山楂叶螨对三氯杀螨醇抗性研究初报

采用FAO规定的测定叶螨抗药性的玻片浸渍法,测定了我国北方苹果园的主要害螨——山楂叶螨对三氯杀螨醇的抗性。连续5年使用三氯杀螨醇的试验结果表明,山楂叶螨种群对这种杀螨剂的抗性指数是7.5。抗性种群的异质性明显大于敏感种群。表明抗性种群有形成高抗种群的趋势,像这种类型的果园,应减少三氯杀螨醇的用量,以延缓抗性的发展。     

二斑叶螨对联苯菊酯抗药性的PASA快速检测技术建立与应用

【目的】二斑叶螨Tetranychus urticae Koch是世界性的重要农业害螨,其抗药性发展严重阻碍了对该螨的科学防控。为了实现田间二斑叶螨对菊酯类杀虫剂抗药性的早期快速检测,本研究拟建立二斑叶螨对联苯菊酯的特异性等位基因PCR(PCR amplification of specific alleles,PASA)检测技术。【方法】玻片浸渍法测定了联苯菊酯对二斑叶螨不同种群的毒力,克隆了二斑叶螨钠离子通道结构域IIIS6的DNA片段,基于该片段中包含的抗性和敏感种群中的点突变,建立了PASA检测技术,并应用于二斑叶螨不同种群中抗性基因F1538I点突变频率的检测。【结果】与室内相对敏感种群相比,二斑叶螨北京通县和海南三亚种群均对联苯菊酯产生了抗药性,LC50分别为1 982.6 mg/L和2 767.4 mg/L,抗性倍数分别为6.0倍和8.4倍;PASA检测结果表明二斑叶螨室内相对敏感种群中存在杂合子个体,F1538I点突变频率为10.0%,而北京通县和海南三亚种群中该突变频率则分别达50.0%和53.3%。【结论】建立的PASA技术可以快速检测二斑叶螨田间种群是否存在与击倒抗性相关的基因点突变,从而判断其对菊酯类杀虫剂的抗药性发展。     

二斑叶螨田间种群对阿维菌素的抗性及抗性相关基因表达分析

【目的】二斑叶螨Tetranychus urticae Koch是为害多种农作物的世界性重大害螨。本研究旨在明确二斑叶螨不同田间种群对阿维菌素的抗药性、抗性相关基因的突变频率及其表达量变化。【方法】采用药管浸叶法测定了我国二斑叶螨8个地理种群对阿维菌素的抗药性并检测其抗性基因突变频率,结合荧光定量PCR技术分析了高抗种群中抗性相关基因表达量变化。【结果】测试的二斑叶螨8个田间种群均对阿维菌素具有抗药性。北京密云、山东潍坊、海南三亚和湖南长沙种群均对阿维菌素产生了极高水平的抗性,抗性倍数分别为1 526.75,481.00,315.25和160.75倍,而北京通县、北京海淀、山西运城和山东泰安种群对阿维菌素的抗性倍数达54.38~136.38倍,处于高抗性水平。二斑叶螨对阿维菌素抗性相关的谷氨酸氯离子通道基因Glu Cl的突变频率在各个田间种群中存在差异。北京密云种群中Glu Cl的突变频率最高(91.7%),其次是山东潍坊(66.7%)和海南三亚(63.3%)种群;山西运城种群最低(13.3%),且点突变频率与抗性倍数之间呈显著的正相关(P0.05)。与相对敏感种群相比,高抗性二斑叶螨种群中Glu Cl和γ-氨基丁酸受体基因GABAR表达量显著下降。【结论】二斑叶螨田间种群普遍对阿维菌素产生了高水平抗性,抗性相关基因Glu Cl的点突变及其表达量的降低可能与田间抗药性产生相关;田间防治二斑叶螨应避免使用阿维菌素。     

