4天形成的早期黄体化卵巢c-fos在黄体细胞和基质中的表达明显升高,而于用hCG后9天形成的晚期黄体化卵巢c-fos表达明显下降,这种变化也与血清E2和P含量的变化呈明显的正相关关系。结论：c-fos与卵泡发育、排卵、黄体形成和退化等功能密切相关。     

大鼠躯体感觉皮质即早基因c-fos表达的研究

选择性地对大鼠单根触须刺激后,通过原位杂交组织化学检测相应的躯体感觉皮质内即早基因c-fos的表达、局部定位以及与刺激强度的关系。结果表明,触须的刺激导致了相应皮质内即早基因c－fos表达增加。脑皮质第4层基因表达最明显。且基因表达量与刺激强度成正比。从脑皮质细胞组成方面证实了c-fos表达主要在皮质第4层的星形细胞;在最强的刺激后,星形细胞邻近的神经元也被标记上了。结果提示：感觉输入可影响即早基因c-fos的表达,即早基因的表达受神经元活动的调节,这种基因调节是神经元整体功能所必需的一部分。     

大鼠脑室注射高渗氯化钠和蔗糖诱导饮水行为和脑内c—fos的表达

用ＳＤ种系清醒大鼠,观察脑室注射高渗物质引起的饮水及ｃ－ｆｏｓ在脑内的表达部位。实验结果表明,脑室内微量注射１．５ｍｏｌ／Ｌ、３ｍｏｌ／Ｌ ＮａＣｌ或３ｍｏｌ／Ｌ蔗糖均可诱导饮水反应,并在前脑的终板血管器官、正中视前核和下丘脑视上核与室旁核中见到Ｆｏｓ样免疫反应阳性细胞,同样在后脑的最后区、臂旁外侧核与孤束核中也能见到Ｆｏｓ样免疫反应阳性细胞,同样在后脑的最后区、臂旁外侧核与孤束核中也能见到Ｆｏｓ     

内皮素-1对培养新生大鼠心肌细胞原癌基因c-fos表达的诱导

本实验用无血清的培养新生大鼠心肌细胞,探讨内皮素１（ＥＴ１）对原癌基因ｃｆｏｓ表达的作用。结果显示：ＥＴ１可显著诱导ｃｆｏｓ的表达,其表达的高峰在３０ｍｉｎ,２ｈ恢复到正常水平,并呈剂量依赖性反应和被ＥＴＡ的特异性受体拮抗剂ＢＱ１２３所阻断;蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）激动剂ＰＭＡ可诱导ｃｆｏｓ表达,而ＰＫＣ抑制剂Ｓｔａｕｒｏｓｐｏｒｉｎｅ则可阻断ＥＴ１诱导的ｃｆｏｓ表达;钙通道阻断剂硝苯吡啶预处理心肌细胞对ＥＴ１诱导的心肌细胞的ｃｆｏｓ表达无明显的作用。这些结果提示,ＥＴ１诱导ｃｆｏｓ表达是通过ＥＴＡ受体介导的,ＰＫＣ在此过程中起重要作用。     

C-fos基因在大鼠缺血视网膜内的表达

实验用FOS免疫组化方法（ABC法）研究了缺血诱导的大鼠视网膜内c-fos原癌基因的表达情况。实验动物用升高眼压的方法做成视网膜缺血模型,依缺血后存活时间不同分15′、30′、1h、2h、4h、6h、12h七个组,每只大鼠右眼为缺血眼,左眼做自身对照眼,另设正常对照组。动物腹腔麻醉,4％多聚甲醛灌注固定,取双眼冰冻切片,片厚15μm。实验结果显示缺血后15′组大鼠视网膜内核层最先出现少量卵圆型浅棕色的FOS阳性神经元胞核,30分钟至1h FOS表达逐渐增强,节细胞层也出现FOS阳性胞核。缺血后2h FOS表达达最高峰,缺血后4h FOS阳性胞核逐渐减少,12h达正常组水平、自身对照眼及正常对照眼网膜节细胞层偶见FOS阳性胞核。     

寒冷对大鼠下丘脑核团癌基因c-fos及垂体ACTH细胞表达的变化

本实验用寒冷刺激大鼠,观察垂体ＡＣＴＨ细胞及下丘脑核团ｃ－ｆｏｓ癌基因表达蛋白出现的变化。发现寒冷能促使垂体前叶ＡＣＴＨ细胞数目增多,体积胀大,且具有粗大突起伸到扩张的血窦旁。在视交叉腹外侧的视上核（ＳＯ）神经元及视交叉上核（Ｓｃｈ）周围部神经元皆出现ｃ－ｆｏｓ强阳性反应。第三脑室侧壁室管膜上皮及少数室周核（ｐｅ）神经元为ｃ－ｆｏｓ阳性。视前内侧区（ＭＰＡ）可见分散的阳性神经元。位于室旁核内的外侧,出现ｃ－ｆｏｓ反应较浅的小神经元。本文最后探讨有关ＡＣＴＨ释放的调节。     

