3'''',5''''-cAMP对艾氏腹水癌细胞膜功能的作用(cAMP的转运和膜蛋白分子的侧向运动)

本工作用外源性cAMP加氨茶碱处理艾氏腹水癌小鼠,于不同瘤龄期观察到癌细胞膜对cAMP的转运功能和膜内蛋白质分子侧向扩散运动的变化、以及膜内可动性蛋白质分子的百分比的改变。这些表型变化均在接种后5—7天最为显著。接种后第7天,实验组癌细胞膜对cAMP的转运加强,而膜内蛋白质分子侧向扩散运动??减慢,抑制率达72.8%,二者P值均小于0.01。而接种后第9天,实验组与对照组之间二者变化均无统计学差异。这些变化表现了癌细胞膜的功能状态的变化。进一步阐明了我们过去工作——3’,5’-cAMP对体内艾氏腹水癌细胞作用机理,接种后第9天癌细胞内cAMP水平升高不是外源性cAMP的积累,而是内源性的代谢结果;阐明了接种后第5天cAMP-PDE活性下降的动因。同时我们也进一步看到膜功能、膜结构和胞质内cAMP水平及其二酯酶活性等变化的动力学关系,以及它们和癌细胞增殖抑制之间的相互关系。从而说明这些变化在癌细胞“逆转”中的意义与其内在联系。     

用原位电泳技术测定艾氏腹水癌细胞膜的流动性

细胞膜组分(膜蛋白、膜脂等)分子能沿膜进行侧向扩散运动,研究这种运动对了解细胞的功能有重要意义。原位电泳(In Situ Electrophoresis)是近年发展起来的测量细胞膜组分侧向扩散的新技术之一。我们用这种技术研究了小鼠艾氏腹水癌细胞膜ConA(Concanavalin A)受体的侧向扩散,并测得在22℃时,其侧向扩散系数为3.2×10~(-10)cm~2/see。实验结果提示,侧向扩散系数具有较大离散性可能是癌细胞的特征之一。     

外源性层粘连蛋白对腹水型肝癌细胞内微丝组装和细胞游动的作用

本文研究外源性层粘连蛋白与癌细胞膜上受体结合调节胞内肌动蛋白微丝组装与改变细胞游动之间的关系,以及影响膜上层粘连蛋白受体的侧向扩散运动及膜脂分子流动性变化之间的关系.用各种荧光技术,如荧光显微米,荧光漂白恢复技术和荧光流式细胞术得到了明显的证据.层粘连蛋白与肝癌细胞膜有结合,使分散的腹水肝癌细胞粘连聚集,并膜下周动蛋白微丝增加,当把癌细胞分开则细胞从原位游动很大距离.如不分离粘连的细胞可减少其脱落和转移.层粘连蛋白与受体结合则受体的侧向扩散系数减小,膜脂流动性降低,使膜上分子运动受影响,对癌的生长不利.     

膜蛋白侧向扩散运动的测定

根据生物膜流动镶嵌模型,生物膜的基本结构是功能蛋白质分子浮动镶嵌于类脂双分子层中。带有双亲性基团(亲水基和疏水基)的类脂分子在水解质中由于其结构特性可形成有序的溶致近晶相液晶,蛋白质分子嵌于双层膜内,它处于液晶态环境里,具有快速扩散的可能性。在合适的条件下,蛋白质分子在膜中可进行快速的自由旋转扩散和侧向扩散运动。由于     

人鼻咽癌细胞纤维肌动蛋白的共聚焦激光扫描显微镜观察

为探讨高分化和低分化鼻咽癌细胞纤维肌动蛋白（F-actin)的空间结构,采用共聚焦激光扫描显微镜光学切片技术结合异硫酸氢荧光素－鬼笔环肽（FITC－phalloidin)标记F-actin、碘化吡啶（PI）标记核酸的荧光探针双重标记技术,对鼻咽癌细胞F－actin进行光学切片、三维重组及形态学观察。实验结果可见高分化鼻咽癌细胞F－actin呈芒刺状分布于细胞表面,而在细胞突起末端细胞间连接处呈束状,放射状密集分布;代分化鼻咽癌细胞F－actin明显少于高分化鼻咽癌细胞,仅沿细胞膜表面呈弯曲细小绒毛状分布。结果表明F－actin在细胞内的空间分布与鼻咽癌的分化类型有关,肿瘤或恶性转化细胞的F－actin在形态和结构方面有异常改变;共聚焦激光扫描显微镜光学切片结合荧光双重标记技术是研究细菌骨架结构的理想方法。     