数量遗传学在害虫种群抗性进化研究中的应用

自1908年Melander[1]首次发现美国的梨园蚧AspidiotusperniciosusComstock对石硫合剂有抗药性以来,已有500多种害虫和害螨对一种或多种不同类群的杀虫剂产生了抗药性[2]。Dobzhansky[3]认为,杀虫剂抗性是一种进化现象,是害虫种群内部遗传结构在杀虫剂选择作用下持续变化的外在表现。目前,害虫抗性种群内部遗传结构在杀虫剂选择作用下动态变化的研究主要集中在抗性等位基因频率和抗性遗传力两个方面。遗传力估计是数量遗传学中研究生物群体遗传结构变化趋势的基本方法之一,由于这种方法不需对控制性状的基因数作任何假设,因此在不清…     

害虫及害螨对阿维菌素抗药性研究进展

阿维菌素(avermectins)是一类新型高效广谱的生物源农药,对多种害虫及害螨具有极好的防效。随着阿维菌素在害虫及害螨防治中的广泛应用,害虫和害螨对其的抗性问题日益受到关注。文章综述国内外的最新研究结果表明:小菜蛾Pluttella xylostella(L.)、二斑叶螨Tetranychus urticate Koch等已对阿维菌素产生抗性,对阿维菌素产生抗性的害虫和螨并不总是表现适合度劣势,且抗性一旦产生敏感性较难以恢复;抗性遗传多数由多基因、不完全隐性控制;抗性机理涉及多种因素。综合分析发现害虫和螨对阿维菌素存在较大的、潜在抗性风险。     

截形叶螨对阿维·哒螨灵的抗性遗传方式研究

【目的】明确截形叶螨Tetranychus truncatus Ehara对阿维·哒螨灵药剂的抗性遗传方式,为今后合理使用药剂,有效地制定害螨抗性治理策略提供一定的理论指导。【方法】通过杂交和回交试验,确定截形叶螨抗阿维·哒螨灵种群的显性度(D)、细胞质影响因子和遗传基因。【结果】所测得的截形叶螨抗性种群的杂交F1代(SS♀?RR♂和RR♀SS♂)的显性度D值分别为0.625和0.802,均在0 D 1范围内,表明抗性都由不完全显性基因控制;两个D值(DSR和DRS)95%置信限有重叠,并且经t-检验,两个D值不存在显著差异(P0.05),证明截形叶螨对阿维·哒螨灵的抗性遗传受母体或核外效应的影响不大,其抗性基因在常染色体上;回交F2代两个种群的(BC1SR和BC1RS)的实际死亡率和期望值经χ2检验,均差异显著,证实由多基因控制。【结论】不完全显性多基因控制的遗传方式产生的抗谱很宽,抗性一旦产生则很难延缓其抗性的迅速发展,因此田间应用该药剂时应交替轮换不同作用机制的药剂,重点采用预防性抗性治理策略。     

朱砂叶螨对不同农药抗药性发展趋势的研究

探讨朱砂叶螨室内种群的抗药性发展状况。实验结果表明,氧化乐果、三氯杀螨醇、双甲脒、哒螨灵对于朱砂叶螨种群,只要给予一定的选择压力,经数次用药该螨就会发展对这些杀虫(螨)剂的抗性,且随着用药次数的增加,各品系抗药性呈现上升趋势。在相同条件下,该螨对上述药剂的抗性发展速率不同,4种杀虫(螨)剂抗性发展速率由大到小依次为:氧化乐果、双甲脒、三氯杀螨醇、哒螨灵。     

