牛樟芝提取物调控Nrf2/HO-1通路对酒精性肝损伤的保护作用

研究不同剂量（100、200和400mg/kg）的牛樟芝水提物（WE）、醇提后水提取物（WEE）和醇提物（EE）对酒精诱导的ICR小鼠急性肝损伤的保护作用和对Nrf2/HO-1抗氧化信号通路的影响。研究结果表明：与模型组比较,400mg/kg的WE和WEE均能显著抑制血清ALT和AST水平的升高,200mg/kg的WE和WEE分别显著降低血清ALT和AST含量。各剂量的WE、WEE和EE均能显著降低肝脏MDA含量,200和400mg/kg的WE和不同剂量的WEE均可明显提高肝脏的SOD和CAT活力。H&E染色结果表明WE、WEE和EE对酒精诱导的肝损伤均有一定的改善作用,EE处理组的效果相对较差。免疫组化染色结果表明各剂量的WE、WEE和EE均能促进Nrf2的核转位,诱导HO-1的表达,提高肝脏的抗氧化能力,对酒精诱导的急性肝损伤具有明显的保护作用。提示牛樟芝能通过调节Nrf2/HO-1抗氧化信号通路发挥解酒保肝功效。     

玉竹多糖对酒精诱导的HepG2细胞损伤的保护作用及其机制*

目的: 探究玉竹多糖对酒精诱导HepG2细胞损伤的保护作用及潜在的分子机制。方法: 通过噻唑蓝(MTT)法筛选酒精处理HepG2细胞的合适浓度和玉竹多糖干预浓度后,将HepG2细胞按照不同干预浓度(200 μg/L、400 μg/L和600 μg/L)的玉竹多糖分组,并设未添加玉竹多糖的空白组,预处理1 h后,再用4%酒精处理24 h,每组设置3个复孔,检测细胞内丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天冬氨酸氨基转移酶(AST)活性,检测细胞内活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)、白介素1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平,检测细胞Kelch 样环氧氯丙烷相关蛋白-1(Keap1)、磷酸化核因子E2相关因子 2(p-Nrf2)、磷酸酰胺腺嘌呤二核苷酸醌氧化还原酶-1(NQO1)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(cleaved-caspase-3)蛋白表达。结果: 与4%酒精处理后的HepG2细胞对比,各浓度玉竹多糖的干预能有效下调酒精诱导HepG2细胞内ALT和AST活性(P＜0.05);200 μg/L浓度玉竹多糖组的IL-1β和TNF-α水平明显下降(P＜ 0.05),而GSH水平明显上升(P＜0.01);400 μg/L和600 μg/L浓度玉竹多糖组的ROS、MDA、IL-1β和TNF-α水平明显下降(P＜0.05或P＜ 0.01),而GSH水平明显上升(P＜0.01)。玉竹多糖在有效上调酒精诱导HepG2细胞内p-Nrf2和NQO1蛋白表达的同时也下调Bax/ Bcl-2指数(P＜0.05),抑制Keap1和cleaved-caspase-3蛋白表达(P＜0.05)。结论: 玉竹多糖能通过调控Nrf2/ Keap1通路改善酒精诱导HepG2细胞氧化应激损伤,从而降低HepG2细胞炎症指数和细胞凋亡水平,其中400 μg/L和600 μg/L玉竹多糖的干预效果较好。     

牛樟芝固态发酵成分缓解L-O2细胞酒精损伤的研究

牛樟芝谷物固态发酵可产生多种生物活性成分,是具有良好应用潜力的培养方式.本文以牛樟芝青稞固态发酵物为原料,通过硅胶柱层析获得4种生物活性成分,然后利用人正常肝细胞L-O2酒精损伤模型对这4种活性成分进行功能评价.研究结果显示,酒精损伤能够导致L-O2细胞收缩,贴壁能力减弱.在所研究的4种活性成分中,AdA和Aq均能够有...     