两种人胃癌细胞M期与间期时相质膜表面Con A受体复合物分布及侧向运动

利用荧光标记和荧光漂白恢复方法研究了两种人胃腺癌细胞M期与间期时梠中,细胞膜表面ConA受体复合物分子的分布与侧向运动.结果表明:MGC80-3细胞M期时相与SGC7901细胞间期时相膜表面ConA受体复合物分布近似,其侧向运动方式呈扩散型;SGC 7901 M期时相细胞膜表面ConA受体复合物的分布与MGC80-3细胞间期时和相基本类似,其侧向运动主要是流动型.凡是受体复合物是流动型运动的细胞.其膜上可动分子的百分比都寓于扩散型运为的细胞,P值小于0.01.     

两种人胃癌细胞M期与间期时相质膜表面Con A受体复合物分布及侧向运动

利用荧光标记和荧光漂白恢复方法研究了两种人胃腺癌细胞M期与间期时梠中,细胞膜表面ConA受体复合物分子的分布与侧向运动.结果表明:MGC80-3细胞M期时相与SGC7901细胞间期时相膜表面ConA受体复合物分布近似,其侧向运动方式呈扩散型;SGC 7901 M期时相细胞膜表面ConA受体复合物的分布与MGC80-3细胞间期时和相基本类似,其侧向运动主要是流动型.凡是受体复合物是流动型运动的细胞.其膜上可动分子的百分比都寓于扩散型运为的细胞,P值小于0.01.     

血清抑癌多肽某些生物学特性的研究

血清抑癌多肽(SCSP)在体外可以杀伤小鼠不同种类的腹水型癌细胞,如肝癌细胞、S180细胞、白血病细胞等。但它对小鼠的非癌细胞没有明显影响,对不同种类的人癌细胞株没有普遍的杀伤作用。 用反向间接血凝法检验结果表明,血清抑癌多肽可能由宿主脾细胞产生,而非来自癌细胞。 用超速离心法分离小鼠血清脂蛋白VLDL和HDL,并检测脂蛋白中SCSP含量与其对癌细胞杀伤作用的关系,相关性检验结果表明它们之间有相关关系。SCSP的含量高,则对癌细胞的杀伤作用强。     

伴刀豆球蛋白A和层粘连蛋白与膜受体结合下膜分子运动及微丝组装变化的比较

研究伴刀豆球蛋白A和层粘连蛋白分别与小鼠腹腔巨噬细胞膜受体结合下引起细胞膜分子运动的变化和对微丝组装的影响.结果表明,伴刀豆球蛋白A和层粘连蛋白作用下均导致膜表面蛋白分子的侧向扩散速率减慢,膜脂流动性降低,加快膜内微丝组装并使微丝含量增加.两配体作用下引起细胞上述反应有相似性.     

伴刀豆球蛋白A和层粘连蛋白与膜受体结合下膜分子运动及微丝组装变化的比较

研究伴刀豆球蛋白A和层粘连蛋白分别与小鼠腹腔巨噬细胞膜受体结合下引起细胞膜分子运动的变化和对微丝组装的影响.结果表明,伴刀豆球蛋白A和层粘连蛋白作用下均导致膜表面蛋白分子的侧向扩散速率减慢,膜脂流动性降低,加快膜内微丝组装并使微丝含量增加.两配体作用下引起细胞上述反应有相似性.     

刀豆球蛋白A对Ehrlich腹水癌细胞的膜电位和表面电荷的影响

本文报告用荧光探剂diS-C_3—(5)和细胞电泳技术研究刀豆球蛋白A(ConA)作用于Ehrlich腹水癌细胞引起的膜电位和表面电荷的变化.ConA与细胞膜相应受体结合,导致在膜上的diS-C_3-(5)的荧光强度增加,表明细胞去极化.经用缬氨霉素诱导的钾扩散电位校正,与光学讯号变化相应的膜电位变化约是20mv.细胞经G毒毛旋化苷处理后,ConA引起的去极化程度比未处理过的细胞大.ConA作用于Ehrlich腹水癌细胞使细胞电泳迁移率变小.表明细胞表面负电荷数目减少.本文对这些变化的可能机制和相互关系进行了讨论.     

