今年试销用重组原株培育的弱毒病毒接种苗

日本公司从4月中旬向合同农家试销接种了黄瓜花叶病病毒(CMV)的弱毒株。利用基因操作保存这种弱毒病毒的原株。在日本首次实用化用基因操作生产的与农业有关的商品。该公司本来预计今年销售现在延期销售。无尝地向加工用番茄的合同栽培农家提供弱毒病毒接种株(10公顷),预计明年开始销售接种苗。CMV是由蚜虫传播的番茄的天敌。是以RNA为染色体基因的RNA病毒。在大田栽培因CMV导致的条腐病使产量激减30～50%。由于未找到抗CMV的抗性基因,所以用普通育种方法不能开发出抗性苗。     

黄瓜花叶病毒致弱卫星RNA对辅助病毒含量的影响

为研究黄瓜花叶病毒(CMV)弱病毒株的基因组RNA和卫星RNA的含量变化,将一个卫星RNA介导的CMV弱病毒株NDM-1与CMV强毒株在4种寄主系统上进行对照实验.采用RNA点杂交方法,检测从早期接种病毒到大田释放阶段（病毒接种后5到40天）,寄主植物叶组织中的基因组RNA和卫星RNA的相对含量变化.结果显示：弱病毒株NDM-1基因组RNA和卫星RNA负荷量具有寄主效应和时间效应,趋势一致但程度不同.它们在番茄上的变化规律不同于其他寄主而且病毒的致弱效果最明显：在接种后的5～10天 (生产上接种育苗的保护期) ,基因组RNA和卫星RNA相对含量上升,到40天(大田释放期) 时回落至最低.比较NDM-1于不同时间在各寄主上的卫星RNA和基因组RNA的相对比值：在40天时,寄主番茄上的相对比值达15.8,与在其他寄主上和其他时间段比较均有显著差异,即此时卫星RNA达到含量优势.说明弱病毒NDM-1在番茄上的致弱机制为:卫星RNA的大量复制对CMV基因组RNA产生抑制作用.此弱病毒株在烟草和心叶烟中的变化规律基本一致.     

延边地区烟草病毒种类及病毒病的防治

对田间烟草进行病毒病种类的调查和鉴定结果表明,延边地区感染烟草的病毒主要是烟草花叶病毒(TMV)和黄瓜花叶病毒(cMV),而以两种病毒的混合侵染为主,达80-1 00％。弱毒疫苗N14．和CMV卫星RNA生防制剂S5,混合使用,或CMV卫星RNA生防制剂S512单独使用防治烟草病毒病,与不使用的对照比较,防治效果明显,达70.2—77.1％,上等烟比率达22.3—30.9％,而对照只有9．2-1 9.2％,亩收入比对照增加21．7—8 0.8％。     

抗CMV的重组番茄

日本烟草产业遗传育种研究所利用基因操作培育出抗黄瓜花叶病毒(CMV)的番茄。导入病毒外壳蛋白基因从而对CMV有抗性的番茄曾由美国Monsanto公司、农林水产省生物资源研究所,武田药品和坂田种子等公司开发过。但是通过导入卫星RNA使重组番茄表现CMV抗性这还是第一次。在申请专利方面与Monsanto公司重组番茄的专利不冲突。CMV的感染可诱导卫星RNA的扩增,使植株产生CMV耐性。这种植株体内的卫星RNA拷贝数并不多。因此,估计能作为杂交种子的亲本使用。实用性极高。番茄在日本的栽培面积约15000万公顷。其中10％发生花叶病。估计大部分是CMV。目前没有什么消     

表达黄瓜花叶病毒卫星RNA的转基因烟草耐烟草花叶病毒

表达黄瓜花叶病毒(CMV)的卫星RNA的转基因烟草可以抗CMV的侵染.为了决定这些植物对其它病毒,如烟草花叶病毒(CMV)的安全性,我们对这些植物接种CMV.结果发现 卫星RNA可减弱TMV引起的症状,井降低病情指数,然而却对TMV在植物中的积累没有明显影响.这一发现有助于对卫星RNA抗病机制的理解,有助于含卫星RNA的生防制剂及表达病毒卫星RNA的转基因植物的应用.本文在国际上首次报道卫星RNA可减弱非相关病毒引起的症状.1 材料和方法1.1 病毒及植物烟草花叶病毒(TMV),烟草G140种子及枯班三生烟种子均为中国科学院微生物研究所病毒室保存;含黄瓜花叶病毒卫星RNA-R1基因的烟草G140(烟Sat-G140)为中国科学院微生物研究所病毒室培育,所用材料为第三代种子.     