红托竹荪多糖对大鼠酒精性肝损伤的保护作用

研究红托竹荪多糖(Dictyophora rubrovalvata polysaccharide,DRP)对酒精所致大鼠肝损伤的保护作用。采用苯酚-硫酸法测得DRP的含量为74.68%±1.32%,利用傅里叶红外光谱初步分析表明DRP是含有α-糖苷键和β-糖苷键的吡喃环多糖。当DRP浓度达到3.0 mg/m L时,DPPH自由基的清除率达到80.12%,其还原力为0.31,对羟基自由基的清除率达到88.07%。雄性SD大鼠被随机分为6组：空白对照组(NC)、模型对照组(MC)、阳性对照组(PC)、红托竹荪多糖低(LDRP)、中(MDRP)、高(HDRP)剂量干预组,连续灌胃28 d后将其安乐死,测定血清中AST、ALT、TG水平以及肝脏SOD、GSH、MDA、TNF-α、IL-6水平,并根据病理切片分析红托竹荪多糖对大鼠酒精性肝损伤的保护程度。与MC组相比,DRP各剂量组血清AST、ALT、TG水平显著降低(P<0.05),肝脏SOD和GSH水平显著上升(P<0.05),MDA、TNF-α、IL-6含量显著下降(P<0.05),肝脏细胞变性和坏死等病理现象明显改善。D...     

枸杞多糖对HepG2细胞胰岛素抵抗的改善作用及机制研究

目的：观察不同浓度的枸杞多糖（LBP）对HepG2细胞胰岛素抵抗的影响并探讨其机制。方法：采用高糖高胰岛素处理HepG2细胞24 h建立胰岛素抵抗细胞模型后,用台盼蓝检测活力大于95%的HepG2细胞,以10⁴/孔密度接种于96孔板内,细胞贴壁后以30 μg/ml、100 μg/ml、300 μg/ml的LBP培养48 h,200 μl/well,各组均设4个复孔。检测不同浓度的LBP对HepG2细胞活性及胰岛素抵抗的影响;细胞内丙二醛（MDA）含量和超氧化物歧化酶（SOD）的活性;各组细胞胰岛素信号转导通路中相关蛋白（IRS-2、PI3-K、Akt、GLUT2）的表达。结果：MTT显示：与正常对照组相比,IR模型组MDA含量显著升高,SOD活力明显降低,同时IRS-2、PI-3K、Akt、GLUT2蛋白表达水平明显下降;与IR模型组相比,中、高浓度LBP组MDA的含量明显降低,SOD的活力显著升高,且IRS-2、PI-3K、Akt、GLUT2蛋白表达水平明显升高;在相同的时间内,随着LBP浓度的增加,OD值逐渐降低;在同一浓度干预下,随着时间的延长,OD值也逐渐降低;葡萄糖消耗实验表明中、高浓度的LBP可显著提高胰岛素抵抗HepG2细胞的葡萄糖消耗量,而低浓度LBP对HepG2细胞葡萄糖消耗量无明显影响。结论：中、高浓度枸杞多糖能改善HepG2细胞胰岛素抵抗,其作用机制可能与降低细胞氧化应激水平及提高胰岛素信号传导通路相关蛋白表达有关。     

藻蓝蛋白复合物对酒精性肝损伤的保护作用

本文对藻蓝蛋白复合物保护化学性肝损伤的功效学进行了研究.以Wistar大鼠建立酒精性肝损伤模型,将藻蓝蛋白复合物分为高、中、低三个剂量组,以联苯双酯作为阳性对照组,灌胃给药42 d,分别测定血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、血清丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(CSH)、肝匀浆丙二醛(MDA)和谷胱甘肽(GSH)的含量,并对肝脏切片进行病理检查.结果表明:藻蓝蛋白复合物对血清ALT、AST具有显著的抑制作用,显著拮抗肝脏MDA的升高,显著提高肝脏GSH-Px含量.出现肝细胞浊肿、脂肪变性、点状坏死的大鼠数目极少.从而表明藻蓝蛋白复合物具有显著的保护酒精性肝损伤的功效.     

硒酸精氨酸对小鼠酒精性肝损伤的保护作用

目的探讨硒酸精氨酸对小鼠酒精性肝损伤的保护作用。方法用连续灌服酒精的方法建立小鼠酒精性肝损伤模型。将60只雄性小鼠随机分为四组：对照组,模型组,硒酸精氨酸处理组和二氧化硒处理组。连续灌胃8周后,测定小鼠血清中天冬氨酸氨基转移酶（AST）,丙氨酸转移酶（ALT）,肝匀浆中超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GPx）、谷胱甘肽（GSH）的含量。对肝脏切片做HE染色和Masson染色,在光镜下观察肝脏病理学变化。结果硒酸精氨酸能显著降低酒精性肝损伤引起的AST的升高（P〈0．01）,有效保持了肝脏中GPx和SOD的活性（P〈0．01）。病理学观察结果与酶学变化相一致,硒酸精氨酸对肝脏的保护作用明显优于二氧化硒。结论硒酸精氨酸对小鼠酒精性肝损伤具有显著的保护作用,效果也优于二氧化硒。     