朱砂叶螨抗药性监测

本文采用药膜法建立了朱砂叶螨Tetranychus cinnabarinus（Boisduval）对5种杀螨剂的敏感基线,并对6个不同地理种群的朱砂叶螨进行了抗药性监测,结果表明：5种药剂杀螨活性由高到低分别为阿维菌素〉丁氟螨酯〉氧化乐果〉炔螨特〉甲氰菊酯,其对朱砂叶螨雌成螨的LC50值分别为0.08、2.19、67.89、201.19和605.27mg/L;朱砂叶螨各地理种群已对甲氰菊酯和炔螨特产生了低、中水平的抗性,其抗性倍数分别介于2.93～16.22与4.85～14.35之间,其中云南种群对这2种杀螨剂抗性最高,对氧化乐果与丁氟螨酯处于敏感性降低阶段,其抗性倍数分别介于2.35～4.26与1.56～2.11之间,对阿维菌素还未产生明显抗性;对阿维菌素和甲氰菊酯的增效剂生物测定结果表明,三类解毒酶系（多功能氧化酶、谷胱甘肽S-转移酶和酯酶）都不同程度地参与了朱砂叶螨抗药性的形成。     

拟长毛钝绥螨抗乐果品系的筛选及遗传分析

生物防治手段所用生物物种的抗药性遗传改良是害虫综合治理的一个新研究领域.本文以农业害螨的重要捕食性天敌——拟长毛钝绥螨Amblyseius Pseudolongispinosus Xin,Liang et Ke的一个群体为材料,经杀虫剂乐果19次选择后,使抗药性比原来增长10.02倍.拟长毛钝绥螨抗乐果品系是由多基因隐性遗传的.     

害螨抗药性测定方法的技术改进

作者在进行害螨抗药性监测及治理技术研究过程中,发现联合国粮农组织（FAO）推荐的玻片浸液法操作困难,测定成功率低,难以在基层推广应用。技术改进后的测试方法操作简便,可显著提高测定速度,害螨机械损伤减少,明显降低待测害螨粘着后观察期间自然死亡率和处理后对照死亡率,测定结果的准确程度提高,可供进行抗药性研究参考。现将研究结果报道如下。1供试材料与害螨死亡标准1．1供试害螨：为室内饲养山楂叶螨TetranychusviennensisZacher的F1代2日龄雌成螨。1．2供试药品及浓度设计：97．6％久效磷技术级原药,配制成5×10－6、10…     

朱砂叶螨抗氧化乐果品系选育及遗传分析

对采自棉田的朱砂叶螨种群使用氧化乐果选择压（６６．６７－１３３．３３μｌ／ｌ）１６次筛选后,抗氧化乐果由８、３３倍上升到３６、９３倍。利用此抗性品系（Ｒ）和采自河南省固始县的敏感品系（Ｓ）杂交和回交,研究了朱砂叶螨抗氧化乐果的遗传方式,正交和反交（ＳＲ和ＲＳ）Ｆ１代的ＬＣ－Ｐ线介于Ｓ与Ｒ之间偏向Ｒ方,显性系数ＤＳＲ和ＤＲＳ分别为０．５６７９和０．５６５９,表明抗性是由不完全显性基因控制,对Ｆ１杂合     

山楂叶螨对螺螨酯的抗药性及对七种杀螨剂的交互抗性

【目的】筛选山楂叶螨Amphitetranychus viennensis Zacher对螺螨酯的抗药性,并明确其对7种杀螨剂的交互抗性。【方法】采用室内生物测定的方法,研究山楂叶螨对螺螨酯的抗性发展趋势及其交互抗性。【结果】用螺螨酯筛选山楂叶螨21代,抗性上升11.65倍;抗性品系对乙螨唑存在明显的交互抗性,抗性倍数为6.30;对噻螨酮存在负交互抗性,抗性倍数为0.69;对阿维菌素、炔螨特和三唑锡不存在交互抗性,抗性倍数分别为1.15、1.25、1.78;对哒螨灵和联苯肼酯有产生交互抗性的可能,抗性倍数分别为3.46和2.79。【结论】螺螨酯防治山楂叶螨存在抗性风险,抗螺螨酯的山楂叶螨品系会产生交互抗性,上述结果可为果园科学使用螺螨酯和合理轮换用药提供理论依据。     