表达黄瓜花叶病毒卫星RNA的转基因烟草耐烟草花叶病毒

表达黄瓜花叶病毒(CMV)的卫星RNA的转基因烟草可以抗CMV的侵染.为了决定这些植物对其它病毒,如烟草花叶病毒(CMV)的安全性,我们对这些植物接种CMV.结果发现 卫星RNA可减弱TMV引起的症状,井降低病情指数,然而却对TMV在植物中的积累没有明显影响.这一发现有助于对卫星RNA抗病机制的理解,有助于含卫星RNA的生防制剂及表达病毒卫星RNA的转基因植物的应用.本文在国际上首次报道卫星RNA可减弱非相关病毒引起的症状.1 材料和方法1.1 病毒及植物烟草花叶病毒(TMV),烟草G140种子及枯班三生烟种子均为中国科学院微生物研究所病毒室保存;含黄瓜花叶病毒卫星RNA-R1基因的烟草G140(烟Sat-G140)为中国科学院微生物研究所病毒室培育,所用材料为第三代种子.     

植物病毒弱株系及其应用III．烟花叶病毒番茄株弱毒疫苗N14的安全性测定

烟花叶病毒番茄株弱毒疫苗N14接种17科54种植物,只能感染7科20种植物,其中除矮牵牛(Petunia hybrida)表现轻花叶症状外,其它植物均无症状。N14。与CMV、PVX和PVT混合接种番茄时的病情指数只与CMV、PVX和PVY单独接种番茄时的病情指数相等或略高。6年来,N14 已连续传代100多次,毒力无明显变化,使用N14多年的地区未出现问题,为使用N14的安全性提供了依据。     

黄瓜花叶病毒和烟草花叶病毒在双抗转基因线辣椒内的增殖

本试验以转化CMV CP和TMV CP基因的转基因线辣椒纯合系植株作为研究试材 ,比较了单独或混合接种CMV和TMV后 ,转化线辣椒的抗病性表达特点 ,并测定了两种病毒在植株体内的病毒含量。结果表明 :转化线辣椒不仅能抵抗CMV和TMV的单独侵染 ,而且还能抵抗CMV和TMV的复合侵染。转化线辣椒表现为系统症状延迟出现 7 15d ,显症株率和病害严重度级别大幅度降低 ,CMV和TMV在接种叶、新生叶中的病毒含量明显减低。转基因线辣椒原生质体作为研究试材接种CMV ,测定病毒含量结果表明 :CMV病毒的增殖在转基因线辣椒原生质体内受到明显抑制。在CMV接种浓度为 4 0 μg/mL ,感染原生质体 4 8h后 ,CP(- )植株原生质体内CMV是CP( )的 4 .2倍。这一结果揭示了转基因线辣椒具有抑制病毒增殖的抗病性。     

抗TMV和CMV双价转基因烟草纯合系进入大田试验

植物病毒病被称为作物生长和发育的“癌症”,常造成产量降低、品质下降乃至绝产。植物抗病毒病基因工程研究采用多种抗病毒策略。通过基因转移使植物产生较明显的抗病毒病的功能,在农业生产中具有可应用的良好前景。中国科学院微生物研究所、河南省农科院植物保护研究所。中国农科院烟草研究所的科研人员共同合作,针对国内烟区产生主要危害的烟草花叶病毒(TMV)和黄瓜花叶病毒(CMV)及上述两种病毒混合感染的问题,采用双价(TMV     

表达黄瓜花叶病毒外壳蛋白的转基因番茄抗黄瓜花叶病毒侵染

通过土壤农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导将黄瓜花叶病毒外壳蛋白(CMV CP)的cDNA成功地引入番茄(Lycopersicon esculentum)植株中,并得到转基因植株。用强致病力CMV株系接种后,表达CMV外壳蛋白的转基因植株表现出对CMV侵染的抗性。转基因植株RI代的抗性基因以接近3:1比例分离。对R_1代接种CMV后,表达CMV CP的植株病症减轻,发病率、病情指数及病毒积累量明显低于对照。病症出现推迟1个多月。     