对F-actin的新认识

T淋巴细胞寿命长且具有高度可移动性,它们在循环血和外周组织中快速移动而寻找抗原。细胞骨架蛋白actin在该过程中有重要作用。其中作为不同细胞骨架结构组成原料的F-actin是研究热点。Actin相关蛋白2／3（Arp2／3）复合物构成F.actin的结构基础,使T细胞具备迁移的能力。此复合物组成激活T细胞和抗原提呈细胞之间的信号突触。因此,F．actin一直被认为是发挥正性作用的物质,它对于细胞的移动和细胞信号的维持是必需的。最近Foeger等研究者认为F-actin不一定仅仅具有正面作用。当Arp2／3天然的拮抗剂coronin-1蛋白缺陷时,正常发育的T细胞中F-actin增加。但是,此时趋化反应受到抑制,线粒体膜电位降低,细胞迁移能力和生存能力降低,最终导致细胞死亡,引起淋巴细胞减少症。但是coronin-1缺失不影响免疫突触的形成和T细胞的激活。Coronin-1使Arp2／3活性降低,但稳定性增加可能是上述现象的原因之一。     

日本发现命令癌细胞转移的蛋白质

日本名古屋大学高桥雅英教授等人最近发现命令癌细胞向其他脏器扩散的蛋白质“GIRDIN”,一旦这种蛋白质发挥作用,癌细胞就会向体内其他组织转移,从而使病情恶化。高桥在实验中给这种蛋白质施以细胞增殖因子,使其发挥作用,结果发现通常不移动的癌细胞开始变形移动,并转移至人体组织深处,或者从这一器官转移到另一器官。蛋白质“GIRDIN”通常在受精卵发育过程中与神经细胞的移动和血管的形成有关,但与癌细胞转移有关还是首次发现。摘自《科学时报》2005年9月8日日本发现命令癌细胞转移的蛋白质     

防癌细胞扩散的两项成果

癌细胞是正常细胞因某种因素（如内因的细胞DNA异化等和外因的致癌物诱发）而造成的恶果。一旦在机体内扩散而又未来得及有效遏制,无疑对机体的安全构成严重威胁。防止癌细胞扩散是战胜癌症极为重要的一步,也是一个重要难题。国内外对癌细胞扩散的研究格外活跃。有两项成果值得注意：一、RNA可阻断癌细胞扩散：英国牛津大学研究人员发现利用RNA分子能够阻断肿瘤细胞中刺激癌细胞扩散的危险基因,从而为至于癌症带来新希望。     

肌动蛋白解聚因-子/丝切蛋白:肌动蛋白重塑蛋白质家系

肌动蛋白解聚因子／丝切蛋白(actin depolymerizing factor／cofilin,ADF／cofilin)是肌动蛋白结合蛋白(actin—binding protein)家系。迄今为止,可以在所有的真核细胞中检测到ADF／cofilin。它们调节(纤)丝状肌动蛋白细胞骨架(F—actin eytoskeleton),影响细胞的各种生理功能。不同的生物有不同的ADF／cofilin,但其功能基本相似。ADF／cofilin可以使(纤)丝状肌动蛋白(F—actin)解聚合,而且这种解聚合活性是可逆的,ADF／cofilin切割F-actin并且能提高球状肌动蛋白(G—actin)离开纤维突出端(pointedend)的能力,其作用受很多因素调控。     

层粘连蛋白与顺铂对腹水肝癌细胞内微丝的共同作用关系

本文探讨在外源性层粘连蛋白与抗癌药物顺铂的共同作用下,癌细胞内微丝组装的变化。结果发现外源性层粘连蛋白与小鼠腹水型肝癌细胞膜受体结合后,促进肌动蛋白微丝组装,使其含量增加;而多靶性抗癌药物顺铂与肌动蛋白微丝的结合,抑制微丝组装过程,造成微丝含量减少;两种试剂共同作用于癌细胞时,肌动蛋白微丝的含量与对照组相比非常接近。本研究为上述两种物质对癌细胞内微丝组装的拮抗性作用提出直接证据。     