棉花叶螨对三氯杀螨醇和氧乐果的抗性动态

对棉花叶螨（优势种朱砂叶螨）抗三氯杀螨醇和氧乐果的系统监测表明,棉田化防前期是当年棉花叶螨抗性最低点,大面积化防后抗性水平明显上升。化防停止后至下年春季,抗性呈下降趋势,反映在系统监测动态上,棉花叶螨抗性水平曲折性上升。对三氯杀螨醇和氧乐果的抗性分别由1986年的5．28～6．65倍和9．24～11．26倍上升到1992年的8．55～15．57倍和19．23～28．48倍。     

二斑叶螨取食抗、感螨木薯品种对茉莉酸信号途径基因表达的影响

明确二斑叶螨取食影响木薯茉莉酸信号途径基因表达的害螨密度和取食时间效应,为阐明茉莉酸信号途径在木薯抗虫性中的重要作用及抗螨种质资源鉴定评价提供理论依据及参考指标。以抗螨木薯品种C1115和感螨木薯品种面包为材料,分析与植物防御相关的茉莉酸号信号途径基因(DAD1、LOX2、OPR3和JAR1)在二斑叶螨以不同虫口密度(15、25、35、45、50和55头螨/叶)取食不同时间(1、2、4和8 d)后的表达量变化情况。结果表明,以45-50头螨/叶的害螨密度分别取食抗、感螨木薯品种2 d后,LOX2、OPR3和JAR1的表达量均较螨害前显著提高,并且上述3个基因在抗螨木薯品种中的表达量显著高于感螨木薯品种,而DAD1的表达量随害螨密度的提高和取食时间的增加波动较大。在较高的害螨密度和较短的为害时间处理时,茉莉酸信号途径基因LOX2、OPR3和JAR1在抗螨木薯品种中的表达量显著高于感螨木薯品种,LOX2、OPR3和JAR1可能与木薯对二斑叶螨的抗性有关。     

抗药性叶螨的种群参数和相对适合度

朱砂叶螨对氧化乐果、三氯杀螨醇、双甲脒和哒螨灵产生抗性后（抗药性系数分别为152．83倍、55．59倍、62．61倍和15．67倍）,繁殖力均显著降低,且发育加速。通过组建各品系生命表得知,该螨抗氧化乐果品系、抗三氯杀螨醇品质、抗双甲脒品系和抗哒螨灵品系的相对适合度分别为0．53、0．62、0．59和0．64,均小于1,具有明显的适合度缺陷。抗药性系数和相对适合度呈直线负相关。     

二斑叶螨对螺螨酯的抗性选育及其解毒酶活性测定

用螺螨酯对二斑叶螨Tetranychus urticae Koch进行35代抗性选育,抗性指数达到8.34,并在选育过程中,对二斑叶螨解毒酶的活性进行测定。结果表明,随着选育代数的增加,抗性增强,细胞色素P450活性亦显著提高,而羧酸酯酶、谷胱甘肽转移酶活性较敏感品系差异不显著。说明二斑叶螨对螺螨酯抗药性的增强与其体内细胞色素P450活性的增强有关。     

二点叶螨对甲氰菊酯、氧乐果和四螨嗪抗药性的选育、衰退和恢复

以兰州吐鲁沟公园的二点叶螨Tetranychus urticae 为敏感品系,分别用氧乐果、甲氰菊酯、四螨嗪喷雾处理15次,其抗性水平分别为38.5、479.8和67.3倍。将抗性品系分别与敏感品系进行杂交和回交的结果表明：抗氧乐果品系的显性系数DRS（R♀×S♂）为0.4700、D_SR（S♀×R♂）为0.4749;抗甲氰菊酯品系的DRS（R♀×S♂）为0.5155, DSR为0.5237;抗四螨嗪品系的DRS为0.3134, DSR为0.2466。表明二点叶螨对这3种药剂的抗性均是由单个不完全显性基因所控制。在连续10个月不接触药剂的情况下,3个抗性品系的抗药性都有下降,抗氧乐果品系的抗性下降最快,只有敏感品系的抗性倍数的3.6倍;抗甲氰菊酯种群的抗性下降较慢,为敏感品系的95.9倍。再经甲氰菊酯、氧乐果、四螨嗪分别连续15次喷雾处理后,3个抗性种群的抗性水平又再度回升,抗甲氰菊酯品系回升较快,抗性为敏感品系的523.5倍,抗四螨嗪品系次之,抗氧乐果的品系抗性恢复最慢。     