褪黑素对马桑内酯致痫大鼠海马内SP水平的影响

目的探讨褪黑素（melatonin,MT）对马桑内酯致痫大鼠海马内P物质水平的影响,以探讨褪黑素的抑痫作用机制。方法随机将健康成年雄性SD大鼠40只分为A、B、C、D 4组,每组10只。A组：生理盐水组;B组：马桑内酯组;C组：褪黑素＋马桑内酯组;D组：Luzindole＋褪黑素＋马桑内酯组。观察并记录行为学变化,然后分别采用免疫组织化学方法进行SP免疫组织化学染色,实时荧光定量PCR方法检测海马内SP mRNA含量变化。结果B组和D组大鼠均有不同程度的癫痫发作,而C组大鼠癫痫发作不明显,A组几乎均无发作;免疫组化结果显示,四组大鼠海马各区均有SP免疫反应阳性神经元,B组、D组与A组、C组比海马内SP免疫阳性反应明显增强（P〈0.05）,而A组与C组比无明显差异（P〉0.05）;RT-PCR结果提示,B组、D组与A组、C组相比,大鼠海马内SP mRNA明显升高（P〈0.05）,而A组与C组比无明显差异（P〉0.05）。结论MT能通过下调海马内SP水平抑制癫痫发作。     

灵芝多糖对AD大鼠海马组织c-fos基因表达的影响

目的研究灵芝多糖(GLP)对AD大鼠组织c-fos基因表达的影响。方法双侧海马内一次性注射β-淀粉样多肽25-35片段(Aβ25-35)制作大鼠AD模型,24h后治疗组用灵芝多糖给予腹腔注射7d,第8d进行Morris水迷宫检测大鼠空间学习记忆能力变化。结束后采用HE染色检测海马神经元的结构变化,免疫组织化学方法检测c-fos基因的表达以及灵芝多糖对其的影响。结果海马内注射Aβ25-35后海马细胞增生、聚集、核边聚、脆裂。GLP组病变则显著减轻,且c-fos基因表达相对AD模型组明显减少。结论灵芝多糖能明显改善AD模型大鼠低下的空间学习记忆能力,显著降低模型大鼠海马组织c-fos基因的表达,对老年性痴呆大鼠学习记忆能力可能有增强和提高作用。     

慢性复合应激对大鼠胰腺HAP1表达的影响

目的探讨慢性复合应激大鼠胰腺内胰岛内分泌细胞HAP1表达的变化及其意义。方法36只大鼠随机分为两组:慢性复合应激组和正常对照组。应激组动物无规律交替暴露于垂直旋转、睡眠剥夺、捆绑(6h/d)和夜间光照等慢性复合性应激,共6周;实验结束后,采用免疫组织化学和Western-blot等方法检测两组大鼠胰腺胰岛内分泌细胞内HAP1蛋白表达的变化。结果HAP1在大鼠胰腺内选择性表达于胰岛内分泌细胞中。与对照组相比,慢性复合应激组大鼠胰腺HAP1的表达明显增强(P<0.05)。结论6周慢性复合性应激可使大鼠胰腺中胰岛内分泌细胞的HAP1表达加强,提示HAP-1在慢性复合应激促进胰腺内分泌功能中可能发挥一定作用。     

蝎毒对癫痫大鼠海马内强啡肽原mRNA表达的影响

目的和方法：本工作用红藻氨酸癫痫模型,通过对癫痫大鼠蝎毒处理后民内哟啡肽原ｍＲＮＡ（ＫＰＵＹＮｍＲＮＡ）表达的原位杂交观察,对国产蝎粗毒抗癫痫反复发作的细胞分子机制进行初步探讨。结果：原位杂交的实验显示,三周ＫＡ后,实验对照组与空白对照组相比,腹侧海马尤其是海马门区ＰＤＹＮｍＲＮＡ阳性数目明显减少（Ｐ〈０．０１）。实验给药组大鼠８例,其中有６例腹侧海马门区ＰＤＹＮｍＲＮＡ阳性神经元数目未见减少且有     

大鼠肝脏细胞核糖皮质激素受体的测定

低浓度25nM以下的[~3H]皮质酮和大鼠肝脏细胞核的特异结台位点具有低容量、高亲和力,和甾体激素结合的特异性等特点,其特异结合量和由胞浆转位到核内的糖皮质激素——受体复合物的量平行,证明该结合位点是具有生理意义的糖皮质激素核受体。实验表明,用20nM的[~3H]皮质酮作一点分析是测定大鼠肝脏细胞核糖皮质激素受体的简便方法。用此法测定了13只成年雌性大鼠肝脏细胞核内的糖皮质激素受体,结果为34.5±4.5fmol/mg DNA。     

顺天胶囊对高脂模型大鼠血脂,血粘度和血小板凝集的影响

本文探讨了顺天胶囊对高脂模型大鼠血脂、血粘度和血小板凝集的影响。实验结果表明,顺天胶囊在0.5、1、28/ks·d连续灌胃给药30d时,能分别降低大鼠甘油三脂水平和全血粘度;1s/kg和2g/kg两组血清高密度脂蛋白含量明显升高(P<0.01),血小板聚集明显抑制,但低剂量组(0.5g/kg)对各项指标影响不明显。     

甲状腺素对大鼠实验性自体免疫心肌炎的作用

实验选用清洁级F344/NSIc大鼠,腹腔内注射甲状腺素（10μg/100g体重）,观察甲状腺素对肌球蛋白诱导的实验性自体免疫心肌炎的作用,并用免疫荧光技术结合流式细胞仪分析甲状腺素对免疫反应的影响。结果显示,甲状腺素对肌球蛋白免疫所致的心肌坏死,炎性细胞浸润和纤维化没有明显的改善作用;甲状腺素可诱导外周血B淋巴细胞比例升高。但对辅助T细胞和抑制T细胞比例。辅助T细胞/抑制T细胞比率没有影响。