浙江油菜花叶病毒类型研究

浙江各地引起油菜花叶病的病毒类型有芜菁花叶病毒(TpMV)、黄瓜花叶病毒(CMV)、菸花叶病毒(TMV)及芜菁花叶病毒和黄瓜花叶病毒的复合病(TpMV+cMV)。芜菁花叶病毒有TpMV98。和TpMV98 两个毒株,主要区别： TpMV98不侵染心叶菸,TpMV58 侵染心叶菸引起的系统性枯斑和系统性环斑能随环境的影响相互转变。黄瓜花叶病毒有CMV69和CMV72 两个毒株,主要区别：CMV69,回接不上本地油菜,CMV72 能回接上本地油菜。菸花叶病毒毒株(TMV45)侵染多种十字花科植物,在胜利油菜上引起系统花叶,在苋桥红萝卜上是无病状带毒,在农特400号菸上引起局部枯斑。TPMV98和CMV69 或CMV72 形成复合病,可以汁液接种分离,再混合再分离。根据采集样品按类型和毒株来看,浙江大田油菜花叶病,绝大多数是芜菁花叶病毒类型中的TpMV98毒株,复合病和黄瓜花叶病毒分布也相当广。辣根(Cochlearia armoracia L.)上所采的四个样品均属芜菩花叶病毒中侵染心叶菸的TpMV58毒株,辣根的宿根可以保存病毒,可能是这一毒株的越夏寄主之一。     

黄瓜花叶病毒和烟草花叶病毒在双抗转基因线辣椒内的增殖

本试验以转化CMV-CP和TMV-CP基因的转基因线辣椒纯合系植株作为研究试材,比较了单独 或混合接种CMV和TMV后,转化线辣椒的抗病性表达特点,并测定了两种病毒在植株体内的病 毒含量.结果表明转化线辣椒不仅能抵抗CMV和TMV的单独侵染,而且还能抵抗CMV和TMV的 复合侵染.转化线辣椒表现为系统症状延迟出现7-15d,显症株率和病害严重度级别大幅度降低, CMV和TMV在接种叶、新生叶中的病毒含量明显减低.转基因线辣椒原生质体作为研究试材接 种CMV,测定病毒含量结果表明CMV病毒的增殖在转基因线辣椒原生质体内受到明显抑制. 在CMV接种浓度为40μg/mL,感染原生质体48h后,CP(-)植株原生质体内CMV是CP(+)的4.2倍 .这一结果揭示了转基因线辣椒具有抑制病毒增殖的抗病性.     

黄瓜花叶病毒卫星RNA致弱辅助病毒的机理

分析了卫星RNA致弱的黄瓜花叶病毒 (CMV)侵染的烟草叶绿体内的CP浓度与花叶症状的严重程度成正相关 .用番茄不孕病毒 (TAV)接种表达CMV卫星RNA的转基因烟草叶绿体中 ,TAV- CP含量明显比不含卫星RNA的TAV株系侵染的低 ,而在细胞质中TAV -CP含量无差别 .用完整游离叶绿体进行体外跨膜运输试验 ,CMV- CP能快速进入离体叶绿体 ,CP降低叶绿体动力学荧光光谱 .将CMV的CP基因与 1 ,5 二磷酸核酮糖羧化酶小亚基引导肽基因进行体外拼接 .借助农杆菌转化烟草 .转基因烟草表现出黄化、根系发育受抑制 ,产生类似病毒侵染的症状 .     