枸杞多糖对四氧嘧啶损伤的大鼠胰岛细胞的保护作用

报道了枸杞多糖(Lb-PS)对4mmol／L四氧嘧啶(AXN)损伤的离体培养的大鼠胰岛细胞的保护作用。实验分为正常对照素、AXN损伤组和Lb-PS保护组。采用放射免疫分析法测定胰岛细胞内胰岛素水平以及葡萄糖刺激的胰岛素释放水平。分光光度比色法测定细胞内SOD和葡萄糖激酶的活性,以及培养基中NO和MDA的含量。结果表明,AXN显著抑制细胞内的胰岛素合成和葡萄糖刺激的胰岛素释放,以及SOD和葡萄糖激酶的活性。AXN促使培养基中N0和MDA浓度的显著增加。在同时加入AxN和105～102mg／ml Lb—PS的实验组中,均发现能不同程度地保护胰岛细胞免受AXN的损伤。Lb-PS能恢复AXN损伤的胰岛细胞的胰岛素合成和释放水平,以及SOD和葡萄糖激酶的活性,使其基本达到正常对照组的水平。Lb-PS还能降低培养基中NO和MDA的浓度。因此,Lb-PS可能通过减少胰岛β细胞的NO产量和维持SOD和葡萄糖激酶的活性,最终起到保护胰岛素合成和释放功能的作用。     

龙牙百合多糖对人肝癌细胞HepG2凋亡的影响

为研究龙牙百合多糖(LP)对人肝癌HepG2细胞抑制和凋亡的影响,采用MTT法考察了3组LP不同浓度对人肝癌HepG2细胞抑制作用,采用Annexin-V/PI双染法和Western blotting法探究了LP1和LP42个组分对人肝癌HepG2细胞凋亡作用机制。LP对人肝癌HepG2细胞抑制呈剂量依赖关系,LP4组1 mg/mL对HepG2细胞的抑制率达46.36%,效果最佳;LP1组8 mg/mL最高抑制率达43.23%;LP2组4 mg/mL最高抑制率达24.35%;LP1和LP4对HepG2细胞的晚期凋亡率显著高于早期。激活Caspase-3、Bax、蛋白表达显著升高(p0.05),Bcl-2蛋白表达水平明显降低(p0.05)。研究表明,LP通过激活死亡受体凋亡途径和线粒体途径,诱导人肝癌HepG2细胞凋亡。     

胰岛素耐受的HepG2细胞模型建立

采用高胰岛素体外诱导培养HepG2细胞,建立胰岛素耐受的细胞模型。将HepG2细胞置于5×10-7mol/L胰岛素培养液中24h,采用3H-D-葡萄糖掺入试验及残余125I-胰岛素结合率测定等方法观察高胰岛素对HepG2细胞葡萄糖摄取率及其胰岛素受体数目和功能的影响。高胰岛素诱导培养的HepG2细胞葡萄糖掺入率及残余125I-胰岛素结合率明显低于未用高胰岛素诱导的HepG2细胞(对照细胞)。将高胰岛素诱导培养的HepG2细胞置于不含胰岛素的培养液中60h,其细胞葡萄糖摄取率仍明显低于对照细胞。将HepG2细胞置于5×10-7mol/L胰岛素环境中24h,该细胞对胰岛素的生物学效应产生抵抗,其胰岛素抵抗状态可维持60h。     

钙离子调控樟芝深层发酵无性产孢及其分子机制

樟芝是原产于台湾的珍稀药用真菌,具有保肝、抗癌等活性。樟芝在深层发酵过程中能够产生大量无性孢子,但是目前对樟芝无性产孢的影响因素及其分子机制尚不明确。本研究报道了樟芝发酵培养基中Ca~(2+)浓度能够有效调控樟芝无性产孢的现象;采用双向电泳(2-DE)技术,对不添加Ca~(2+)培养(对照)的菌丝体、添加1 mmol/L Ca~(2+)培养(促进产孢)的菌丝体及添加200 mmol/L Ca~(2+)培养(抑制产孢)的菌丝体进行差异蛋白质组学分析,鉴定了参与Ca~(2+)/钙调素信号通路的CaM蛋白和HSP90蛋白,以及参与FluG调控产孢信号通路的AbaA蛋白;进一步通过生物信息学分析,预测了Ca~(2+)/钙调素和FluG介导的樟芝无性产孢信号通路模型图;采用实时定量PCR(RT-qPCR)技术,对该通路上23个功能基因的转录水平进行了分析,发现了受Ca~(2+)调控最为灵敏的7个产孢相关功能基因:crz1、hsp90、flbB、brlA、abaA、wetA及fadA。本研究结果为解析樟芝无性产孢机制提供了实验依据。     