人胃癌细胞在丁酸钠的诱导下膜分子运动与膜相关骨架的关系

体外培养的人胃癌细胞,用丁酸钠处理后,显示细胞表面FN及细胞胞质微丝的变化,同时用荧光漂白恢复方法对细胞膜ConA受体复合物侧向扩散运动进行测定。结果表明,经丁酸钠处理后的细胞,胞质微丝及细胞膜表面FN均较对照组增加,而细胞膜分子侧向扩散运动减慢,说明与细胞膜相连的细胞骨架的变化对膜分子侧位运动具有牵制作用。     

BRD7调控Rb/E2F通路的分子机制研究

BRD7是采用cDNA代表性差异分析法克隆的一个新的Bromodomain基因,过表达BRD7可抑制鼻咽癌细胞的生长和细胞周期进程,同时发现BRD7基因可以调控Rb/E2F通路的活性.该研究旨在进一步探讨BRD7调控Rb/E2F通路的分子机制.通过蛋白质印迹和RT-PCR实验方法发现,BRD7能够降低Rb的磷酸化水平,抑制cyclinD1、cyclinE的蛋白质表达,上调CDK4抑制子P19的mRNA表达,但对CDK4和CDK2的蛋白质表达没有明显影响;通过荧光素酶实验从转录调控水平进一步证实了BRD7能够明显抑制cyclinD1启动子活性;采用反义核酸技术抑制COS7细胞内源性BRD7的表达后,发现cyclinD1、cyclinE、磷酸化Rb的蛋白质表达水平上调,并且可以促进细胞生长.这些结果表明:BRD7参与调控Rb/E2F信号通路中重要靶分子的表达,抑制Rb/E2F通路的活性,从而阻止细胞周期G1-S期进程,抑制鼻咽癌细胞生长.     

正常小鼠肝和腹水型肝癌细胞核内酸溶性蛋白质磷酸化的比较研究

染色质的组成成分,组蛋白和非组蛋白在特异的蛋白激酶作用下可以发生磷酸化修饰,组蛋白和非组蛋白的磷酸化和脱磷酸化可能在染色质的结构,基因表达以及DNA复制中起着重要的作用。本文比较是小鼠腹水型肝癌细胞核和正常小鼠肝细胞核内酸溶性蛋白质及其磷酸化的差异。正常小鼠肝细胞核酸溶性蛋白质的电泳染色图谱有一条明显可见的组蛋白H_1~0蛋白带,而对小鼠腹水型肝癌来说,此带极浅,但在腹水型肝癌细胞核酸溶性蛋白质的电泳染色图谱上可见到表观分子量约为68K的一条蛋白带,而正常小鼠肝未见此带。此外,从电泳胶片~(32)P放射自显影图谱可见腹水型肝癌组蛋白H_1,H_2A和非组蛋白带Ⅱ(MW43K),带Ⅲ(MW.67K)带Ⅳ(M.w.97K)磷酸化程度明显高于正常小鼠肝。     

纳米狭缝中Aβ蛋白构象变化的间距作用

目的 金属表面对蛋白质分子具有吸附作用,然而在纳米尺度内,蛋白质分子构象受到狭缝的间距作用尚未明确。本文通过在分子动力学模拟中建立不同间距的金原子层,研究纳米级金属狭缝中蛋白质分子构象变化。方法 使用GOIPCHARMM力场在Au (111)金原子界面间对Aβ1-42蛋白单体进行分子动力学仿真,研究无狭缝的水溶液环境下和由5.0、5.5以及8.5 nm狭缝结构与Aβ蛋白相互作用及蛋白质构象变化。结果 当金狭缝结构间距从5.0 nm增加到8.5 nm,Aβ蛋白分子与两侧金层相互作用可由单表面吸附、双表面吸附过渡到无吸附。结论 Aβ蛋白分子在金狭缝结构中与表面发生相互作用,随狭缝间距和蛋白质分子距界面距离的变化,蛋白质分子的状态可能表现为单表面吸附、双表面吸附和无吸附3种状态。