黄瓜的重组育种

在世界占首位的种苗公司、埼玉原种育成会利用基因重组技术培育黄瓜种子,并从2年前就与植物工学研究所合作。在4月召开的第81届日本育种学会联名发表了黄瓜组织培养的再生和使用土壤杆菌导入外源基因的研究成果。向黄瓜导入基因再生植物体的技术基础研究基本结束。据植物的工程研究所讲,还没有互换共同进行育种的正式合同,正在观察事业计划调制时间表。如签订合同,植物工程研究所对黄瓜进行基因操作,提供母本,埼玉原种育成会决定使其母本与手中?娴哪     

西安地区瓜类病毒病的鉴定及防治

西安地区195个瓜类病毒病样的鉴定结果表明,各种瓜类上的病毒为甜瓜花叶病毒(MMV)和黄瓜花叶病毒(CMV)两种。西葫芦、笋瓜、甜瓜、南瓜以及黄瓜上,以引致花叶的MMV为主(一般占90％以上),其次是黄化皱缩病状的CMV。西瓜只有MMV;冬瓜和丝瓜则为CMV。甜瓜和西葫芦上还分离到CMV的一个新株系,西瓜可以作为以上两种病毒的鉴别寄主。     

两株黄瓜花叶病毒卫星RNA的竞争与共存研究

通过体外转录方法 ,将大小分别为 36 9nt和 385nt的 2个黄瓜花叶病毒 (Cucumbermosaicvirus,CMV)的卫星RNAYi和Yns共同与不含卫星的辅助病毒株CMV_CNa进行假重组 ,接种CMV系统寄主心叶烟。结果表明 :在接种5d的接种叶上同时检测到卫星RNA_Yi和卫星RNA_Yns;在系统叶上 ,接种 5d和 10d亦可同时检测到 2株卫星 ;但接种 15d ,在系统叶组织中只检测到卫星RNA_Yi。再将接种 5d的接种叶扩大接种到几种不同的指示植物后 ,经dsRNA抽提 ,也只获得 1条与卫星RNA_Yi大小相符的条带。通过假重组病毒株中分别获得卫星RNA并测序 ,确定2个卫星RNA的序列没有变化。卫星RNA_Yns和Yi在辅助病毒CMV_CNa作用下 ,表现出明显的竞争性 ,它们在辅助病毒中不能形成稳定的共存关系。     

应用烟草花叶病毒弱毒疫苗N_(14)和卫星核糖核酸生防制剂S_(52)防治番茄病毒病的试验研究

1983—1986年的试验结果表明,应用烟草花叶病毒(TMV)弱毒疫苗N_(14)和黄瓜花叶病毒(CMV)卫星核糖核酸生防制剂S_(52)二联接种免疫番茄,能有效地防治TMV和CMV对番茄的危害。其结果是:经过免疫的番茄比不免疫的番茄病株率下降25.2～45.4％;病情指数下降16.1～31.3;每亩增产率达到22.3～44.9％。 1986年山西省大面积示范约958亩,增产幅度也均在20％以上。     

病毒卫星RNA及其致弱病毒的机理──我国病毒学基础研究进展之一例

病毒卫星ＲＮＡ及其致弱病毒的机理──我国病毒学基础研究进展之一例田波（中国科学院微生物所分子病毒与生物工程研究室,北京１０００８０）１卫星ＲＮＡ的本质和生物学地位病毒卫星ＲＮＡ是美国ＫａＰｅｒ等于１９７６年在黄瓜花叶病毒中首先发现的［１］,它是伴随病...     

黄瓜花叶病毒卫星RNA XJs1侵染性cDNA克隆构建及其生物学功能初步研究

利用RT_PCR的方法,获得了黄瓜花叶病毒卫星RNA XJs1的全长侵染性cDNA克隆pMSC20。序列分析显示,XJs1全长384nt(GenBank登录号:DQ070748),比较XJs1与具有代表性的CMV卫星RNA的序列结构表明,在XJs1核苷酸序列的325nt~350nt间,具有典型的坏死型卫星RNA保守序列。通过体外转录,将XJs1与不含卫星RNA的辅助病毒分离物CMV_AH组合接种普通烟和心叶烟并进行检测。初步研究结果表明,XJs1为一致弱卫星RNA。     

用培养细胞检定番茄的有毒物质,应用于重组番茄安全性评价

农林水产省食品综合研究所食品机能部健全性评价研究室主任一色贤司等与京都府农业综合研究所、国立卫生试验所、农林水产省蔬菜、茶叶试验场合作用培养动物细胞开发了生物检测番茄有毒成分——番茄素的生物鉴定法。将于5月12日在东京召开的日本食品卫生学会上发表此项成果。