樟芝发酵滤液干膏对酒精性肝病小鼠的保护作用

研究樟芝发酵滤液干膏(剂量为350,700和1050mg/kg)对慢性酒精喂养加急性酒精灌胃的酒精性肝病小鼠模型的保肝作用.结果表明,樟芝发酵滤液干膏能显著降低小鼠血清谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)活力;降低小鼠血清游离脂肪酸(NEFA)、总胆固醇(TC)和甘油三酯(TG)的水平;H&E染色和油红O染色显示...     

Role of oxidative stress in the pathogenesis of alcohol-induced liver disease

Abstract

Chronic alcohol consumption is a well-known risk factor for liver disease, which represents a major cause of morbidity and mortality worldwide. The pathological process of alcohol-induced liver disease is characterized by a broad spectrum of morphological changes ranging from steatosis with minimal injury to more advanced liver damage, including steato-hepatitis and fibrosis/cirrhosis. Experimental and clinical studies increasingly show that the oxidative damage induced by ethanol contribute in many ways to the pathogenesis of alcohol hepatotoxicity. This article describes the contribution of oxidative mechanisms to liver damage by alcohol.     

N-Nitrosopiperidine and N-Nitrosodibutylamine induce apoptosis in HepG2 cells via the caspase dependent pathway

The human hepatoma cell line (HepG2) exhibited a dose and time-dependent apoptotic response following treatment with N-Nitrosopiperidine (NPIP) and N-Nitrosodibutylamine (NDBA), two recognized human carcinogens. Our results showed a significant apoptotic cell death (95%) after 24 h treatment with NDBA (3.5 mM), whereas it was necessary to use high doses of NPIP (45 mM) to obtain a similar percentage of apoptotic cells (86%). In addition, both extrinsic (caspase-8) and intrinsic pathway (caspase-9) could be implicated in the N-Nitrosamines-induced apoptosis. This study also addresses the role of reactive oxygen species (ROS) as intermediates for apoptosis signaling. A significant increase in ROS levels was observed after NPIP treatment, whereas NDBA did not induce ROS. However, N-acetylcysteine (NAC) did not block NPIP-induced apoptosis. All these findings suggest that NPIP and NDBA induce apoptosis in HepG2 cells via a pathway that involves caspases but not ROS.     

Sublethal hyperthermia enhances anticancer activity of doxorubicin in chronically hypoxic HepG2 cells through ROS-dependent mechanism

Thermal ablation in combination with transarterial chemoembolization (TACE) has been reported to exert a more powerful antitumor effect than thermal ablation alone in hepatocellular carcinoma patients. However, the underlying mechanisms remain unclear. The purpose of the present study was to evaluate whether sublethal hyperthermia encountered in the periablation zone during thermal ablation enhances the anticancer activity of doxorubicin in chronically hypoxic (encountered in the tumor area after TACE) liver cancer cells and to explore the underlying mechanisms. In the present study, HepG2 cells precultured under chronic hypoxic conditions (1% oxygen) were treated in a 42°C water bath for 15 or 30 min, followed by incubation with doxorubicin. Assays were then performed to determine intracellular uptake of doxorubicin, cell viability, apoptosis, cell cycle, mitochondrial membrane potential (MMP), reactive oxygen species (ROS), and total antioxidant capacity. The results confirmed that sublethal hyperthermia enhanced the intracellular uptake of doxorubicin into hypoxic HepG2 cells. Hyperthermia combined with doxorubicin led to a greater inhibition of cell viability and increased apoptosis in hypoxic HepG2 cells as compared with hyperthermia or doxorubicin alone. In addition, the combination induced apoptosis by increasing ROS and causing disruption of MMP. Pretreatment with the ROS scavenger N-acetyl cysteine significantly inhibited the apoptotic response, suggesting that cell death is ROS-dependent. These findings suggested that sublethal hyperthermia enhances the anticancer activity of doxorubicin in hypoxic HepG2 cells via a ROS-dependent mechanism.