山楂叶螨和苹果全爪螨抗药性的研究

经1984～1988年测定,在河北省昌黎及附近地区的果园内,山楂叶螨对三氯杀螨醇、杀虫脒、水胺硫磷、E605和乐果分别产生了5～99倍的抗药性;苹果全爪螨对三氯杀螨醇、杀虫脒和水胺硫磷分别产生了2～4倍的抗药性。但两种叶螨对尚未用过的拟除虫菊酯类杀虫杀螨剂功夫菊酯(Karate)未产生明显的抗性。     

朱砂叶螨不同抗性品系酯酶同工酶研究

在室内模拟田间药剂的选择压力,用3种不同药剂及其组合(轮用和混用)对朱砂叶螨Tetranychus cinnabarinus 进行抗药性选育.经过40余代的筛选,朱砂叶螨对甲氰菊酯、阿维菌素和哒螨·阿维混剂分别产生了68.5、8.7和6.7倍的抗性;甲氰菊酯和阿维菌素混用和轮用分别对甲氰菊酯产生了5.6倍和28.7倍抗性.朱砂叶螨各品系酯酶同工酶电泳结果和同工酶谱谱带密度扫描表明,与敏感品系相比,各抗性筛选品系的酯酶活性均有不同程度增加;阿维菌素抗性品系活性最强,酯酶带迁移距离明显远于其他抗性品系,表明该品系酯酶体系中存在变构酯酶.     

二斑叶螨不同抗性品系最佳内参基因的筛选及CYP392E亚家族基因的表达分析

【目的】 筛选二斑叶螨Tetranychus urticae敏感品系（SS）、 抗阿维菌素品系(Av-R)和抗螺虫乙酯品系（Sp-R）中合适的内参基因, 研究二斑叶螨不同抗性品系CYP392E亚家族基因表达水平的变化。【方法】采用实时荧光定量PCR （quantitative real time PCR, qRT-PCR）技术, 对二斑叶螨α-tubulin, β-actin, ELFn, GAPDH, 5.8S rRNA基因和SDHA共6个看家基因的表达稳定性进行分析以期筛选出合适的内参基因, 并在此基础上进一步分析二斑叶螨不同品系P450酶系CYP392E亚家族基因的表达量差异。【结果】在二斑叶螨SS, Av-R和Sp-R品系中稳定性最高的内参基因为ELFn。以ELFn为内参基因, CYP392E7基因相对表达量在二斑叶螨Av-R品系中显著高于SS品系(P<0.05), 为后者的2.18倍, 而在Sp-R品系和SS品系中差异不显著; 其余基因的相对表达量在2个抗性品系中均没有增加, Av-R品系的CYP392E4, CYP392E9和CYP392E10基因以及Sp-R品系的CYP392E1和CYP392E9基因相对表达量甚至显著下调, 分别为SS品系的48%, 74%, 65%, 63%和73%。【结论】在二斑叶螨SS, Av-R和Sp-R品系中ELFn为理想的内参基因, Av-R品系CYP392E4, CYP392E7, CYP392E9和CYP392E10基因相对表达量的显著变化可能与二斑叶螨对阿维菌素的抗性形成有关, Sp-R品系CYP392E1和CYP392E9基因也可能与二斑叶螨对螺虫乙酯的抗性形成有一定联系。